Name: 토종 장의 생리학적 특성을 반영하는 2차원 돼지 장 오가노이드(Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: 배우세요 2차원 돼지 장 오가노이드 모델을 활용한 생리학적 특성 분석 방법입니다. TEER 측정과 Ussing 챔버 실험을 통해 소장과 대장의 상피 기능 및 물질 운송 특성을 실시간으로 평가할 수 있습니다.

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이 규약을 위해 건강한 돼지 두 마리(Bentheim Blacked Pied 돼지, 수컷 1마리, 암컷 1마리, 생후 4.5개월, 약 65kg)를 포획 화살과 출혈로 희생시켰다. 동물보호법에 따르면 이것(도축 및 조직 제거)은 동물실험으로 분류되지 않고 동물복지담당관(등록번호)에게 알려야 합니다. TiHo-T-2023-15)를 수여했습니다.
1. 인서트 코팅
알림: 모든 단계는 안전 캐비닛 아래에서 멸균 재료로 수행됩니다. 프로토콜의 모든 단계는 달리 명시되지 않은 경우 얼음 위에서 수행됩니다.
<ol>
	<li>얼어붙은 기저막을 얼음 위에서 실온에서 최소 1시간 동안 또는 4°C의 얼음 위에서 하룻밤 동안 해동합니다. 기저막을 1:40(v/v)과 얼음처럼 차가운 멸균 인산염 완충 식염수(PBS)를 원뿔형 튜브에 혼합합니다.</li>
	<li>포장에서 인서트가 있는 멸균 플레이트를 제거합니다. 200μL의 기저막 혼합물을 각 인서트의 정점 구획에 추가합니다.</li>
	<li>웰 플레이트의 뚜껑을 교체하고 인큐베이터에서 37°C, 5% CO2 에서 최소 1.5시간 동안 배양합니다.</li>
	<li>세포를 파종하기 전에 용액을 조심스럽게 흡인하십시오. 흡인 중에 팁이 멤브레인에 닿지 않도록 하십시오.</li>
</ol>
2. 2D 오가노이드 단층 생성
참고: 돼지 결장 오가노이드는 돼지 제주날 오가노이드25에 대해 설명된 대로 생성 및 배양됩니다. 3D 오가노이드 생성 후에는 지속적인 성장을 보장하기 위해 매주 전달하면서 최소 3-4주 동안 배양해야 합니다. 후속 단계에서 용해되는 3D 오가노이드를 포함하는 각 돔 내의 세포 수는 단일 막관통 필터를 커버하기에 충분합니다. 단층 생성 전에 3D 오가노이드는 이전 성장 및 오염 가능성을 확인하기 위해 광학 품질 관리를 받았습니다(그림 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig01.jpg"> 
그림 1: 대표적인 3D 오가노이드. 3차원 (A) 제주넘 및 (B) 결장 오가노이드는 단층을 생성하기 전에 현미경으로 주의 깊게 검사됩니다. 이전의 성장 패턴, 구조적 무결성 및 불순물이나 오염의 존재 여부를 평가하는 데 특별한 주의를 기울입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<ol>
	<li>3D crypt organoid가 있는 웰에서 오가노이드 배지(표 1)를 제거합니다. 웰당 얼음처럼 차가운 PBS 1mL를 추가하고 p1000 팁으로 위아래로 피펫팅하여 기저막을 부드럽게 용해합니다.</li>
	<li>10mL의 얼음처럼 차가운 PBS가 미리 채워진 15mL 튜브에 용해된 모든 오가노이드를 수집합니다. 튜브를 250 x g에서 원심분리, 4°C에서 10분 동안 가열합니다. 상층액을 흡인합니다.</li>
	<li>1mL의 따뜻한(37°C) 0.05%(v/v) 트립신/EDTA(이 단계에서 튜브 2개를 모을 수 있음)에 펠렛을 재현탁합니다. 수조에서 37 ° C에서 5 분 동안 배양하고 나중에 얼음에 직접 올려 반응을 멈 춥니 다.</li>
	<li>p1000 팁으로 얼음 위에 20회, p1000 팁 + p200 팁을 위에 올려 15회 다시 얼음 위에 재현합니다. 10%(v/v) 태아 송아지 혈청(FCS)이 보충된 얼음처럼 차가운 DMEM 10mL를 추가합니다.</li>
	<li>1,000 x g에서 원심분리기 튜브, 4°C에서 10분. 상층액을 버리고 펠렛을 1mL의 단층 배지에 재현탁시킵니다(표 1).</li>
