Name: Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: 배우세요 마우스 골수 유래 중간엽줄기세포의 정제, 증식 및 유세포측정법 기반 표현형 분석 방법을. 이 프로토콜은 비용 효율적인 분리법으로 높은 순도의 세포를 확보하여 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application+of+human+bone+marrow+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application of human bone marrow mesenchymal stem/stromal cells.</a> Int J Mol Sci. 21 (3), 708(2020).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Transl%22%5BJournal%5D)">An improved protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> J Orthop Transl. 3 (1), 26-33 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+apoptotic+BMSCs+ameliorate+osteoporosis+via+transporting+regenerative+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from apoptotic BMSCs ameliorate osteoporosis via transporting regenerative signals.</a> Theranostics. 14 (9), 3583-3602 (2024).</li>
<li>Maridas, D. E., Rendina-Ruedy, E., Le, P. T., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+and+osteoclast+progenitors+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and differentiation of bone marrow stromal cells and osteoclast progenitors from mice.</a> J Vis Exp. (131), e56750(2018).</li>
<li>Chu, D. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose+tissue+stem+cells+for+therapy%3A+An+update+on+the+progress+of+isolation%2C+culture%2C+storage%2C+and+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Adipose tissue stem cells for therapy: An update on the progress of isolation, culture, storage, and clinical application.</a> J Clin Med. 8 (7), 917(2019).</li>
<li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+in+fibrotic+diseases%E2%80%94the+two+sides+of+the+same+coin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells in fibrotic diseases—the two sides of the same coin.</a> Acta Pharmacol Sin. 44 (2), 268-287 (2023).</li>
<li>Carbone, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cervical+dislocation+as+a+humane+euthanasia+method+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Assessing cervical dislocation as a humane euthanasia method in mice.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 51 (3), 352-356 (2012).</li>
<li>Swamydas, M., Lionakis, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+purification+and+labeling+of+mouse+bone+marrow+neutrophils+for+functional+studies+and+adoptive+transfer+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation, purification and labeling of mouse bone marrow neutrophils for functional studies and adoptive transfer experiments.</a> J Vis Exp. (77), e50586(2013).</li>
<li>Grossner, T., Haberkorn, U., Hofmann, J., Gotterbarm, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+basal+cell+culture+media+upon+the+osteogenic+response+of+hMSCs+evaluated+by+99mTc-HDP+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of different basal cell culture media upon the osteogenic response of hMSCs evaluated by 99mTc-HDP labeling.</a> Int J Mol Sci. 23 (11), 6288(2022).</li>
<li>Janda, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surrogate+Wnt+agonists+that+phenocopy+canonical+Wnt+and+%CE%B2-catenin+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Surrogate Wnt agonists that phenocopy canonical Wnt and β-catenin signalling.</a> Nature. 545 (7653), 234-237 (2017).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+Alizarin+Red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of the Alizarin Red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> Int J Mol Sci. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+osteogenic+differentiation+of+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+in+mice+inhibited+by+cyclophosphamide+with+psoralen%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+J+Tissue+Eng+Res%22%5BJournal%5D)">Restoration of osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in mice inhibited by cyclophosphamide with psoralen.</a> Chin J Tissue Eng Res. 29 (1), 16-23 (2025).</li>
<li>Papaccio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+Cancer+cells%2C+cancer+stem+cells%2C+and+mesenchymal+stem+cells%3A+Influence+in+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Concise review: Cancer cells, cancer stem cells, and mesenchymal stem cells: Influence in cancer development.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (12), 2115-2125 (2017).</li>
<li>Kolf, C. M., Cho, E., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells.+Biology+of+adult+mesenchymal+stem+cells%3A+Regulation+of+niche%2C+self-renewal+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells. Biology of adult mesenchymal stem cells: Regulation of niche, self-renewal and differentiation.</a> Arthritis Res Ther. 9 (1), 204(2007).</li>
<li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li>
