Name: 정량적 대사 플럭스 연구를 위한 세척된 인간 혈소판의 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-10T14:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 배우세요 세척된 인간 혈소판을 준비하여 정량적 대사 플럭스를 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 혈소판 중심 탄소 대사와 혈전 위험 메커니즘 분석에 필수적입니다.

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이 연구는 콜로라도 대학교 앤슈츠 메디컬 캠퍼스(University of Colorado Anschutz Medical Campus)로부터 기관 검토 위원회(Institutional Review Board)의 승인을 받았습니다. 모든 연구 참가자로부터 서면 동의를 얻었다. 참가자들은 이전 48시간 동안 알코올을 섭취하지 않았거나 이전 10일 동안 비스테로이드성 항염증제(NSAID)를 섭취하지 않았다고 보고했습니다. 이 프로젝트는 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 국립 심장, 폐 및 혈액 연구소(National Heart, Lung, and Blood Institute)의 지원을 받습니다(수상 번호 R61HL141794).
1. 채혈
<ol>
	<li>채혈을 위한 설정. 혈액 채취는 숙련된 정맥 전문의가 수행하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>19G 바늘을 사용하여 팔 안쪽에 정맥 천자를 수행합니다.</li>
	<li>처음 ~2mL를 무첨가 액포에 모아 폐기합니다. 이는 손상된 내피 세포에서 혈소판을 활성화할 수 있는 화학적 신호 분자를 제거하기 위한 것입니다. 초기 2mL를 채취한 후 혈소판의 전단 응력을 줄이기 위해 지혈대를 제거합니다.</li>
	<li>나머지 혈액을 항응고제 시트레이트 포도당(ACD-A) 액포자에 14:3(혈액:ACD-A)의 비율로 수집합니다. 채혈 후 각 액포를 부드럽게 뒤집어 혈액과 항응고제를 혼합합니다.</li>
</ol>
2. 혈소판 세척
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67639/67639fig01.jpg"> 
그림 1: 혈소판 세척과 관련된 연속적인 원심분리 및 재현탁 단계.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67639/67639fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
알림: 기포 생성을 피하십시오. 전사 피펫을 사용하여 기포가 형성될 때, 특히 원심분리 전에 기포를 제거하십시오. 혈액/혈소판 튜브가 열리거나 닫힐 때마다 CO2 수준을 높이기 위해 캡을 닫기 전에 튜브에 숨을 들이쉬는 것이 좋습니다.
<ol>
	<li>온도 영향을 줄이기 위해 원심분리기를 37°C로 예열합니다. 프로토콜의 각 원심분리 단계 사이에 원심분리기를 37°C로 유지합니다.</li>
	<li>수조를 37 °C로 예열합니다. 포도당이 든 변형된 Tyrode의 완충액을 수조에 넣습니다. 참고: 수정된 Tyrode의 버퍼 레시피는 보충 파일 1에서 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>모든 진공에서 수집한 전혈을 50mL 폴리프로필렌 원뿔형 튜브에 결합합니다. 45° 각도로 절단된 베벨 절단 피펫 팁을 사용하여 적절한 시료량을 채취하여 세포 계수를 수행합니다( 세포 계수 참조).</li>
	<li>좁은 보어 이송 피펫으로 조심스럽게 흡인하여 생성된 기포를 제거합니다.</li>
	<li>37°C에서 25분 동안 수조에 혈액을 담그십시오.이렇게 하면 가역적으로 활성화된 상태(신체에서 제거되거나, 튜브에서 튜브로 이동되는 등)의 혈소판이 휴식 상태로 돌아갈 수 있습니다.</li>
	<li>원심분리 중 활성화를 방지하기 위해 500nM 프로스타글란딘 I2 (PGI2)와 0.02U/mL의 아피라아제를 전혈에 첨가하고 한 번 뒤집어서 부드럽게 혼합합니다.  좁은 보어 전사 피펫을 사용하여 생성된 기포를 제거합니다. 참고: 적절한 PGI2 및 아피라제 레시피에 대한 지침은 보충 파일 1에서 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>브레이크 없이(37°C) 없이 혈소판 풍부 혈장(PRP)(250 x g 에서 15분, 전혈 42mL)을 얻기 위한 전혈을 원심분리합니다.</li>