	<li>제조업체의 지침에 따라 Neubauer 챔버를 사용하여 mL당 살아있는 세포의 수를 측정합니다.</li>
	<li>이 시점에서 정점 구획에서 코팅 용액을 제거하고 500μL의 따뜻한(37°C) 단층 매체로 교체합니다. 기저측 구획에 3mL의 단층 배지를 추가합니다.</li>
	<li>3단계에서 자세히 설명한 대로 각 빈 트랜스웰 인서트의 블랭크 저항(TEER)을 측정합니다. 정점 챔버에 배지가 없는 시간은 세포가 건조되는 것을 방지하기 위해 가능한 한 짧아야 합니다.</li>
	<li>정점 단층 배지를 제거하고 jejunal 2D 배양 2 x 105 상피 세포 및 결장 2D 배양의 경우 각 트랜스웰의 정점 챔버에서 500 μL의 단층 배지에 1.5 x 105 상피 세포를 추가합니다.</li>
	<li>매체를 변경하고 2-3일마다 TEER를 측정합니다. 매체가 변경되기 전에 TEER를 측정합니다. 정점 및 기저 구획의 배지를 조심스럽게 흡인하고 500 μL 또는 3 mL의 신선하고 따뜻한(37 °C) 배지로 교체합니다.<ol>
		<li>제주눔 오가노이드의 경우: 16일째에 파종 후 단층 배지에서 분화 배지로 변경합니다(표 1). 결장 오가노이드의 경우: 7일째에 배지를 분화 배지로 변경합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>매일 분화 매체를 교체하고 각 매체 변경 중에 TEER 측정을 수행합니다. 18일(jejunal 오가노이드의 경우) 또는 9일(대장 오가노이드의 경우)에 시딩 후 기능 실험을 진행합니다.</li>
</ol>
3. 경상피 전기 저항(TEER) 측정
알림: 모든 측정은 오염을 방지하기 위해 안전 캐비닛 아래에서 수행됩니다. 세포를 시딩하기 전에 코팅된 모든 빈 트랜스웰을 측정하여 개별 blank 값을 얻습니다. 볼트-옴 미터는 도입된 USB 장치에 값을 저장합니다.
<ol>
	<li>젓가락 전극을 70%(v/v) 에탄올로 세척하고 전극을 완전히 건조시킵니다. 한편, 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 캐비닛 아래에 놓습니다.</li>
	<li>젓가락 전극의 짧은 팔을 인서트의 정점 구획에 삽입하고 긴 팔을 인서트의 기저부 구획에 삽입합니다. 짧은 팔과 세포층의 접촉을 피하십시오.</li>
	<li>각 트랜스웰의 경상피 전기 저항을 측정합니다. 안정적인 측정을 보장하기 위해 볼트-옴 미터가 평형을 이루도록 합니다. Store 버튼을 클릭하여 TEER 값을 측정합니다.</li>
	<li>나머지 웰에 대해 3.2 및 3.3 단계를 계속합니다. 마지막 웰에 도달한 후 볼트-옴 미터는 USB 장치에 데이터를 저장하라는 요청을 엽니다. 저장을 클릭합니다.</li>
	<li>각 플레이트 후와 측정이 끝날 때 전극을 청소하고 보관하기 전에 완전히 건조시키십시오.</li>
	<li>측정된 세포 값에서 세포를 시드하기 전에 결정된 빈 값을 뺍니다.</li>
</ol>
4. Ussing 챔버 기술을 사용한 전기 생리학적 수송 연구
참고: 전기생리학적 수송 연구의 결정은 상피로 나뉘어진 두 개의 챔버 구획으로 구성된 Ussing 챔버를 사용하여 수행됩니다. 이 챔버는 Ag / AgCl 전극에 의해 전압 클램프에 연결됩니다. 이 기술은 전압 클램프에 의해 유도 된 단락 전류 (Isc)의 변화와 옴의 법칙에 의해 계산 된 조직 저항(RT)을 통해 상피의 활성 전기 전달 과정을 추적 할 수 있습니다. Isc 및RT 는 전체 실험 동안 6초마다 기록됩니다. 실험하는 동안 조사된 조직은 탄수화물로 폭기되고 실행 가능한 조건을 보장하기 위해 변형된 Krebs-Henseleit 용액으로 배양됩니다. 인도메타신(Indomethacin, 10μM)을 완충액에 첨가하여 프로스타글란딘 합성을 억제한다26.
<ol>
