Name: Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 배우세요 과립 하이드로겔 내 3차원 세포 이동 정량화 방법을 공초점 현미경과 이미지 분석 소프트웨어를 활용하여 상처 치유 및 조직 재생 연구에 적용하는 기술을.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Jerka, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+endothelial+cell+migration%3A+Insights+into+fundamental+forces%2C+inflammation%2C+biomaterial+applications%2C+and+tissue+regeneration+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Bio+Mater%22%5BJournal%5D)">Unraveling endothelial cell migration: Insights into fundamental forces, inflammation, biomaterial applications, and tissue regeneration strategies.</a> ACS Appl Bio Mater. 7 (4), 2054-2069 (2024).</li>
<li>Edmondson, R., Broglie, J. J., Adcock, A. F., Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cell+culture+systems+and+their+applications+in+drug+discovery+and+cell-based+biosensors%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+Drug+Dev+Technol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cell culture systems and their applications in drug discovery and cell-based biosensors.</a> Assay Drug Dev Technol. 12 (4), 207-218 (2014).</li>
<li>Yamada, K. M., Sixt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+3D+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of 3D cell migration.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 20 (12), 738-752 (2019).</li>
<li>Grinnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+biology+in+three-dimensional+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices.</a> Trends Cell Biol. 13 (5), 264-269 (2003).</li>
<li>Kloxin, A. M., Kloxin, C. J., Bowman, C. N., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+cellularly+responsive+hydrogels+and+their+experimental+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of cellularly responsive hydrogels and their experimental determination.</a> Adv Mater. 22 (31), 3484-3494 (2010).</li>
<li>Solbu, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+cell+migration+in+hydrogels%3A+An+overview+of+relevant+materials+and+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Today+Bio%22%5BJournal%5D)">Assessing cell migration in hydrogels: An overview of relevant materials and methods.</a> Mater Today Bio. 18, 100537(2023).</li>
<li>Madl, C. M., Katz, L. M., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+bulk+hydrogel+degradation+by+simultaneous+control+of+proteolytic+cleavage+kinetics+and+hydrogel+network+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Macro+Lett%22%5BJournal%5D)">Tuning bulk hydrogel degradation by simultaneous control of proteolytic cleavage kinetics and hydrogel network architecture.</a> ACS Macro Lett. 7 (11), 1302-1307 (2018).</li>
<li>Daly, A. C., Riley, L., Segura, T., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogel+microparticles+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Hydrogel microparticles for biomedical applications.</a> Nat Rev Mater. 5 (1), 20-43 (2020).</li>
<li>Qazi, T. H., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granular+hydrogels+for+endogenous+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Granular hydrogels for endogenous tissue repair.</a> Biomater Biosyst. 1, 100008(2021).</li>
<li>Tanner, G. I., Schiltz, L., Narra, N., Figueiredo, M. L., Qazi, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granular+hydrogels+improve+myogenic+invasion+and+repair+after+volumetric+muscle+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Granular hydrogels improve myogenic invasion and repair after volumetric muscle loss.</a> Adv Healthc Mater. 25, e2303576(2024).</li>
<li>Sussman, E. M., Halpin, M. C., Muster, J., Moon, R. T., Ratner, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+implants+modulate+healing+and+induce+shifts+in+local+macrophage+polarization+in+the+foreign+body+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Porous implants modulate healing and induce shifts in local macrophage polarization in the foreign body reaction.</a> Ann Biomed Eng. 42 (7), 1508-1516 (2014).</li>