<li>Abdallah, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reliable+protocol+for+long-term+culture+of+murine+bone+marrow+stromal+%28mesenchymal%29+stem+cells+that+retained+their+in+vitro+and+in+vivo+stemness+in+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">A simple and reliable protocol for long-term culture of murine bone marrow stromal (mesenchymal) stem cells that retained their in vitro and in vivo stemness in long-term culture.</a> Biol Proced Online. 21 (1), 3(2019).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+sequencing+reveals+gene+expression+signatures+associated+with+bone+marrow+stromal+cell+subpopulations+and+time+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Single cell sequencing reveals gene expression signatures associated with bone marrow stromal cell subpopulations and time in culture.</a> J Transl Med. 17 (1), 23(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1mL 주사기(22G 주사기 바늘)</td><td>친절한 그룹(KDL)</td><td>60017031</td><td></td></tr><tr><td>1단계 NBT/BCIP&nbsp;</td><td>피어스 바이오테크놀로지, Inc.</td><td>34042</td><td>알칼리성 포스파타제 염색</td></tr><tr><td>10% 중성 완충 포르말린</td><td>웩시스</td><td>5200250</td><td>세포 고정</td></tr><tr><td>6-웰 플레이트</td><td>랩셀렉트</td><td>11110</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>랩셀렉트</td><td>11310</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>40 & 무; m 셀 스트레이너</td><td>코르니그</td><td>352340</td><td>응집물을 제거하기 위한 여과</td></tr><tr><td>50mL 주사기</td><td>친절한 그룹(KDL)</td><td>60017040</td><td></td></tr><tr><td>75% 에탄올&nbsp;</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>31009001</td><td>쥐의 피부 소독</td></tr><tr><td>알리자린 레드 S</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>A5533</td><td>칼슘 침전물 및 석회화된 결절 검출</td></tr><tr><td>APC CD44 단클론 항체 (클론:IM7)</td><td>e바이오사이언스</td><td>17-0441-82</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>APC 쥐 IgG2b 카파 아이소타입 대조군(클론:eB149/10H5)</td><td>e바이오사이언스</td><td>17-4031-82</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>오토 클레이 브</td><td>일본 히야마 주식회사</td><td>HVE-50</td><td>멸균 수술 기구</td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>써모 피셔 테크놀로지(중국)Co., Ltd.</td><td>300583057</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>Cytoflex 유량 측정</td><td>베크만 쿨터&nbsp;</td><td>A00-1-1102</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>덱사메타손</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>디4902</td><td>BMSC 골형성 분화</td></tr><tr><td>접시(100 mm)</td><td>코 닝</td><td>430167</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>접시(60 mm)</td><td>코 닝</td><td>430166</td><td>이식 중 샘플 배치&nbsp;</td></tr><tr><td>소독 화장</td><td>상하이 홍룡 산업 Co., Ltd.</td><td>20230627</td><td>쥐의 피부 소독</td></tr><tr><td>일회용 멸균 장갑</td><td>상하이 홍룡 산업 유한 회사</td><td>YT21131</td><td>멸균 작동</td></tr><tr><td>더블 라이언 방사선 조사 설치류 다이어트</td><td>쑤저우 Shuangshi 실험 동물 사료 기술 Co., Ltd.</td><td>GB 14924.3</td><td>동물 사료</td></tr><tr><td>태아 소 혈청&nbsp;</td><td>상하이 바이오선 과학 및 테크(주)</td><td>BS-0002-500</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>FITC 햄스터 항쥐 CD29 (클론: Ha2/5)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>555003</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC 햄스터 IgM, & 1 이소형 대조군(클론:G235-1)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>553960</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>젤라틴 (0.1%)</td><td>오리셀</td><td>GLT-11301</td><td>세포의 접착 능력 향상</td></tr><tr><td>IVC 마우스 케이지</td><td>쑤저우 원숭이 왕 동물 실험 장비 기술 유한 회사</td><td>HH-MMB-2</td><td>동물 장벽</td></tr><tr><td>L-아스코르브산</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>A8960</td><td>BMSC 골형성 분화</td></tr><tr><td>마크 펜</td><td>얼룩말 무역(심천) Co., Ltd.&nbsp;</td><td>YYST5</td><td>페트리 접시에 셀룰러 정보를 표시하십시오.</td></tr><tr><td>MEM 알파 수정 (1X)</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>SH30265</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>마우스 골수 중간엽 줄기 세포 지방 생성 분화 키트</td><td>Cyagen</td><td>MUXMX-90031</td><td>BMSC 지방 생성 분화&nbsp;</td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ti2 도립 현미경 Synstem</td><td>일본 니콘 코포라틴</td><td>Ti2-U</td><td>세포를 관찰하고 사진을 찍는다</td></tr><tr><td>안과용 가위&nbsp;</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>Y00030 JZ</td><td>피부를 자르다</td></tr><tr><td>안과용 핀셋</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>BS-ZER-S-100 바이오샤프</td><td>마우스 뼈 조직을 얻습니다.</td></tr><tr><td>파스퇴르 피펫</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>BS-XG-03M</td><td>배양 배지를 흡인합니다.</td></tr><tr><td>PE 쥐 항 마우스 CD31 (클론 : Ha2 / 5)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>553373</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>PE 쥐 IgG2a, &카파; 아이소타입 컨트롤(클론:R35-95)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>553930</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-Cyanine7 Ly-6A/E(Sca-1) 단클론 항체(클론:D7)</td><td>e바이오사이언스</td><td>25-5981-82</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-Cyanine7 쥐 IgG2a 카파 동형대조군(클론:eBR2a)</td><td>e바이오사이언스</td><td>25-4321-82</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>상하이 NianYue 생명 공학 유한 회사</td><td>2585636</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 쥐 항마우스 CD45 (클론: Ha2/5)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>561869</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>PerCP-Cy5.5 쥐 IgG2b, &카파; 아이소타입 컨트롤(클론:A95-1)</td><td>BD 바이오사이언스</td><td>550764</td><td>유세포 분석&nbsp;</td></tr><tr><td>메스</td><td>상하이 의료기기 수술 기구 공장? 그룹?(주)&nbsp;</td><td>J11010-10# JZ</td><td>쥐의 등 팔다리와 몸통을 분리하고 뼈에서 외부 조직을 제거합니다.</td></tr><tr><td>멸균 후드</td><td>써모 피셔 테크놀로지(중국)Co., Ltd.</td><td>에코0.9</td><td>수술 수술대</td></tr><tr><td>멸균 수술용 드레이프</td><td>허난 Huayu 의료 장비 Co., Ltd.</td><td>20160900</td><td>멸균 수술 영역 제공</td></tr><tr><td>튜브(50mL)</td><td>상하이 Baisai, 생명 공학 유한 회사&nbsp;</td><td>BLD-BL2002500</td><td>여과된 세포 용액 보관</td></tr><tr><td>트립신-EDTA(0.25%)</td><td>깁코</td><td>25200056</td><td>부착 세포 소화</td></tr><tr><td>&베타;-글리세로인산염</td><td>시그마-알드리치&nbsp;</td><td>지5422</td><td>BMSC 골형성 분화</td></tr></tbody></table>