	<li>점막 및 장막암 완충 용액을 37°C로 예열하고 발암물질로 폭기합니다. 각 개별 챔버에 대해 빈 인서트를 사용하여 단일 챔버를 조립합니다. 트랜스웰의 정점 면이 모두 같은 방향을 향하고 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>모든 챔버를 예열된 점막 완충 용액 5mL로 채웁니다(표 2). vol의 모든 전극을 연결하십시오.tage clamp 제조업체의 지침에 따라 개별 챔버에 연결합니다. 정확한 측정을 위해 전극을 방해하는 가스 기포가 없는지 확인하십시오.</li>
	<li>전압 클램프 소프트웨어에서 Rf/dpI 버튼을 클릭하여 이러한 조건으로 Ussing 챔버 소프트웨어를 보정합니다. 사용된 모든 빈 인서트의 저항은 동일해야 하며(~ 70 Ohm) 전류는 약 0 mV(± 5 mV)여야 합니다. 일부 챔버의 경우가 그렇지 않은 경우 시스템에 전극이나 기포가 적절하게 배치되었는지 확인하십시오.</li>
	<li>모든 전극을 제거하고 사용한 버퍼 용액을 폐기하십시오. 모든 개별 챔버를 열고 빈 인서트를 제거합니다. 개별 챔버의 순서가 유지되는지 확인하십시오.</li>
	<li>인서트가 있는 웰 플레이트를 인큐베이터에서 안전 캐비닛으로 이동합니다. 기저측과 정점 매체를 조심스럽게 흡인합니다.</li>
	<li>정점 챔버에 500μL의 따뜻한(37°C) 점막 완충액을 추가하고 기저측 챔버에 3mL의 혈청 완충액을 추가하여 세포를 세척합니다. 버퍼를 흡입하고 2회 반복합니다.</li>
	<li>플레이트에서 인서트를 제거합니다. 인서트의 지지대를 부드럽게 제거합니다. 인서트를 Ussing 챔버에 놓고 인서트의 방향이 교정 단계에서와 동일한지 확인하십시오. 그림 2에 표시된 대로 개별 챔버를 조립합니다.</li>
	<li>세포의 기저측 쪽을 향하는 챔버에 5mL의 혈청 완충액을 채우고(표 2), 정점 챔버를 향하는 챔버에 5mL의 점막 완충액을 채웁니다.</li>
	<li>전극과 폭기 튜브를 각 개별 챔버에 연결합니다. Ussing 소프트웨어에서 측정을 시작하십시오. 15분 동안 평형을 유지합니다.</li>
	<li>조건을 개방 회로에서 단락 회로 조건으로 변경합니다. 5분에서 10분 동안 평형을 유지합니다. 혈청 챔버에 10μM의 포스콜린을 추가합니다. 주: 포스콜린의 추가는 개별적인 장 세그먼트 및 연구 질문에 따라서 다른 대리인/물질에 의해 대체될지도 모릅니다.</li>
	<li>15 분 후에, forskolin와 동일한 방법으로 대리인을 더 추가하거나 측정을 중지하십시오. 개별 챔버에서 폭기 튜브와 전극을 제거합니다. 양쪽 챔버의 완충 용액을 그릇에 붓습니다.</li>
	<li>챔버를 분해하고 인서트를 폐기하거나 후속 분석(예: 면역조직화학 또는 발현 분석)에 사용합니다.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67666/67666fig02.jpg"> 
그림 2: Ussing 챔버의 개략적 구조. 성장된 2D 단층이 있는 멤브레인으로 분할된 두 챔버가 표시됩니다. 두 챔버 모두 발암원으로 폭기되어 있습니다. 전압과 전류는 챔버당 두 개의 전극으로 모니터링됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67666/67666fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
5. Ussing 챔버 설정에 의해 생성된 데이터 분석
<ol>
	<li>전압 클램프 소프트웨어에서 생성된 데이터를 적절한 스프레드시트 편집기로 가져옵니다.</li>
	<li>basal Isc 및 Rt 값을 결정하려면 단락 조건을 초기화한 후 10분 후에 수행된 10개의 연속 데이터 점의 평균을 계산합니다. 각 개별 챔버는 기술적 복제물 역할을 하며, 오가노이드의 모든 통로는 생물학적 복제물 역할을 합니다.</li>
	<li>적용된 약제의 효과를 평가하려면 약제가 추가되기 직전에 연속된 10개의 데이터 점의 평균을 계산하십시오. 이 평균을 에이전트가 적용된 후 관찰된 최대값(또는 최소값)과 비교합니다. 얻은 데이터는 평균 ± 표준 편차(SD)로 표시됩니다.</li>
</ol>

