Name: 반복되는 자기 자극 하에서 체외 에서 Myelin 파편의 미세아교세포 형성 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 배우세요 반복 자기 자극이 미세아교세포의 미엘린 파편 탐식에 미치는 영향을 체외 공배양 모델로 평가하는 방법을. 이 기법은 신경재활 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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<ol><li>Osso, L. A., Hughes, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+mature+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamics of mature myelin.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1449-1461 (2024).</li>
<li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+debris+phagocytosis+in+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Myelin debris phagocytosis in demyelinating disease.</a> Glia. 72 (11), 1934-1954 (2024).</li>
<li>Kopper, T. J., Gensel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+as+an+inflammatory+mediator%3A+Myelin+interactions+with+complement%2C+macrophages%2C+and+microglia+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Myelin as an inflammatory mediator: Myelin interactions with complement, macrophages, and microglia in spinal cord injury.</a> J Neurosci Res. 96 (6), 969-977 (2018).</li>
<li>Yu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+microglia+and+macrophages+in+brain+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Phagocytic microglia and macrophages in brain injury and repair.</a> CNS Neurosci Ther. 28 (9), 1279-1293 (2022).</li>
<li>Filbin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-associated+inhibitors+of+axonal+regeneration+in+the+adult+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Myelin-associated inhibitors of axonal regeneration in the adult mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (9), 703-713 (2003).</li>
<li>Sen, M. K., Mahns, D. A., Coorssen, J. R., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+microglia+and+astrocytes+in+phagocytosis+and+myelination%3A+Insights+from+the+cuprizone+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The roles of microglia and astrocytes in phagocytosis and myelination: Insights from the cuprizone model of multiple sclerosis.</a> Glia. 70 (7), 1215-1250 (2022).</li>
<li>Jia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microglial+phagocytosis+in+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of microglial phagocytosis in ischemic stroke.</a> Front Immunol. 12, 790201(2021).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+nanovesicle+protects+against+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+through+enhancing+myelin+clearance+by+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Neutrophil nanovesicle protects against experimental autoimmune encephalomyelitis through enhancing myelin clearance by microglia.</a> ACS. 16 (11), 18886-18897 (2022).</li>
<li>Cignarella, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+activation+on+microglia+promotes+myelin+debris+clearance+and+remyelination+in+a+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">TREM2 activation on microglia promotes myelin debris clearance and remyelination in a model of multiple sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 140 (4), 513-534 (2020).</li>
<li>Dufor, T., Lohof, A. M., Sherrard, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+stimulation+as+a+therapeutic+approach+for+brain+modulation+and+repair%3A+Underlying+molecular+and+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetic stimulation as a therapeutic approach for brain modulation and repair: Underlying molecular and cellular mechanisms.</a> Int J Mol Sci. 24 (22), 16456(2023).</li>
<li>Martin, D. M., McClintock, S. M., Forster, J. J., Lo, T. Y., Loo, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+enhancing+effects+of+rTMS+administered+to+the+prefrontal+cortex+in+patients+with+depression%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+individual+task+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Depress+Anxiety%22%5BJournal%5D)">Cognitive enhancing effects of rTMS administered to the prefrontal cortex in patients with depression: A systematic review and meta-analysis of individual task effects.</a> Depress Anxiety. 34 (11), 1029-1039 (2017).</li>
<li>Kamo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+peripheral+magnetic+stimulation+for+impairment+and+disability+in+people+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Repetitive peripheral magnetic stimulation for impairment and disability in people after stroke.</a> Cochrane Database Syst Rev. 9 (9), CD011968(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wang, L., Ni, X., Jiang, M., Zhao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+with+different+application+parameters+for+post-stroke+cognitive+impairment%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Fron+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Efficacy of repetitive transcranial magnetic stimulation with different application parameters for post-stroke cognitive impairment: A systematic review.</a> Fron Neurosci. 18, 1309736(2024).</li>
<li>Chu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+magneto-acoustic+stimulation+attenuates+synaptic+plasticity+impairment+through+the+activation+of+Piezo1+in+alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Research%22%5BJournal%5D)">Transcranial magneto-acoustic stimulation attenuates synaptic plasticity impairment through the activation of Piezo1 in alzheimer's disease mouse model.</a> Research. 6, 0130(2023).</li>
<li>Zhai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+trans-spinal+magnetic+stimulation+promotes+microglial+phagocytosis+of+myelin+debris+after+spinal+cord+injury+through+LRP-1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Repeated trans-spinal magnetic stimulation promotes microglial phagocytosis of myelin debris after spinal cord injury through LRP-1.</a> Exp Neurol. 379, 114844(2024).</li>