purification, expansion, and flow cytometry-based phenotyping of mouse derived bone marrow mesenchymal stem cells

Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

마우스 유래 BMSC를 분리하고 약 2주 동안 배양하여 제3 계대(P3) BMSC를 생성했습니다(그림 3). 그림 3A에서 볼 수 있듯이, 골수에서 갓 추출한 세포는 눈에 보이는 지방 방울이 있는 단핵 상태로 남아 있었습니다. 배양 접시에 방추형 세포가 나타나 5일 배양일에 60%-80% 농도에 도달했습니다(그림 3B, C). P1-P3(그림 3D-F)에서 BMSC는 긴 방추체 또는 방추형 모양을 나타내며 단층으로 성장하고 세포 식민지 네트워크를 형성했습니다. 세포는 일반적으로 세포질이 맑고 세포사멸의 눈에 띄는 징후가 없는 적절한 간격을 유지했으며 ...

Mesenchymal stem cells (MSCs) are a population of stem cells that can self-renew and differentiate into multiple cell lineages. Among them, MSCs found in ...

purification-expansion-flow-cytometry-based-phenotyping-mouse-derived

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

유동세포계측법의 골수 조혈 progenitors의 유통뿐만 아니라 효율적으로 분리 고도 정화 조혈 줄기 세포 (HSCs)를 분석하는 방법을 설명합니다. 분리 절차는 본질적으로 세포 및 분자 연구를위한 HSCs를 정화 정렬 C-키트 + 세포와 세포의 자성 농축에 근거한다.

Murine 조혈 줄기 세포와 리니지 - 헌신 Progenitors의 Phenotypic 분석 및 절연

우리는 밀도 기울기 원심 분리하여 및 CellTracker 염료를 사용하여 호중구 라벨링 마우스 골수에서 호중구의 분리 및 정제를위한 프로토콜을 설명합니다. 이 스트림 기능 연구 또는 입양 전송 및 추적 실험 호중구의 큰 숫자를 얻기위한 간단하고 빠른 재생하고 경제적 인 방법을 나타냅니다.