<ol><li>Hornbuckle, W. E., Tennant, B. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHornbuckle%2C+WE+%22Clinical+Biochemistry+of+Domestic+Animals%22">Clinical Biochemistry of Domestic Animals</a>. , Academic Press. 367-406 (1997).</li>
<li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+epithelial+cells%3A+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14 (3), 141-153 (2014).</li>
<li>Pham, T. A., Lawley, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+insights+on+intestinal+dysbiosis+during+bacterial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Emerging insights on intestinal dysbiosis during bacterial infections.</a> Curr Opin Microbiol. 17 (100), 67-74 (2014).</li>
<li>Garrett, W. S., Gordon, J. I., Glimcher, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostasis+and+inflammation+in+the+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Homeostasis and inflammation in the intestine.</a> Cell. 140 (6), 859-870 (2010).</li>
<li>Ternhag, A., Torner, A., Svensson, A., Ekdahl, K., Giesecke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-+and+long-term+effects+of+bacterial+gastrointestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Short- and long-term effects of bacterial gastrointestinal infections.</a> Emerg Infect Dis. 14 (1), 143-148 (2008).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+principles+of+humane+experimental+technique%22">The principles of humane experimental technique</a>. , Methuen & Co. Limited. London. (1959).</li>
<li>Zietek, T., Boomgaarden, W. A. D., Rath, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+screening%2C+oral+bioavailability+and+regulatory+aspects%3A+A+need+for+human+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Drug screening, oral bioavailability and regulatory aspects: A need for human organoids.</a> Pharmaceutics. 13 (8), 1280(2021).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).</li>
<li>Gonzalez, L. M., Williamson, I., Piedrahita, J. A., Blikslager, A. T., Magness, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lineage+identification+and+stem+cell+culture+in+a+porcine+model+for+the+study+of+intestinal+epithelial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cell lineage identification and stem cell culture in a porcine model for the study of intestinal epithelial regeneration.</a> PLoS One. 8 (6), e66465(2013).</li>
<li>Khalil, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+culture+system+for+adult+porcine+intestinal+crypts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">A novel culture system for adult porcine intestinal crypts.</a> Cell Tissue Res. 365 (1), 123-134 (2016).</li>
<li>Derricott, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+3D+intestinal+epithelium+model+for+livestock+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Developing a 3D intestinal epithelium model for livestock species.</a> Cell Tissue Res. 375 (2), 409-424 (2019).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+intestinal+enteroids%3A+a+new+model+for+studying+enteric+coronavirus+porcine+epidemic+diarrhea+virus+infection+and+the+host+innate+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Porcine intestinal enteroids: a new model for studying enteric coronavirus porcine epidemic diarrhea virus infection and the host innate response.</a> J Virol. 93 (5), e01682-e01718 (2019).</li>
<li>Min, S., Kim, S., Cho, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+tract+modeling+using+organoids+engineered+with+cellular+and+microbiota+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal tract modeling using organoids engineered with cellular and microbiota niches.</a> Exp Mol Med. 52 (2), 227-237 (2020).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aminopeptidase+N+expression%2C+not+interferon+responses%2C+determines+the+intestinal+segmental+tropism+of+porcine+deltacoronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Aminopeptidase N expression, not interferon responses, determines the intestinal segmental tropism of porcine deltacoronavirus.</a> J Virol. 94 (14), e00480-e00520 (2020).</li>
<li>van der Hee, B., Madsen, O., Vervoort, J., Smidt, H., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congruence+of+transcription+programs+in+adult+stem+cell-derived+jejunum+organoids+and+original+tissue+during+long-term+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Congruence of transcription programs in adult stem cell-derived jejunum organoids and original tissue during long-term culture.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 375(2020).</li>
<li>van der Hee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedures+for+generating+an+enhanced%2C+near+physiological+2D+culture+system+from+porcine+intestinal+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Optimized procedures for generating an enhanced, near physiological 2D culture system from porcine intestinal organoids.</a> Stem Cell Res. 28, 165-171 (2018).</li>
<li>Mussard, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+piglet+intestinal+3D+organoids+from+cryopreserved+epithelial+crypts+and+establishment+of+cell+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Culture of piglet intestinal 3D organoids from cryopreserved epithelial crypts and establishment of cell monolayers.</a> J Vis Exp. (192), e64917(2023).</li>
<li>Ussing, H. H., Zerahn, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+transport+of+sodium+as+the+source+of+electric+current+in+the+short-circuited+isolated+frog+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica+Scandinavica%22%5BJournal%5D)">Active transport of sodium as the source of electric current in the short-circuited isolated frog skin.</a> Acta Physiologica Scandinavica. 23 (2-3), 110-127 (1951).</li>
<li>Dengler, F., Kraetzig, A., Gabel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butyrate+protects+porcine+colon+epithelium+from+hypoxia-induced+damage+on+a+functional+level%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Butyrate protects porcine colon epithelium from hypoxia-induced damage on a functional level.</a> Nutrients. 13 (2), 305(2021).</li>
<li>Guschlbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trans-resveratrol+and+epsilon-viniferin+decrease+glucose+absorption+in+porcine+jejunum+and+ileum+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Trans-resveratrol and epsilon-viniferin decrease glucose absorption in porcine jejunum and ileum in vitro.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 165 (3), 313-318 (2013).</li>