<li>Roosa, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjugation+of+IL-33+to+microporous+annealed+particle+scaffolds+enhances+type+2-like+immune+responses+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Conjugation of IL-33 to microporous annealed particle scaffolds enhances type 2-like immune responses in vitro and in vivo.</a> Adv Healthc Mater. 13 (25), 2400249(2024).</li>
<li>Jaberi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+microgel+packing+to+tailor+the+physical+and+biological+properties+of+gelatin+methacryloyl+granular+hydrogel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Engineering microgel packing to tailor the physical and biological properties of gelatin methacryloyl granular hydrogel scaffolds.</a> Adv Healthc Mater. 13 (25), 2402489(2024).</li>
<li>Nandi, S., Brown, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+cell+migration+within+three-dimensional+in+vitro+wound+environments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Characterizing cell migration within three-dimensional in vitro wound environments.</a> J Vis Exp. 126, e56099(2017).</li>
<li>Qazi, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anisotropic+rod-shaped+particles+influence+injectable+granular+hydrogel+properties+and+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Anisotropic rod-shaped particles influence injectable granular hydrogel properties and cell invasion.</a> Adv Mater. 34 (12), 2109194(2022).</li>
<li>Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P. O., Di Carlo, D., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+wound+healing+by+injectable+microporous+gel+scaffolds+assembled+from+annealed+building+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks.</a> Nat Mater. 14 (7), 737-744 (2015).</li>
<li>Pruett, L. J., Jenkins, C. H., Singh, N. S., Catallo, K. J., Griffin, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin+microislands+in+microporous+annealed+particle+scaffolds+for+accelerated+diabetic+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Funct+Mater%22%5BJournal%5D)">Heparin microislands in microporous annealed particle scaffolds for accelerated diabetic wound healing.</a> Adv Funct Mater. 31 (35), 2104337(2021).</li>
<li>Roosa, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+synthesis+of+microgel+building+blocks+for+microporous+annealed+particle+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Microfluidic synthesis of microgel building blocks for microporous annealed particle scaffold.</a> J Vis Exp. (184), e64119(2022).</li>
<li>Pfaff, B. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+improved+photoannealing+of+microporous+annealed+particle+%28MAP%29+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomater+Sci+Eng%22%5BJournal%5D)">Selective and improved photoannealing of microporous annealed particle (MAP) scaffolds.</a> ACS Biomater Sci Eng. 7 (2), 422-427 (2021).</li>
<li>Riley, L., Schirmer, L., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granular+hydrogels%3A+Emergent+properties+of+jammed+hydrogel+microparticles+and+their+applications+in+tissue+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Granular hydrogels: Emergent properties of jammed hydrogel microparticles and their applications in tissue repair and regeneration.</a> Curr Opin Biotechnol. 60, 1-8 (2019).</li>
<li>Jo, C. H., Roh, Y. H., Kim, J. E., Shin, S., Yoon, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+platelet-rich+plasma+gel+formation+by+varying+time+and+gravitational+forces+during+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Implantol%22%5BJournal%5D)">Optimizing platelet-rich plasma gel formation by varying time and gravitational forces during centrifugation.</a> J Oral Implantol. 39 (5), 525-532 (2013).</li>
<li>Mironov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabrication+of+tubular+tissue+constructs+by+centrifugal+casting+of+cells+suspended+in+an+in+situ.+crosslinkable+hyaluronan-gelatin+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Fabrication of tubular tissue constructs by centrifugal casting of cells suspended in an in situ. crosslinkable hyaluronan-gelatin hydrogel.</a> Biomaterials. 26 (36), 7628-7635 (2005).</li>