분리, 정제 및 기능 연구 및 입양 전송 실험 쥐의 골수 호중구의 라벨링

우리는 cytometry에 의해 동시 표현의 기본 급성 골수성 백혈병 세포에 백혈병 줄기 세포 마커를 감지 하는 프로토콜 개요. 우리 3 조상 인구와 성숙의 정도 증가 함께 상 상속 LSC 인구를 측정 하는 방법을 보여 줍니다. 우리는 이러한 인구에 해당 환자-파생-xenografts의 존재를 확인 했다.

Flow Cytometry 최대 백혈병 줄기 세포 주 급성 골수성 백혈병 및 환자-파생-xenografts, 진단에 따라 추정 하

MDS 진단 기준 형태학 또는 비 유익한 세포 유전학의 부재에 어렵습니다. MFC는 MDS 진단 과정을 구체화 도움이 될. 임상 연습에 유용 될, MFC 분석 기반으로 해야 합니다 매개 변수 충분 한 특이성 및 감도, 그리고 데이터 다른 연산자 사이 재현 되어야 합니다.

데이터베이스 가이드-cytometry 골 골수성 세포 성숙의 평가 위한

식별 하 고 자석의 조합 및 형광 정렬 (맥 및 FACS)를 사용 하 여 murine 골에서 골수성 창시자의 6 하위 집합을 격리 하는 방법을 보여 줍니다. 이 프로토콜은 생체 외에서 문화 분석 (스 또는 액체 문화), 입양 전송 실험 vivo에서 및 RNA/단백질 분석에 대 한 사용할 수 있습니다.

식별 및 Oligopotent 및 계보 커밋된 골수성 창시자 마우스 골 수에서 격리

Xenobiotic efflux 펌프는 조혈 줄기와 전구 세포 (HSPC)에서 매우 활성화되어 미토콘드리아 막 잠재적 형광 염료인 TMRM의 압출을 유발합니다. 여기서, 우리는 유출 펌프 억제제인 Verapamil의 존재 에 있는 TMRM에 의하여 HSPC에 있는 미토콘드리아 막 전위를 정확하게 측정하는 프로토콜을 제시합니다.

에플로프 펌프 억제를 통해 조혈 줄기 및 전조 세포에서 미토콘드리아 막 전위성 유동 세포 측정 평가의 정확도 향상

이 방법은 마우스 대퇴골, 티바이어스 및 골반 뼈로부터 MEP 및 MKp의 혈류 세포질에 의한 정화를 설명합니다.

마우스 메가카요시테 전조자의 격리

여기에서 우리는 쥐 골수 세포를 표현형 조혈 줄기 및 전구 세포와 함께 지지하는 틈새 내피 및 중간엽 줄기 세포로 분리 및 염색하기 위한 간단한 프로토콜을 설명합니다. 내골 및 중앙 골수 영역에 위치한 세포를 풍부하게 하는 방법도 포함됩니다.

쥐 골수, 조혈 줄기 및 전구 세포, 기질 틈새 세포의 유세포 분석

이 프로토콜은 단일 세포 분류 방법을 사용하여 인간 중간엽 줄기 세포의 형광 활성화 세포 분류를 사용하는 방법을 설명합니다. 특히, 단일 세포 분류를 사용하면 다중 파라미터 유세포 분석 기반 접근법과 결합할 때 이종 집단에서 면역표현형 세포의 99% 순도를 달성할 수 있습니다.

인간 박리 낙엽 치아에서 면역 표현형 중간엽 줄기 세포의 단일 세포 분류

여기에서는 골수이형성 증후군 및 급성 골수성 백혈병의 쥐 모델에서 골수 미세환경 집단을 분리하고 특성화하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 이 기술은 질병 진행에 따라 내피 및 중간엽 기질 세포를 포함한 비조혈 골수 틈새의 변화를 식별합니다.

골수이형성 증후군 및 급성 골수성 백혈병의 골수 미세환경 집단 식별

배우세요 마우스 골수 유래 중간엽줄기세포의 정제, 증식 및 유세포측정법 기반 표현형 분석 방법을. 이 프로토콜은 비용 효율적인 분리법으로 높은 순도의 세포를 확보하여 재생의학 연구에 활용할 수 있습니다.

Purification, Expansion, and Flow Cytometry-Based Phenotyping of Mouse Derived Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

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