<li>Herrmann, J., Hermes, R., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+transport+and+intraepithelial+metabolism+of+short-chain+fatty+acids+%28SCFA%29+in+the+porcine+proximal+colon+are+influenced+by+SCFA+concentration+and+luminal+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transepithelial transport and intraepithelial metabolism of short-chain fatty acids (SCFA) in the porcine proximal colon are influenced by SCFA concentration and luminal pH.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 158 (1), 169-176 (2011).</li>
<li>Klinger, S., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+inhibits+porcine+intestinal+glucose+and+alanine+transport%3A+Potential+roles+of+Na%28%2B%29%2FK%28%2B%29-ATPase+activity%2C+protein+kinase+A%2C+AMP-activated+protein+kinase+and+the+association+of+selected+nutrient+transport+proteins+with+detergent+resistant+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Resveratrol inhibits porcine intestinal glucose and alanine transport: Potential roles of Na(+)/K(+)-ATPase activity, protein kinase A, AMP-activated protein kinase and the association of selected nutrient transport proteins with detergent resistant membranes.</a> Nutrients. 10 (3), 302(2018).</li>
<li>Leonhard-Marek, S., Hempe, J., Schroeder, B., Breves, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+characterization+of+chloride+secretion+across+the+jejunum+and+colon+of+pigs+as+affected+by+age+and+weaning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological characterization of chloride secretion across the jejunum and colon of pigs as affected by age and weaning.</a> J Comp Physiol B. 179 (7), 883-896 (2009).</li>
<li>Schroeder, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effects+of+the+probiotic+Escherichia+coli+strain+Nissle+1917+on+acute+secretory+diarrhea+in+a+pig+model+of+intestinal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Preventive effects of the probiotic Escherichia coli strain Nissle 1917 on acute secretory diarrhea in a pig model of intestinal infection.</a> Dig Dis Sci. 51 (4), 724-731 (2006).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+organoid-based+2D+monolayers+mimic+physiological+and+pathophysiological+properties+of+the+pig+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intestinal organoid-based 2D monolayers mimic physiological and pathophysiological properties of the pig intestine.</a> PLoS One. 16 (8), e0256143(2021).</li>
<li>Ferreira, S. H., Moncada, S., Vane, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indomethacin+and+aspirin+abolish+prostaglandin+release+from+the+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+New+Biol%22%5BJournal%5D)">Indomethacin and aspirin abolish prostaglandin release from the spleen.</a> Nat New Biol. 231 (25), 237-239 (1971).</li>
<li>Dykstra, G. D., Kawasaki, M., Ambrosini, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+bovine+organoid+technology+using+small+and+large+intestinal+monolayer+interfaces%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Advancements in bovine organoid technology using small and large intestinal monolayer interfaces.</a> J Vis Exp. (208), e67010(2024).</li>
<li>Srinivasan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TEER+measurement+techniques+for+in+vitro+barrier+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lab+Autom%22%5BJournal%5D)">TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems.</a> J Lab Autom. 20 (2), 107-126 (2015).</li>
<li>Hoffmann, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caco-2%2FHT29-MTX+co-cultured+cells+as+a+model+for+studying+physiological+properties+and+toxin-induced+effects+on+intestinal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Caco-2/HT29-MTX co-cultured cells as a model for studying physiological properties and toxin-induced effects on intestinal cells.</a> PLoS One. 16 (10), e0257824(2021).</li>
<li>Beduneau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tunable+Caco-2%2FHT29-MTX+co-culture+model+mimicking+variable+permeabilities+of+the+human+intestine+obtained+by+an+original+seeding+procedure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+Biopharm%22%5BJournal%5D)">A tunable Caco-2/HT29-MTX co-culture model mimicking variable permeabilities of the human intestine obtained by an original seeding procedure.</a> Eur J Pharm Biopharm. 87 (2), 290-298 (2014).</li>
<li>Markov, A. G., Veshnyakova, A., Fromm, M., Amasheh, M., Amasheh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+expression+of+claudin+proteins+correlates+with+tight+junction+barrier+properties+in+rat+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+B%22%5BJournal%5D)">Segmental expression of claudin proteins correlates with tight junction barrier properties in rat intestine.</a> J Comp Physiol B. 180 (4), 591-598 (2010).</li>
<li>Pearce, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+tight+junction+composition+and+macromolecular+permeability+among+different+intestinal+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biology%22%5BJournal%5D)">Marked differences in tight junction composition and macromolecular permeability among different intestinal cell types.</a> BMC Biology. 16 (1), 19(2018).</li>
<li>Legen, I., Salobir, M., Kerc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+intestinal+epithelia+as+models+for+absorption+enhancement+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Comparison of different intestinal epithelia as models for absorption enhancement studies.</a> Int J Pharm. 291 (1-2), 183-188 (2005).</li>
<li>Moeser, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+signaling+pathways+activated+by+weaning+mediate+intestinal+dysfunction+in+the+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Stress signaling pathways activated by weaning mediate intestinal dysfunction in the pig.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 292 (1), G173-G181 (2007).</li>
<li>Moeser, A. J., Ryan, K. A., Nighot, P. K., Blikslager, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastrointestinal+dysfunction+induced+by+early+weaning+is+attenuated+by+delayed+weaning+and+mast+cell+blockade+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gastrointestinal dysfunction induced by early weaning is attenuated by delayed weaning and mast cell blockade in pigs.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 293 (2), G413-G421 (2007).</li>
<li>Seamon, K. B., Padgett, W., Daly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forskolin%3A+unique+diterpene+activator+of+adenylate+cyclase+in+membranes+and+in+intact+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Forskolin: unique diterpene activator of adenylate cyclase in membranes and in intact cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (6), 3363-3367 (1981).</li>