	<li>광경 전사 피펫을 사용하여 PRP(담황색 털과 붉은 혈액층 위의 상단 노란색 층)를 새 50mL 원뿔형 튜브에 부드럽게 수집합니다.</li>
	<li>전사할 때 깨끗한 원뿔형 튜브를 기울이고 PRP를 튜브 측면 아래로 부드럽게 실행합니다. 기포를 피하십시오.</li>
	<li>담황색 코트(PRP와 적혈구 사이의 백혈구층)를 방해하지 않도록 약 3mm의 PRP를 남겨 두십시오. 방해를 받으면 이송 피펫에서 갑자기 흰색 소용돌이처럼 보입니다.</li>
	<li>세포 수( 혈소판 계수 참조)를 취하여 다음 세척 단계를 위한 재현탁량을 결정합니다.</li>
	<li>37 °C에서 10분 동안 그대로 두십시오.</li>
	<li>베벨 컷 피펫 팁을 사용하여 유세포 분석을 위한 샘플을 채취합니다( 유세포 분석 참조).</li>
	<li>PRP에 500nM PGI2 및 0.02 U/mL 아피라아제를 첨가하고 한 번 부드럽게 뒤집어 혼합합니다.</li>
	<li>37°C에서 1000 x g 에서 10분간 원심분리기(가속:0 브레이크:0).브레이크를 사용하지 마십시오. 펠릿이 조밀하지 않으며 급브레이크로 인해 재혼합이 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>원심분리하는 동안 재현탁액을 측정합니다. 75%의 회복률을 가정합니다. 세포 밀도를 약 3x105 cells/μL로 만듭니다.</li>
	<li>벌크 부피는 플라스틱 광경 전사 피펫을 사용하고 펠릿 근처의 나머지 액체는 1mL 피펫(절단되지 않은 팁)을 사용하여 상층액을 흡입합니다. 튜브 바닥에 있는 펠릿을 만지지 마십시오.</li>
	<li>500 nM PGI2 및 0.02 U/mL의 아피라아제를 변형된 Tyrode의 완충액에 첨가합니다. 원뿔형 튜브의 측면을 따라 흘러 내려가 16단계에서 계산된 양의 버퍼를 천천히 추가합니다.</li>
	<li>베벨 절단 팁과 1mL 피펫 팁을 사용하여 위아래로 여러 번 부드럽게 피펫팅하여 펠릿을 부드럽게 재현탁합니다.<ol>
		<li>부피를 300μL로 설정하고 액체 라인 위에서 플런저를 끝까지 누른 다음 피펫을 액체 아래에 놓고 첫 번째 정지까지 올라옵니다. 이를 통해 과학자는 혈소판을 활성화할 수 있는 기포를 실수로 생성하지 않고 펠릿을 다시 현탁시킬 수 있습니다.</li>
		<li>때때로, 펠릿 바닥에 눈에 보이는 적혈구 고리가 있습니다. 이를 다시 중단하지 마십시오.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>펠릿이 재현탁되면 광경 전사 피펫을 사용하여 재현탁액 펠릿을 새로운 원추형 튜브로 이송하여 적혈구 또는 눈에 띄게 응집된 세포를 남겨둡니다.</li>
	<li>11-20단계를 반복합니다. 새로운 부분 표본에서 500 nM PGI2 및 0.02 U/mL를 수정된 Tyrode의 버퍼에 추가해야 합니다(18단계에서 수정된 Tyrode의 버퍼를 재사용하지 마십시오. PGI2 는 너무 불안정함).</li>
	<li>세포 수를 위해 샘플을 채취합니다. 변형된 Tyrode's buffer로 필요에 따라 혈소판 농도를 조정합니다.</li>
	<li>베벨 컷 피펫 팁을 사용하여 유세포 분석을 위한 샘플을 채취합니다.</li>
	<li>37°C에서 1시간 동안 혈소판을 휴지시켜 억제제가 소멸되고 가역적으로 활성화된 혈소판이 휴지 상태로 돌아갈 수 있도록 합니다.</li>
	<li>넓은 구멍의 피펫으로 부드럽게 섞습니다. 유세포 분석을 위해 샘플을 채취합니다.</li>
	<li>세척된 휴지 혈소판은 이제 대사 분석에 사용할 준비가 되었습니다.</li>
</ol>
3. 혈소판 계수
<ol>
	<li>혈소판은 자동 혈구 계수기(제조업체의 지침에 따름) 또는 혈구계(hemocyometer)를 사용하여 계수할 수 있다33.</li>
</ol>
4. 유세포 분석
<ol>
	<li>준비<ol>
		<li>항체 혼합물을 설정하고 혈소판 활성화를 측정하기 위해 유세포 분석기를 준비하기 위한 모범 사례에 대한 자세한 프로토콜과 검토는 다른 곳에서 찾을 수 있습니다34,35.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>견본 추출<ol>
		<li>유세포 분석을 위해 검체를 채취할 때 베벨 컷 피펫 팁을 사용하여 혈소판 현탁액을 수집합니다. 이것을 항체가 있는 마이크로 원심분리기 튜브에 천천히 첨가한 다음 부드럽게 튕겨 섞습니다. 30초 동안 배양합니다.</li>