<li>Qin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+ameliorates+cognitive+deficits+in+mice+with+radiation-induced+brain+injury+by+attenuating+microglial+pyroptosis+and+promoting+neurogenesis+via+BDNF+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Comm+Signal%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation ameliorates cognitive deficits in mice with radiation-induced brain injury by attenuating microglial pyroptosis and promoting neurogenesis via BDNF pathway.</a> Cell Comm Signal. 22 (1), 216(2024).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+astrocytes+responses+contribute+to+alleviating+inflammatory+damage+by+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+in+rats+with+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia and astrocytes responses contribute to alleviating inflammatory damage by repetitive transcranial magnetic stimulation in rats with traumatic brain injury.</a> Neurochem Res. 49 (9), 2636-2651 (2024).</li>
<li>Luo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+improves+neurological+function+and+promotes+the+anti-inflammatory+polarization+of+microglia+in+ischemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation improves neurological function and promotes the anti-inflammatory polarization of microglia in ischemic rats.</a> Front Cell Neurosci. 16, 878345(2022).</li>
<li>Jannati, A., Oberman, L. M., Rotenberg, A., Pascual-Leone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+mechanisms+of+brain+plasticity+by+transcranial+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the mechanisms of brain plasticity by transcranial magnetic stimulation.</a> Neuropsychopharmacol. 48 (1), 191-208 (2023).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+theta-burst+stimulation+improves+motor+function+by+inhibiting+neuronal+pyroptosis+and+regulating+microglial+polarization+via+TLR4%2FNF%CE%BAB%2FNLRP3+signaling+pathway+in+cerebral+ischemic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammat%22%5BJournal%5D)">Intermittent theta-burst stimulation improves motor function by inhibiting neuronal pyroptosis and regulating microglial polarization via TLR4/NFκB/NLRP3 signaling pathway in cerebral ischemic mice.</a> J Neuroinflammat. 19 (1), 141(2022).</li>
<li>Eichler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cytokines+mediate+plasticity+induced+by+10+Hz+repetitive+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cytokines mediate plasticity induced by 10 Hz repetitive magnetic stimulation.</a> J Neurosci. 43 (17), 3042-3060 (2023).</li>
<li>Kent, S. A., Miron, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+regulation+of+central+nervous+system+myelin+health+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia regulation of central nervous system myelin health and regeneration.</a> Nat Rev Immunol. 24 (1), 49-63 (2024).</li>
<li>Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+multiple+sclerosis%3A+Protectors+turn+destroyers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia in multiple sclerosis: Protectors turn destroyers.</a> Neuron. 110 (21), 3534-3548 (2022).</li>
<li>Sarlus, H., Heneka, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Microglia in Alzheimer's disease.</a> J Clin Invest. 127 (9), 3240-3249 (2017).</li>
<li>Cantuti-Castelvetri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+cholesterol+clearance+limits+remyelination+in+the+aged+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defective cholesterol clearance limits remyelination in the aged central nervous system.</a> Science. 359 (6376), 684-688 (2018).</li>
<li>Norton, W. T., Poduslo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+in+rat+brain%3A+Method+of+myelin+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Myelination in rat brain: Method of myelin isolation.</a> J Neurochem. 21 (4), 749-757 (1973).</li>
<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+An+immunobiologic+process%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: An immunobiologic process.</a> Immunity. 44 (3), 463-475 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>DAPI</td><td>Beyotime, 중국</td><td>P0131</td><td></td></tr><tr><td>BCA 키트</td><td>ThermoFisher Scientific, 미국</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Bv-2 세포</td><td>ATCC</td><td>CBP60922</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 12웰 플레이트</td><td>Biofil, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 24웰 플레이트</td><td>Biofil, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>공초점 레이저 스캐닝 현미경</td><td>Zeiss, 독일</td><td>800</td><td></td></tr><tr><td>항온 인큐베이터</td><td>ThermoFisher Scientific, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFSE</td><td>MedChemExpress, 미국</td><td>HY-158820</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-배양 배지</td><td>KeyGen, 중국</td><td>KGL1202-500</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco, 미국</td><td>16250078</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Abcam, 미국</td><td>ab48004</td><td></td></tr><tr><td>자기 자극 장치</td><td>Yiruide, 중국</td><td>CCY-IA</td><td></td></tr><tr><td>자기 자극 코일</td><td>Yiruide, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>BioSharp, 중국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen, 중국</td><td>KGL2210-500</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Gibco, 미국</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>MedChemExpress, 미국</td><td>HY-B1779</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>KeyGen, 중국</td><td>KGL2107-100</td><td></td></tr><tr><td>초원심분리기</td><td>Beckman, 미국</td><td>L-100XP</td><td></td></tr></tbody></table>