<li>Herrmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+diversity+of+electrogenic+glucose+transport+characteristics+in+the+small+intestines+of+weaned+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Biochem+Physiol+A+Mol+Integr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Segmental diversity of electrogenic glucose transport characteristics in the small intestines of weaned pigs.</a> Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 163 (1), 161-169 (2012).</li>
<li>Wright, E. M., Martin, M. G., Turk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+absorption+in+health+and+disease--sugars%5BTitle%5D)+AND+%22Best+Pract+Res+Clin+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Intestinal absorption in health and disease--sugars.</a> Best Pract Res Clin Gastroenterol. 17 (6), 943-956 (2003).</li>
<li>Crane, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%2B+-dependent+transport+in+the+intestine+and+other+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Fed+Proc%22%5BJournal%5D)">Na+ -dependent transport in the intestine and other animal tissues.</a> Fed Proc. 24 (5), 1000-1006 (1965).</li>
<li>Inagaki, A., Yamaguchi, S., Ishikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amiloride-sensitive+epithelial+Na%2B+channel+currents+in+surface+cells+of+rat+rectal+colon%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Amiloride-sensitive epithelial Na+ channel currents in surface cells of rat rectal colon.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 286 (2), C380-C390 (2004).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 웰 플레이트</td><td>SARSTEDT AG & Co. KG</td><td>8,33,922</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>MedChemExpress, New Jersey, USA</td><td>HY-10432</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>accujet S</td><td>Brand GmbH + Co KG, Wertheim, Germany</td><td>26351</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>12634010</td><td>Store at 4 &deg; C</td></tr><tr><td>B27 supplement</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>17504044</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>CaCl2.2 H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>C3306</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>D(+)-Glucose (wasserfrei)</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>1.08337</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>DAPT</td><td>MedChemExpress, New Jersey, USA</td><td>HY-13027</td><td>-20 &deg;C에 보관 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck KGaA, 다름슈타트, 독일</td><td>M4125</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>154938</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>전극 세트(AgCl/PtIr/Std.)</td><td>Scientific Instruments, Simmerath, Germany</td><td>#1316</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, 함부르크, 게마니</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus&nbsp;</td><td>Eppendorf SE, Hamburg,</td><td>Gemany 3123000047</td><td></td></tr><tr><td>EVOM3 Manual Epithelial Volt Ohm Meter</td><td>World precision instruments, Sarasota, USA</td><td>EVM-MT-03-01</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>F7524</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>Forskolin</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>F6886</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할</td></tr> <tr>때 해동<td>gasprofi 1 SCS micro</td><td>WLD-TEC GmbH, Arsenhausen, Germany</td><td>60,04,000</td><td></td></tr><tr><td>Gastrin 1</td><td>MedChemExpress, New Jersey, USA</td><td>HY-P1097</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>35050061</td><td>Store at 4 &deg;C.&nbsp;</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>1090571000</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>H0887</td><td>4 &deg에서 보관; C</td></tr><tr><td>Herasafe 2025 Class II 생물 안전 캐비닛</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, 미국</td><td>51033316</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터 ICO105</td><td>Memmert GmbH + Co.KG, Schwabach, Germany</td><td>62,20,143</td><td></td></tr><tr><td>Indomethacin</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>I7378</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>1.04936</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>G7513</td><td>-20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>LWRN 상등액</td><td>자체 제작&nbsp;</td><td></td><td>-20°C에서 보관하십시오. 필요할 때 해동하십시오. LWRN 보충제는 Miyoshi et al. (2012)</td></tr><tr><td>Matrigel Basement Membrane Matrix, LDEV-free, 10 mL</td><td>Corning Incorporated - Life Sciences</td><td>354234</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 얼음에서 조심스럽게 해동</td></tr><tr><td>Megafuge 1.OR</td><td>Heraeus Instruments, Osterode, Germany</td><td>75003060</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2.6 H2O</td><td>Merck KGaA, 독일 다름슈타트</td><td>1.05833</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>Na2HPO4.2H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>1.06580</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>N-Acetyl-L-cysteine</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>A7250</td><td>-20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck KGaA, 독일 다름슈타트</td><td>1.06404</td><td>실온 NaH</td></tr><tr><td>2PO4에서 보관하십시오. H2O</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>1.06346</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck KGaA, Darmstadt, Germany</td><td>1.06329</td><td>실온에서 보관</td></tr><tr><td>Neubauer Improved chamber</td><td>Glaswarenfabrik Karl Hecht, Sondheim vor der Rh&ouml; n, 독일</td><td>40442712</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX70 iverted Microscope</td><td>Olympus Corporation, 함부르크, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, USA</td><td>15140122</td><td>-20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>PolymyxinB</td><td>Sigma-Aldrich, Schnelldorf, Germany</td><td>P4932-1MU</td><td>-20 &deg;C에 보관 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>Primovert 현미경 스탠드 쌍안 광관 포함</td><td>Zeiss</td><td>415510-1101-000</td><td></td></tr><tr><td>rm EGF</td><td>Prepotech, New Jersey, USA</td><td>315-09</td><td>Store at -20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>SB202190</td><td>MedChemExpress, New Jersey, USA</td><td>HY-10295</td><td>-20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr><tr><td>Snapwell 3801</td><td>Corning Incorporated - Life Sciences</td><td>3801</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, 미국</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Ussing Base System</td><td>Scientific Instruments, Simmerath, Germany</td><td>#1317</td><td></td></tr><tr><td>Ussing Diffusion Chamber</td><td>Scientific Instruments, Simmerath, Germany</td><td>SKU 1307</td><td></td></tr><tr><td>Voltage/Current Clamp VCC6</td><td>Scientific Instruments, Simmerath, Germany</td><td>SKU 1310</td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>MedChemExpress, New Jersey, 미국</td><td>HY-10583</td><td>-20 &deg;C. 필요할 때 해동</td></tr></tbody></table>