		<li>베벨 컷 피펫 팁을 사용하여 혈소판 현탁액/항체 혼합물을 96웰 플레이트에 적절한 웰로 전달합니다.</li>
		<li>즉시 세포를 고정하기 위해 잘 정착물을 첨가하십시오.</li>
		<li>고정 후 8시간 이내에 유세포분석기에서 실행합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>작용제 민감도 검사<ol>
		<li>세척 후 2개의 15mL 원뿔형 튜브를 따로 보관하며, 하나는 휴지 제어용이고 다른 하나는 트롬빈 활성화 제어용입니다.</li>
		<li>베벨 컷 피펫 팁을 사용하여 각 원뿔형 튜브에 100μL의 혈소판 현탁액을 부드럽게 피펫팅합니다. 37°C에서 1시간 동안 그대로 두십시오.</li>
		<li>한 시간 휴식 후, 한 튜브에 0.1 U/mL의 트롬빈을 넣고(트롬빈 조제에 대한 지침은 보충 파일 1에서 찾을 수 있음) 다른 튜브에 비히클을 추가합니다. 37°C에서 15분 동안 배양합니다.</li>
		<li>agonist에 대한 혈소판 민감도를 확인하기 위해 각 튜브의 유세포 분석 샘플을 채취합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 정량적 대사 플럭스 분석을 위한 샘플링
<ol>
	<li>냉각 참고: 담금질 대사는 정확한 대사 플럭스를 측정하는 데 필요한 단계입니다. 세포를 빠르게 냉각시키고 체온을 4°C 이하로 유지하면 신진대사가 충분히 느려져 샘플링된 세포가 벌크에서 세포의 신진대사를 정확하게 반영하도록 본질적으로 중단된 것으로 간주할 수 있습니다. 사용할 수 있는 방법은 다양하지만 급속 냉각의 필요성과 누출 최소화의 균형을 맞추기 위해 저온(-4°C) 일반 식염수36을 사용합니다. 염이 후속 분석을 방해하는 경우 다른 유체(메탄올/물, 에탄올 등)를 사용할 수 있습니다.37.<ol>
		<li>생리식염수의 분취액을 준비하고 동결합니다. 각 식염수 부분 표본을 원하는 샘플 부피의 6배로 만듭니다. 참고: 일반 식염수 레시피는 보충 파일 1에서 찾을 수 있습니다.</li>
		<li>마이크로 원심분리기를 0°C로 사전 냉각합니다.</li>
		<li>부분적으로 동결된 생리식염수(&lt; -4 °C)에서 1:6 비율로 혈소판 현탁액을 수집합니다(예: 마이크로 원심분리 튜브에서 750μL의 식염수로 150μL의 혈소판 현탁액을 수집). 참고: 혈소판/식염수를 얼음 위에 15분 이상 두지 마십시오.</li>
		<li>16,000 x g, 0°C에서 10분 동안 원심분리기</li>
		<li>상등액은 외부 대사산물 분석을 위해 보관하고, 펠릿은 세포 내 대사산물 추출 및 측정을 위해 보관합니다. 분석 준비가 될 때까지 둘 다 -20°C에서 보관하십시오.</li>
		<li>원하는 시간 간격과 샘플 시간 점 수에 대해 이 과정을 반복합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>세포 내 대사 산물 추출<ol>
		<li>담금질 된 펠릿에 -20 ° C에서 0.5 mL의 사전 냉각 된 7 : 3 메탄올 물을 첨가한다. 1분 동안 격렬하게 소용돌이칩니다.</li>
		<li>액체 질소에서 동결하고 0 °C에서 해동한 다음 2 사이클 더 반복합니다.</li>
		<li>현탁액을 16,000 x g 에서 -4°C에서 10분 동안 원심분리합니다.</li>
		<li>새 마이크로 원심분리기 튜브에 상층액을 수집합니다.</li>
		<li>3단계의 펠릿을 사용하고 50:50 메탄올:물로 추출 프로토콜(1-3단계)을 반복합니다. 수집된 두 번째 추출물을 첫 번째 추출물에 추가합니다. 밤새 말리십시오.</li>
		<li>건조된 추출물을 150μL의 LC-MS 등급의 물(또는 의도한 분석에 적합한 기타 용매)에 재현탁합니다. 4 °C에서 15 분 동안 혼합합니다. 잠시 와류를 일으킨 후 0.22μm 마이크로 원심분리기 튜브로 옮겨 세포 파편을 제거합니다. 16,000 x g 및 4 °C에서 5분 동안 원심분리기.</li>
		<li>원심분리기에서 분리하여 필터에 50μL의 옵티마 물을 추가로 피펫으로 주입한 다음 다시 원심분리(5분, 16,000xg 및 4°C)하여 필터를 헹굽니다. 분석을 위해 수집합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<meta charset="utf8"></head><body>대사 연구를 위한 정지(quiescent platelets) 분리