<li>Vu, L. T., Jain, G., Veres, B. D., Rajagopalan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+on+planar+and+three-dimensional+matrices%3A+A+hydrogel-based+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Cell migration on planar and three-dimensional matrices: A hydrogel-based perspective.</a> Tissue Eng Part B Rev. 21 (1), 67-74 (2015).</li>
<li>Cialdai, F., Risaliti, C., Monici, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+fibroblasts+in+wound+healing+and+tissue+remodeling+on+Earth+and+in+space%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Role of fibroblasts in wound healing and tissue remodeling on Earth and in space.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 958381(2022).</li>
<li>Qazi, T. H., Muir, V. G., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+characterize+granular+hydrogel+rheological+properties%2C+porosity%2C+and+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Biomater+Sci+Eng%22%5BJournal%5D)">Methods to characterize granular hydrogel rheological properties, porosity, and cell invasion.</a> ACS Biomater Sci Eng. 8 (4), 1427-1442 (2022).</li>
<li>Shaik, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+matrix-derived+granular+hydrogel+enhances+cell+function+in+3D+culture%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Cardiac matrix-derived granular hydrogel enhances cell function in 3D culture.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 16 (43), 58346-58356 (2024).</li>
<li>Puiggalí-Jou, A., Asadikorayem, M., Maniura-Weber, K., Zenobi-Wong, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+factor-loaded+sulfated+microislands+in+granular+hydrogels+promote+hMSCs+migration+and+chondrogenic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Growth factor-loaded sulfated microislands in granular hydrogels promote hMSCs migration and chondrogenic differentiation.</a> Acta Biomater. 166, 69-84 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td><td>ThermoFisher</td><td>A22287</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>VWR International</td><td>332</td><td></td></tr><tr><td>CellTracker Green CMFDS 염료, 1 mg</td><td>ThermoFisher</td><td>C2925</td><td>20 x 50 ug 단위, 492/517 nm</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>ThermoFisher</td><td>75016085</td><td>ST Plus 시리즈</td></tr><tr><td>Clear 96 well plate</td><td>MilliPore Sigma</td><td>CLS3997-50EA</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>MT-25950CQC</td><td>250mL</td></tr><tr><td>섬유아세포 기저 매체</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-030</td><td>480mL, 페놀-레드-프리</td></tr><tr><td>섬유아세포 성장 키트 - 저혈청</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-041</td><td>7.5mM L-glut,5ng/mL rh FGF basic, 5ug/mL rh 인슐린, 1ug/mL 하이드로코르티손, 50ug/mL 아스코르브산, 2% FBS</td></tr><tr><td>FIJI(ImageJ)NIH</td><td></td><td></td> <td>공개 액세스 다운로드</td></tr><tr><td>인간 피부 섬유아세포</td><td>ATCC</td><td>PCS-201-012</td><td>성인 인간 피부 섬유아세포</td></tr><tr><td>ImageXpress 마이크로 공초점</td><td>분자 장치</td><td></td><td>회전 디스크 컨포칼 현미경(4x, 10배 배율</td></tr><tr><td>IMARIS</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>3/4D Imaged Visualizaiton 및 분석 소프트웨어, 독점</td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>ThermoFisher</td><td>)Finnpipette F2 가변 부피 피펫</td><td>HeraCell Vios 160i CO2 인큐베이터, 165L</td></tr><tr><td>M-20 마이크로플레이트 스윙 버킷 로터</td><td>ThermoFisher</td><td>75003624</td><td></td></tr><tr><td>메틸셀룰로오스</td><td>Fisher Scientific</td><td>9004-67-5</td><td>실험실 등급, 분말 형태</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Fisherbrand</td><td>05-408-129</td><td>1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브</td></tr><tr><td>파라포름알데히드(4%)</td><td>Alfa Aesar</td><td>AAJ19943K2</td><td>고정용&nbsp;</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Corning</td><td>08-757-100A</td><td>뚜껑이 있는 세균 페트리 접시 35 x 10mm</td></tr><tr><td>피펫</td><td>ThermoFisher</td><td>4642080</td><td>Finnpipette F2 가변 부피 피펫</td></tr><tr><td>멸균 PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X</td><td>Fisher Scientific</td><td>327371000</td><td></td></tr></tbody></table>

quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

Quantifying Three-Dimensional Cell Migration Within and Into Granular Hydrogel Biomaterials

이 프로토콜은 두 가지 새로운 과립 스캐폴드 마이그레이션 분석에 필요한 단계를 자세히 설명하는 것을 목표로 합니다. MAMA 방법은 조직 계면에서 세포 침투를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 과립 하이드로겔은 벌크 하이드로겔보다 더 복잡한 시스템이므로 본질적으로 마이그레이션을 위한 처리가 더 복잡합니다 9,20. 그림 1에 요약된 단계적 프로세스를 이해하는 것이 중요합니다. 각 단계는 다음 단계를 기반으로 하며 이 프로토콜에서 최적화되었습니다. 120,000 cells/cm2의 밀도에서 HDF를 파종하면 하룻밤 사이에 최소 80%의 합류가 발생하며(그림 1A), 이러한 비형광 세포는 이미징 가능성을 극대화하기 위해 실험 당일에 세포 추적 염료로 가장 잘 태그됩니다(그림 1B). 이 프로토콜은 세포 생존력을 유지하기 위해 HDF 계대성 계승에 사용되는 낮은 원심력과 일치합니다. 단일 원심분리 단계에서 생성되는 각도로 인해 웰의 바닥 표면을 완전히 덮을 수 있도록 겔 이동을 보장하기 위해 플레이트를 180° 뒤집어야 합니다(그림 1C). 어닐링 후 30분 동안 인큐베이터에서 세포가 회복되도록 하면(그림 1D) 세포 생존율을 유지하고 최적의 이동을 얻을 수 있습니다(그림 1E). 96웰 플레이트의 넓은 영역을 4x 대물렌즈로 이미징하고 0-24시간 시점(그림 2A, B)에서 일치시켜 세포 거동을 광범위하게 평가할 수 있습니다. 분석 소프트웨어에서 결과 z-stack 이미지를 처리하면 사용하기 쉬운 인터페이스에서 여러 대규모 데이터 세트에 대한 고급 분석을 제공할 수 있습니다. 이 프로토콜은 그림 2B,C의 대표 이미지로 시각화된 각 시점에서 셀 높이 또는 위치 Z에 대한 데이터 세트를 생성하는 단계를 요약합니다. 처리된 데이터의 분석은 그림 3A에서 볼 수 있으며, 중앙 높이의 평균과 각 시점의 표준 편차를 사용하여 시각화되었으며, t = 0 h에서 이동하지 않는 셀의 폴드 변화 높이가 그림 3B에 나와 있습니다. 이 방법의 기본 데이터는 일반적으로 비정규 분포이므로 중위수는 비교를 위한 더 강력한 측정값이므로 데이터를 요약하는 데 사용됩니다.
마찬가지로, PLOSMA 방법을 사용하여 3D 과립 하이드로겔 스캐폴드 내에서 전달된 세포의 운동성을 평가할 수 있습니다. 그림 4A는 PLOSMA 방법의 단계를 간략하게 설명하며, 웰 중앙에 스페로이드를 파종하는 것이 특히 중요합니다. 스페로이드를 시야의 중앙에 배치하는 것이 좋지만 현미경의 기능에 따라 다릅니다. 도 4B는 FITC 채널(488nm)에서 10배 배율로 촬영한 t = 0 h 및 t = 24 시간 동안 스페로이드 확산의 대표적인 이미지를 보여줍니다. 소프트웨어에서 원점 참조 프레임을 생성하고 각 z-스택에 맞게 조정할 수 있습니다(그림 5A,B). 이 소프트웨어는 해당 원점 참조 프레임에서 방사형 거리를 추적하고 원하는 데이터 세트로 내보낼 수 있습니다(그림 5C). 그림 6A는 t = 24시간 스페로이드의 3D 렌더링을 보여주는 대표적인 이미지이며, 그림 6B는 소프트웨어의 스폿 기능을 보여줍니다. 처리된 데이터의 예가 그림 7에 나와 있습니다. 그림 7A는 정규화된 중심에서 Day 0 거리로 이동한 평균 거리를 나타냅니다. 그림 7B는 PLOSMA 방법이 연구하고자 하는 방향이기 때문에 z-평면에서만 이동한 거리를 분리합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig01.jpg"> 