토종 장의 생리학적 특성을 반영하는 2차원 돼지 장 오가노이드(two-dimensional porcine intestinal organoids)

Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids Reflecting the Physiological Properties of Native Gut

이 프로토콜은 돼지의 제주넘(jejunum)과 결장(colon)에서 유래한 3D 오가노이드(organoid)를 세분화하여 돼지 2D 단층(porcine 2D monolayer)의 안정적인 생성을 촉진합니다. 제주눔 오가노이드의 경우 16일, 결장 오가노이드의 경우 9일의 배양 기간 동안 온전한 단층이 형성됩니다. 이러한 단층은 이후에 Ussing 챔버 기술을 사용하여 전기적 및 생리학적 수송 특성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
3D 오가노이드를 분해한 후 단일 세포를 코팅된 삽입물에 파종합니다. 세포 성장은 각 매체 변화 동안 경상피 전기 저항(TEER) 값을 측정하여 모니터링됩니다. 이 접근 방식을 사용하면 세포 증식과 온전한 단층의 형성을 모두 추적할 수 있으며, 이는 기능적 상피를 확립하는 데 필수적입니다. 초기에는 TEER 값이 기준선에 가깝지만 배양 기간 동안 점진적으로 증가하여 18일 후에는 제주눔 오가노이드(그림 3A</st...