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<li>Webera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+platelet+aggregation+with+trap-6+and+collagen+in+platelet+aggregometry+in+patients+with+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced platelet aggregation with trap-6 and collagen in platelet aggregometry in patients with venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 107, 325-328 (2002).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; M 필터 Spin-X 튜브</td><td>Millapore-Sigma</td><td>CLS8160</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>19 G x 3/4" 바늘</td><td>McKesson Corporation</td><td>448406</td><td>Phlebotomy</td></tr><tr><td>21 G 1.5 인치 바늘 루어 잠금 아마존</td><td></td><td>B0C39PJD23</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>96 웰 플레이트, 절반 면적</td><td>Greiner Bio-One</td><td>675101</td><td>흐름 세포 분석</td></tr><tr><td>ACD-A 백신 접종기&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>364606 정맥 절개술</td></tr><tr><td>어댑터</td><td>McKesson Corporation</td><td>609</td><td>정맥 절개술</td></tr><tr><td>알코올 면봉</td><td>VWR</td><td>15648-916</td><td>감자의 정맥 절개술</td></tr><tr><td>아피라제</td><td>Sigma</td><td>A6410-100UN</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>CD42a 단클론 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-0428-42</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>냉각 마이크로 원심분리기&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75002441</td><td>담금질</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma</td><td>G7021</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>FITC Anti-Fibrinogen 항체</td><td>Abcam</td><td>4217</td><td>유세포 분석기</td></tr><tr><td></td><td>Beckman Coulter</td><td>82922828</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>Gauze</td><td>VWR</td><td>76049-110</td><td>정맥 절개술</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G5516</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시그마 Aldrich</td><td>H4034</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>인간 알파-트롬빈</td><td>Prolytix</td><td>HCT-0020</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마 Aldrich</td><td>P9333</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>시그마</td><td>M8266</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브</td><td>VWR</td><td>87003-292</td><td>일반</td></tr><tr><td>Na2HPOsub<>4</td><td>Sigma</td><td>S3264</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5761</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>좁은 구멍 전달 피펫</td><td>VWR</td><td>16001-176</td><td>혈소판 세척</td></tr><tr><td>파라포름알데히드 용액, PBS</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-281692</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>PECy5 마우스 Anti-Human CD62P</td><td>BD Pharmingen</td><td>551142</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>플레이트 커버</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AB0626</td><td>유세포 분석</td></tr><tr><td>폴리프로필렌 15mL 원뿔형 튜브</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>폴리프로필렌 50mL 원뿔형 튜브</td><td>VWR</td><td>352070</td><td>혈소판 세척</td></tr><tr><td>프로스타글란딘 I2(나트륨염)</td><td>케이맨 화학</td><td>18220</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>SKC Inc. C-Chip 일회용 혈구계</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-600-100</td><td>세포 계수</td></tr><tr><td>주사기</td><td>BD Pharmingen</td><td>14-823-41</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>지혈대</td><td>VWR</td><td>76235-371</td><td>Phlebotomy</td></tr><tr><td>Vacutainer 바늘 홀더</td><td>BD</td><td>364815</td><td>Phlebotomy</td></tr><tr><td>Vortexer</td><td>VWR</td><td>102091-234</td><td>시약 준비</td></tr><tr><td>수조</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>TSGP02</td><td>혈소판 세척</td></tr><tr><td>광역 전사 피펫</td><td>VWR</td><td>76285-362</td><td>혈소판 세척</td></tr></tbody></table>