그림 1: 단층 기반 상행 이동 분석 세포 배양 및 이미징. MAMA를 위한 세포 및 겔 처리의 주요 단계에 대한 개략도. (A) 세포는 하룻밤 사이에 합류하도록 성장하고, (B) 세포 추적 염료는 과립 겔을 첨가하기 직전에 첨가됩니다. 스캐폴드는 (C) 플레이트 원심분리를 통해 조립되고 (D) 광 가교로 안정화됩니다. 여러 시점에서의 이미징을 통해 상향 세포 이동을 (E) 시각화할 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig02.jpg"> 
그림 2: MAMA 이미지 처리. 이미지 처리의 대표적인 이미지입니다. FITC 채널에서 (A) t = 0 및 (B) t = 24h에서 4배 배율로 원시 컨포칼 이미지의 상단 및 측면 보기 비교. (B) (C) t = 0 및 (D) t = 24 h에서 처리 된 셀 위치 Z 높이의 상부 및 측면도 비교. 24시간 동안 처리에는 중앙값 비이동 z-높이의 빼기가 포함됩니다. 눈금 막대 = 500μm. 약어: MAMA = Monolayer-based ascending migration assay. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig03v2.jpg"> 
그림 3: MAMA 세포 이동 출력 분석. (A) 시점 t = 0(27.0 μm ± 1.4 μm) 및 t = 24 h(46.6 μm ± 10.8 μm)에서 각 반복(n = 6)에서 세포 높이의 중앙값 위치 Z 및 표준 편차. (B) 24시간에서 세포의 이동을 0시간으로 정규화하고 접힘 변화(1.8 ± 0.4)로 보고했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig03largev2.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig04.jpg"> 
그림 4: PLOSMA(Parallel Layer Outward Spheroid Migration Assay) 세포 배양 및 이미징. (A) 스캐폴드 적층 단계를 설명하는 개략도. (B) 0 및 24 h에서 취한 스페로이드의 최대 강도 투영. 이미지는 10배 배율로 FITC 채널(488nm) 에서 컨포 칼 형광 현미경을 통해 촬영되었습니다. 스케일 바 = 200μm. 약어: PLOSMA = Parallel Layer Outward Spheroid Migration Assay. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig05.jpg"> 
그림 5: 새 원점 참조 프레임 생성. (A) 빨간색 상자로 윤곽선이 표시된 새 원점 참조 프레임 버튼. (B) 새 원점은 3차원 모두에서 회전 타원체의 중심에 있도록 설정됩니다. (C) 표시된 출력 메트릭은 원점 참조 프레임에서 셀 표면까지의 거리이며, 이는 세포가 중심에서 얼마나 멀리 이동했는지를 나타냅니다. 스케일 바 = 120μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig06.jpg"> 
그림 6: 24시간 동안 포함된 스페로이드의 3D 렌더링. (A) 3D 공간에서 처리된 스페로이드. (B) 동일한 스페로이드의 중심은 IMARIS의 원점 참조 프레임 기능을 사용하여 결정되었으며, 세포 확산은 원점으로부터의 거리에 따라 색상으로 구분됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67627/67627fig07.jpg"> 
그림 7: PLOSMA의 출력 예. (A) 이동 거리를 μm 단위로 보여주는 PLOSMA 결과의 예. 평균 이동 거리는 240.8μm± 36.87μm였습니다. (B) 스페로이드 발아의 Z-높이 접힘 변화(tf/t0). 평균 폴드 체인지는 3.82 ± 1.495였습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67627/67627fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