토종 장의 생리학적 특성을 반영하는 2차원 돼지 장 오가노이드(Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids)

The gastrointestinal tract (GIT) serves both in the digestion of food and the uptake of nutrients but also as a protective barrier against pathogens. ...

two-dimensional-porcine-intestinal-organoids-reflecting-physiological

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 프로토콜은 인간 만능 세포를 장내 오가노이드로 분화할 수 있습니다. 이 프로토콜은 세포를 최종 내배엽, 후장 내배엽 및 장 상피의 집단으로 분화하여 정상적인 인간 발달을 모방합니다. 따라서 이 프로토콜은 장 발달과 질병 모델링 응용 분야를 모두 연구하는 데 적합합니다.

발달 및 질병 모델링 응용 분야를 위한 hiPSC 유래 장 오가노이드 생성

생검 유래 장 오가노이드 및 장기 온 칩 기술은 미세 생리학 플랫폼으로 결합되어 영역 별 장 기능을 재구성합니다.

인간 오가노이드와 장기 온 칩 기술을 결합하여 장 영역별 기능 모델링

이 프로토콜은 극성이 역인 작은 장 장내염을 활용하여 정점 표면에 접근 할 수있는 apical-out 괴사 장염 (NEC) 인 - 접시 모델을 설명합니다. 우리는 NEC 관련 상피 파괴를 검출하기위한 면역 형광 염색 프로토콜 및 NEC-in-a-dish 프로토콜을 실시한 apical-out enteroids의 생존력을 결정하는 방법을 제공합니다.

체외 괴사성 장염의 Apical-Out Enteroid 모델

본 프로토콜은 claudin-7 녹아웃 모델에서 결장 줄기 세포의 활성 및 기능을 연구하기 위해 쥐 결장 오가노이드 시스템을 확립하는 것을 설명합니다.

생체 외 장내 줄기세포 기능을 연구하기 위한 쥐 결장 음와의 3차원 배양

여기에서는 냉동보존된 상피 선와에서 돼지 장 3D 오가노이드를 배양하는 프로토콜을 설명합니다. 우리는 또한 3D 오가노이드에서 파생된 세포 단층을 확립하여 상피 세포의 정점 측면에 접근할 수 있도록 하는 방법을 설명합니다.

냉동보존된 상피선와에서 새끼돼지 장 3D 오가노이드의 배양 및 세포 단층 확립

여기서는 쥐의 장 오가노이드를 생성하고 여러 다운스트림 응용 분야에서 사용하는 프로토콜을 제시합니다. 쥐는 종종 선호되는 전임상 모델이며, 강력한 장 오가노이드 시스템은 in vivo 연구에 수반되는 in vitro 시스템의 필요성을 충족시킵니다.

쥐 장 오가노이드의 생성과 조작

개의 장 오가노이드와 Gut-on-a-Chip 미세유체 시스템의 통합은 인간 장 질환에 대한 관련 번역 모델을 제공합니다. 제시된 프로토콜은 장의 3D 형태 형성 및 동적 체외 모델링을 가능하게 하여 One Health를 통해 개와 인간의 장 질환에 대한 효과적인 치료법 개발을 지원합니다.

염증성 장 질환 환자에서 유래한 장 오가노이드를 사용한 개 장내 칩의 3차원 형태 형성

엔테로이드는 조직 생리학 및 병태생리학, 약물 개발 및 재생 의학을 연구하기 위한 새로운 모델로 부상하고 있습니다. 여기서는 관련 조직 세포 유형과의 공동 배양을 허용하는 소 일차 세포 2D 장내 유래 배양 시스템에 대해 설명합니다. 이 모델은 위장 연구 모델링을 위한 중개적 이점을 제공합니다.

중개 생물의학 연구에 응용하기 위한 소 1차 장내염 유래 2차원 단층 배양 시스템 생성

이 연구는 오가노이드에서 소 장 2D 단층을 생성하기 위한 프로토콜을 제시하여 숙주-병원체 상호 작용 연구를 위한 향상된 접근성을 제공합니다. 여기에는 멤브레인 무결성 및 기능을 평가하는 방법이 포함되며, 소의 위장 생리학을 모방하는 in vitro 모델을 발전시킵니다. 이 접근법은 향상된 치료 전략을 포함하여 상당한 생물 의학 및 농업 이점을 약속합니다.

Small and Large Intestinal Monolayer interface를 사용한 소 오가노이드 기술의 발전

이 동영상은 흰개미의 hindgut에 거주 미생물의 종 DNA를 추출하기위한 기술을 보여줍니다. 굿 미생물 커뮤니티를 시각화하는 데 유용합니다 젖은 마운트 슬라이드의 준비도 그림이고, 종의 풍부한 굿 환경을 통해 투어가 주어집니다.

마이트의 굿 미생물 (Zootermopsis Angusticollis)에서 DNA를 추출하고 굿 미생물을 떠올리

배우세요 2차원 돼지 장 오가노이드 모델을 활용한 생리학적 특성 분석 방법입니다. TEER 측정과 Ussing 챔버 실험을 통해 소장과 대장의 상피 기능 및 물질 운송 특성을 실시간으로 평가할 수 있습니다.

토종 장의 생리학적 특성을 반영하는 2차원 돼지 장 오가노이드(Two-dimensional Porcine Intestinal Organoids)

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