정량적 대사 플럭스 연구를 위한 세척된 인간 혈소판의 준비

Preparation of Washed Human Platelets for Quantitative Metabolic Flux Studies

그림 2의 대표적인 결과는 남성 3명과 여성 3명을 포함한 6명의 헌혈자를 나타냅니다. 전혈에 대한 상대적인 혈소판 수율은 그림 2A에 나와 있습니다. 최종 혈소판 회수율은 평균 52% ± 3%(표준 편차, n=6)였다. 백혈구 오염과 비교한 최종 혈소판 수는 자동 혈액학 분석기를 사용하여 측정되었습니다. 백혈구 수는 전체 세포의 0.1% 미만이었습니다(그림 2B). 세척 과정과 시간 휴식을 통해 혈소판은 낮은 P-selectin 노출을 유지했지만 트롬빈 처리에는 강력하게 반응했습니다(그림 2C). 결합된 피브리노겐은 첫 번째 1000 x g 스핀 후에 급증하지만 두 번째 1000 x g 스핀 후에는 5% 미만으로 돌아갑니다. P-셀렉틴(P-selectin) 노출과 마찬가지로, 결합 피...

Platelets are blood cells that play an integral role in hemostasis and the innate immune response. Platelet hyper- and hypoactivity have been implicated ...

preparation-washed-human-platelets-for-quantitative-metabolic-flux

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 거핵세포의 분화와 혈소판 형성을 위한 기술을 보여줍니다. 인간 탯줄 혈액에서 분리된 조혈 줄기 전구 세포는 트롬보포이에틴이 존재하는 상태에서 성숙한 거핵세포로 분화합니다. 성숙한 거핵세포는 프로혈소판(proplatelet)이라고 하는 세포질 확장을 생성하며, 이는 개별 혈소판을 생성합니다.

거핵세포와 혈소판 형성의 분화를 위한 체외(In vitro) 방법

이 비디오는 사전 처리되고 세척된 인간 혈소판에서 콜라겐 유도 혈소판 응집을 평가하기 위한 탁도 분석을 보여줍니다. 대조군 웰은 콜라겐 유도 응집을 보이는 반면, 고농도의 억제제는 판넥신-1 채널을 차단하여 콜라겐 유도 혈소판 응집을 억제하며, 이는 변하지 않은 탁도에서 알 수 있습니다.

전처리된 인간 혈소판의 콜라겐 유도 응집을 모니터링하기 위한 탁도 분석

혈액 백혈구 및 혈소판은 개인의 생체 에너지 전반적인 건강의 마커로 사용하고 있으므로 병적 과정 및 치료의 효과를 모니터링하기위한 잠재력을 가질 수있다. 여기에서 우리는 미토콘드리아의 기능이 세포의 산화 버스트를 분리하고 측정하는 방법을 설명합니다.