반복되는 자기 자극 하에서 체외 에서 myelin 파편의 미세아교세포 형성 평가

Assessing Microglial Phagocytosis of Myelin Debris in vitro Under Repeated Magnetic Stimulation

이 연구에서는 초기에 뇌 유래 미엘린 파편을 추출하고 반복적인 자기 자극을 활용하여 식세포 능력을 향상시켜 BV-2 미세아교세포를 체외 에서 공급했습니다. 그 후, BV-2 미세아교세포를 배양하고 자기 자극 전에 LPS 개입을 실시하여 엄격한 신경학적 검증하에 미세아교세포의 생체 내 상태를 모방했습니다. 그 후, LPS 자극 후 rMS 중재가 적용되었습니다. 세포의 식균작용을 검증하기 위해 IBA-1을 사용하여 미세아교세포를 표지하고 CFSE를 사용하여 미엘린 파편을 표지하는 면역형광을 사용했습니다(그림 1). 면역형광 결과는 대조군에 비해 LPS 그룹에서 포위된 외부 미엘린 파편(CFSE)의 면적과 IBA+/미엘린+ 세포의 수가 모두 유의하게 감소한 것으로 나타났습니다. 더욱이, 자기 자극 후, 삼켜진 외부 미엘린 파편의 면적과 IBA+/미엘린+ 세포의 수는 LPS...

반복되는 자기 자극 하에서 체외 에서 Myelin 파편의 미세아교세포 형성 평가

Microglia, the resident phagocytes of the central nervous system (CNS), play a pivotal role in maintaining CNS integrity and homeostasis by removing ...

assessing-microglial-phagocytosis-myelin-debris-vitro-under-repeated

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Microglia은 중추 신경계의 방어 및 면역 감시의 첫번째 라인을 제공 macrophages를 거주하고 있습니다. MicroRNAs는 활성화 및 macrophages의 차별화 등 많은 생리 과정에 중요한 역할을 규제 분자입니다. 이 문서에서는 microglia에서 microRNAs의 측정을위한 방법을 설명합니다.

일반 CNS의 실시간 PCR에 의한과 Neuroinflammation 동안 Microglia에 MicroRNAs의 탐지

이 비디오는 자기 세포 분류를 사용하여 마우스 뇌의 탈수초 병변에서 미세아교세포를 추출하는 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜에는 미세아교세포를 포함하는 병변된 뇌 조직을 절개하고, 특정 효소로 조직을 처리하여 단세포 현탁액을 얻고, 미세아교세포 수용체 특이적 자기 비드를 사용하여 미세아교세포를 분리하는 것이 포함됩니다.

Isolating Microglia from Mouse Brain Demyelinating Lesions Using Magnetic Activated Cell Sorting(자기 활성화 세포 분류를 사용한 마우스 뇌 탈수초 병변에서 미세아교세포 분리)

미세 아교 세포는 세포 외 환경에서 소재를 탐식거나 삼키는 고용량으로 중추 신경계 (CNS)의 상주 면역 세포이다. 여기 시냅스 구성 요소의 미세 아교 세포 - 매개 말림을 시각화 및 측정 광범위하게 적용, 신뢰성, 높은 정량 분석​​은 설명한다.