Granular hydrogel scaffolds hold significant potential in regenerative medicine, functioning either as carriers for cell delivery or as interfaces for ...

quantifying-three-dimensional-cell-migration-within-into-granular

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이러한 세포 마이 그 레이션으로 세포 프로세스 전통적으로 2 차원, 딱딱한 플라스틱 표면에 연구하고 있습니다. 이 보고서는 직접 단백질 지방화를 시각화하고보다 생리학 관련, 3 차원 매트릭스에서 마이 그 레이션 세포의 단백질 역학을 분석하는 기술을 설명합니다.

3 차원 매트릭스에서 찬란 태그가 추가된 단백질을 표현 마이 그 레이션 전지의 라이브 세포 이미징

라이브 셀 마이그레이션 연구에 대한 현미경 챔버의 접착제 및 가용성 그라디언트의 조립 방법이 설명되어 있습니다. 엔지니어링 환경 솔루션 기울기와 antifouling 표면과 접착제 트랙을 결합하기 때문에 하나가지도 단서의 상대적 중요성을 확인할 수 있습니다.

형광 현미경과 영상 셀 마이그레이션을위한 접착제 및 가용성식이 그라디언트를 만들기

이 문서는 찬란 추가 수정 및 3D 세포 배양의 라이브 영상 모두에 사용할 수 있습니다 콜라겐 레이블을하는 방법을 제시한다. 우리는 또한 3D 환경에서 배양 세포의 내생 세포 골격 단백질을 시각화하기 위해 최적화 된 프로토콜을 제공합니다.

3D로 침윤성 암 세포의 세포 골격 조직을 공개

일차원 국한 미세 환경에서 세포의 자발적인 이동을 연구하는 정량적 방법이 설명된다. 이 방법은 미세 채널을 활용하고 번의 실험에서 서로 다른 조건 하에서 세포의 다수의 이동을 연구하기 위해 이용 될 수있다.

미세 채널에서 세포의 이동에 관한 연구

세포 이동은 암과 같은 상처 치료 및 면역 반응 및 병태 생리 학적 과정으로, 생리의 과다에 관여하는 생물학적 현상이다. 3D-콜라겐 매트릭스 마이그레이션 분석은 3 차원 형상의 생리적 환경 내에서 다른 세포 유형의 이동성 특성을 분석하는 다용도 공구이다.

세 가지 차원 콜라겐 매트릭스 내에서 세포의 이동 분석

기계적 특성 및 세포 외 매트릭스의 미세 강하게 세포의 3 차원 이동에 영향을 미칩니다. 시험 관내 방법은 개별 세포 집단 수준에서 모두 biophysically 변수 환경에서 시공간 세포 이동 동작을 연구하기 위해, 설명한다.

동심 젤 시스템은 3 차원 세포의 이동에 매트릭스 미세 환경의 생물 물리학 역할을 연구하는

세포 이동은 인간의 발달과 생활에서 중요한 부분을 차지합니다. 세포 이동을 변경할 수 있는 메커니즘을 이해하기 위해 3D 콜라겐 매트릭스에서 화학주성을 조사할 수 있는 평면 구배 확산 시스템을 제시하여 기존 분석법의 최신 확산 챔버 한계를 극복할 수 있습니다.

평면 그라데이션 확산 시스템은 3D 콜라겐 매트릭스에 화성을 조사하기 위해

이 프로토콜의 목표 3 차원 섬유 소 매트릭스 내에서 셀 마이그레이션에 프로 및 안티 migratory 요인의 효과 평가 하는 것입니다.

환경 상처 3 차원 생체 외에서 내 셀 마이그레이션 특성화

여기서 우리는 인간 신경교종 세포(hGC) 이동을 실시간으로 연구하기 위한 전 생체내 혼합 단층 배양 시스템을 제시한다. 이 모형은 구획화된 약실 내의 hGCs와 myelinated 및 비 myelinated 축색둘다 사이 상호 작용을 관찰하는 기능을 제공합니다.

등쪽 뿌리 신경절 축삭-올리고젠드로시트 공동 배양에 대한 인간 신경교종 세포 이동의 실시간 모니터링

기계적 힘은 세포 이동을 제어하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 유리 마이크로파이펫 및 마이크로매니퓰레이터를 사용하여 변형될 수 있는 탄성 하이드로겔의 사용을 입증하여 세포 구조 및 이동의 변화를 유도하기 위해 국소 강성 구배를 가진 세포를 자극한다.

세포 운동 및 관련 신호 이벤트의 기계적 제어를 평가하기위한 단일 세포 Durotaxis 분석

개발에 집단 세포 이동, 상처 치유, 그리고 암 전이 종종 성장 인자 또는 신호 분자의 그라데이션에 의해 유도. 여기에 설명된 견인 현미경과 미세 유체 시스템을 결합한 실험 시스템과 생화학 구이도하에서 집단 이동의 역학을 정량화하는 방법에 대한 데모입니다.

화학적 집단 이동을 위한 미세 유체와 통합된 견인 현미경 검사법

배우세요 과립 하이드로겔 내 3차원 세포 이동 정량화 방법을 공초점 현미경과 이미지 분석 소프트웨어를 활용하여 상처 치유 및 조직 재생 연구에 적용하는 기술을.

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

더 많은 동영상 탐색