인간 백혈구 및 혈소판의 분리 및 평가를위한 프로토콜 : 생물 에너지와 산화 버스트

여기에서 우리는 고립 된 인간의 혈소판 내가 로테를 억제제 복잡한에 대한 응답으로 신진 대사 적응을 연구하는 생체 접근으로 모델을 사용할 수 있습니다 보여줍니다. 이 방법은 액체 크로마토 그래피 질량 분석에 의해 추적 동위 상대적 정량을 채용하고 연구 다양한 디자인을 적용 할 수있다.

미토콘드리아 대사 유학을위한 플랫폼으로 인간 혈소판의 LC-MS 분석

우리는 탁도 의해 작용제 - 유도 된 혈소판 응집을 측정 하였다 인간 혈액으로부터 세척 혈소판 분리하는 간단한 방법을 설명한다. 예를 들어 우리는 Pannexin1 채널 억제제 브릴리언트 블루 FCF와 미리 인큐베이션 한 후 콜라겐 인간 혈소판 응집 반응을 연구하는데이 방법을 적용한다.

콜라겐 - 유도 된 응집에 Pannexin1 억제제의 효과 브릴리언트 블루 FCF : 탁도는 인간 혈소판에 씻어

이 연구는 혈소판의 부착, 퍼짐 및 유속 하의 분비를 연구하기위한 형광 현미경 기반의 방법을 설명합니다. 이 다목적 플랫폼은 혈전증과 지혈에 대한 기계 연구를 위해 혈소판 기능을 조사 할 수있게합니다.

흐름하에있는 혈소판 탈식 및 분비의 라이브 셀 이미징

이 문서에서 설명 하는 내 피 폰 Willebrand 평가 하는 방법 요소 릴리스 및 다음 혈소판 유체 전단 응력은 생체 외에서 흐름 챔버 시스템을 사용 하 여 염증 성 자극에 대 한 응답에서에서 캡처.

조사 폰 Willebrand 요소 이상 모델을 사용 하는 흐름 챔버의 폰 Willebrand 요인-혈소판 문자열 형성

혈관 벽 손상 후 또는 염증 동안 백혈구 avidly 혈관 세포와 혈소판 상호 작용합니다. 여기, 우리 간단 층 흐름 기반 분석 결과 기초 백혈구와 셀룰러 파트너 간의 상호 작용 분자 메커니즘의 특성을 설명 합니다.

교양된 혈관 세포에 부착 혈소판 백혈구 신규 모집 조사 하 층 플로우 기반 분석

여기서, 마우스 혈액은 항 응고 제의 존재 하에 수집 되었다. 혈소판을 저속 원심 분리를 이용 하 여 iohexol 구배 배지로 정제 하였다. 혈소판은 그들이 가능한 경우 조사 하기 위해 트 롬 빈과 함께 활성화 되었다. 정제 된 혈소판의 품질은 유 세포 분석기 및 현미경 검사 법에 의해 분석 되었다.

마우스 혈액에서 혈소판의 정제

프로응고제 혈소판 형성은 혈전증 위험 증가와 상관관계가 있습니다. 여기에는 인간 혈액에서 세척된 혈소판을 분리하기 위한 정확한 프로토콜이 제시되어 있으며, 이는 프로코아응고제 혈소판의 특징인 포스파티딜세린 및 미세소포 방출의 노출을 정량화하기 위한 것입니다.

인간 정제 혈소판에서 포스파티딜세린 노출 및 미세소포 방출을 측정하여 응고제 혈소판 특성 분석

여기에서는 골수, 비장 및 경색된 심장에서 대식세포를 추출하고 이후에 살아있는 세포의 대사 플럭스를 평가하는 방법을 자세히 설명합니다.

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

배우세요 세척된 인간 혈소판을 준비하여 정량적 대사 플럭스를 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 혈소판 중심 탄소 대사와 혈전 위험 메커니즘 분석에 필수적입니다.

정량적 대사 플럭스 연구를 위한 세척된 인간 혈소판의 준비

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