말림 분석 : CNS 식세포와 신경 세포 사이의 상호 작용을 평가하기위한 프로토콜

조직의 항상성 및 부적절한 식세포 기능의 유지 보수 병리에 연루되었습니다에 대한 소교 식균 작용은 매우 중요하다. 그러나, 생체 내에서 미세 아교 세포의 기능을 평가하는 것은 기술적으로 어려운 것이다. 우리는 정확하게 모니터링 및 생리 학적 환경에서 미세 아교 세포의 식세포 가능성을 정량화하기위한 간단하지만 강력한 기술을 개발했다.

망막 미세 아교 식세포의 기능을 평가<em&gt; 생체</em&gt;은 유동 세포 계측법 기반 분석을 사용하여

여기, 우리는 시험 관내 실험에 대한 출생 마우스 새끼에서 미세 아교 세포를 분리하는 프로토콜 (1 일)을 제시한다. 단리 방법이 즉석에서 모두 높은 수율 및 순도, 소교 생물학의 해명을 목적으로 다양한 실험을 허용 다른 방법에 비해 상당한 이점을 생성한다.

향상된 순도와 다양성에 차 미세 아교 세포의 신속하고 세련된 CD11b를 자기 절연

선물이 phagocytic 용량의 기본 murine 골 수 유래 세포 붙일 레이블된 myelin 파편과 세포내 지질 작은 물방울 얼룩을 사용 하 여 평가 하는 방법.

생체 외에서 골 수 유래 세포에 의해 Myelin 파편 식 균 작용

신경 퇴행성 질환은 dysregulated 마이크로글리아 기능과 관련이 있습니다. 이 문서는 iPSC-대식세포에 의한 신경 모세포종 세포의 phagocytosis의 체외 분석방법을 설명합니다. 정량현미경 판독은 살아있는 세포 시간 경과 화상 진찰 과 고정 세포 고함량 화상 진찰을 위해 기술됩니다.

iPSC-대식세포에 의한 죽은 신경 모세포종 세포의 식증에 대한 체외 정량적 이미징 분석

1차 미세아교세포 배양은 일반적으로 새로운 항염증 분자를 평가하는 데 사용됩니다. 본 프로토콜은 신생아 새끼로부터 미세아교세포를 자기적으로 분리하는 재현 가능하고 관련성 있는 방법을 설명합니다.

일차 세포 배양을 위한 Neonate 마우스의 미세아교세포의 자기 분리

여기에서, 우리는 원주형 자기 활성화 세포 분류를 활용하여 탈수초성 질환의 동물 모델에서 원발성 미세아교세포를 분리하고 정제하는 프로토콜을 제시한다.

탈수초화의 동물 모델에서 자기 활성화 세포 분류에 의한 마우스 일차 미세아교세포의 분리

여기에서는 유세포 분석을 사용하여 vGLUT1 양성 시냅스 및 pHRodo Red 표지 미처리 시냅토좀의 미세아교세포 삼킴을 정량화하는 두 가지 프로토콜을 제시합니다.

유세포분석을 사용한 시냅스 물질의 미세아교세포 삼킴 정량화

우리는 상대적으로 짧은 시간에 MACS(magnetically activated cell sorting)를 사용하여 쥐의 시상하부(또는 이에 상응하는 작은 뇌 구조)에서 미세아교세포를 분리하는 프로토콜을 설명합니다. MACS 분류된 시상하부 미세아교세포는 체외 분석에 사용할 수 있으며 in vitro 분석을 수행하기 위해 도금할 수 있습니다.

Isolation of Hypothalamic Microglia from Freshly Perfused Adult Mouse Brain by Magnetic-Activated Cell Sorting  

배우세요 반복 자기 자극이 미세아교세포의 미엘린 파편 탐식에 미치는 영향을 체외 공배양 모델로 평가하는 방법을. 이 기법은 신경재활 치료 전략 개발에 활용됩니다.

반복되는 자기 자극 하에서 체외 에서 Myelin 파편의 미세아교세포 형성 평가

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