Name: 쥐 귀에 Mycobacterium avium 의 피내 접종 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: 배우세요 쥐 귀에 Mycobacterium avium을 피내 접종하여 비결핵성 마이코박테리아 감염 모델을 구축하는 방법을. 이 기법은 면역 반응 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
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<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>1mL 주사기</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 한천 삼판</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G 무딘 바늘</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>생물 안전 캐비닛</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr><tr><td>양면 테이프</td><td>스카치</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>해밀턴 701 N 마이크로리터 주사기</td><td>피셔</td><td>14-824-16</td><td></td></tr><tr><td>경조직 옴니 팁</td><td>피셔</td><td>15-340-102</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>켄트 사이언티픽</td><td>HTP-1500</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 바늘</td><td>피셔</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>Patterson 수의학</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>조명 돋보기</td><td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>티슈 균질화기</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>티슈 균질화기 스탠드</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

쥐 귀에 mycobacterium avium 의 피내 접종

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

우리는 위에 설명된 프로토콜을 사용하여 귀 진피를 감염 또는 노출 경로로 사용하는 재현 가능한 NTM 챌린지 모델을 확립할 수 있는지 여부를 결정했습니다. 챌린지 후 28일 시점에 두 동물로부터 귀를 수집하여 균질화하고 마이코박테리아 선택적 7H10 배지에 설명된 대로 도금했습니다. 우리는 M. avium 이 피내 이의를 제기한 귀에서 28일 동안 지속되었고, 이의가 제기되지 않은 귀에는 M. avium 이 없는 것을 관찰했습니다(그림 2).
감염 후 28일이 지날 때까지 감염되지 않은 귀로의 전파는 관찰되지 않았지만, 잠복 결핵 모델링을 위해 이 귀 진피 모델을 사용하는 다른 사람들은 다른 원위 장기 부위로의 전파를 관찰했다14. 우리는 더 적은 용량의 챌린지와 M. avium isolate를 사용하면 만성 감염 에 비해 노출을 더 잘 반영할 수 있는 나중 시점으로의 전파를 줄일 수 있다는 가설을 세웠습니다. 그러므로, 안락사는 감염 후 28일, 56일, 90일 및 132일에 n=5 M. avium 에 도전한 마우스의 코호트에서 수행되었습니다. 다음 기관은 귀 조직에 대해 설명된 것과 동일한 프로토콜로 균질화되었습니다: 폐, 비장, 배출 림프절(DLN) 및 뇌. 이러한 도전 경로는 시간이 지남에 따라 산발적으로 확산되는 결과를 낳았으며, 감염 후 56일 또는 90일까지 검사한 장기에서 가산 가능한 CFU를 보인 동물은 절반 미만이었습니다(표 1). 챌린지 후 132일이 지났을 때, 모든 마우스는 비장에서 M. avium 이 검출되었지만(n = 5/5 동물 평가) 이 시점까지 다른 장기에는 최소한(DLN에서 n = 1/5) 또는 아예 (폐 또는 뇌에서 n = 0/5) 박테리아가 있는 것으로 보였습니다(표 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
그림 1: 베벨 면이 위를 향하도록 하는 바늘의 방향. 바늘을 삽입하기 전에 접종을 적절하게 시행하기 위해 베벨 쪽이 위를 향해야 합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
그림 2: 챌린지 후 28일 후 M. avium 에 의한 귀 조직 집락화. 암컷 C57BL/6 마우스는 102 CFU의 Mycobacterium avium을 귀에 챌린지했습니다. 도전받은 귀(+)는 28일째에 도전하지 않은 귀(-)와 비교되었으며, 각 동물은 다른 색상과 기호로 표시된 단일 실험에서 n=2개의 개별 동물을 보여주었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">시간(일)</td>
			<td colspan="4">장기 로그10 CFU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>부아</td>
			<td>지라</td>
			<td>증권 시세 표시기</td>
			<td>뇌</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>2.81, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.78, 0.90, 사타, 사타, 사일드, 사일드, 사일드, 아냐</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30, ND, 노스다코타, 노스다코타, 노스다코타</td>
			<td>1.53, 3.43, 사타, 사타, 사일드, 사타남</td>
			<td>2.78, ND, ND, ND</td>
			<td>1.20, ND, 노스다코타, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, 3.35, 3.26, 사분, 사타남</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>0.60, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41, ND, ND, ND, ND</td>
			<td>ND, ND, ND, ND, ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = 림프절 배출, ND = 감지되지 않음</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
표 1: 챌린지 후 시간이 지남에 따라 귀에서 M. avium 의 전파. 폐, 비장, 배출 림프절(DLN) 및 뇌는 챌린지 후 시점당 n=5 마우스에서 수확되었습니다. 균질화된 조직을 도금하고 박테리아 성장을 평가했습니다. 장기 CFU는 박테리아가 계수되고 검출되지 않은 경우(ND) 로그10 변형 값으로 표시되었으며, 플레이팅된 모든 농도에서 CFU가 관찰되지 않았습니다. 한 실험을 대표하는 시간 과정 데이터.

쥐 귀에 Mycobacterium avium 의 피내 접종

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 비디오는 마취된 마우스의 전신 염증 유발을 보여줍니다. 마이코박테리아 항원 보조제 디포의 주입은 사이토카인 방출 및 국소 염증을 유발합니다. 림프관이 열려 면역 세포가 림프절로 들어갈 수 있게 되고 T세포가 활성화되어 전염증성 사이토카인을 방출하여 광범위한 염증을 유발합니다.

쥐 모델에서 전신 염증을 유발하기 위한 박테리아 항원의 피하 주사

이 비디오는 감염 후 포도막염을 연구하기 위해 프라임된 마이코세균성 포도막염(PMU)의 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이전에 동일한 면역원으로 면역된 마우스에서 열에 의해 사멸된 결핵균의 유리체강내 주사에 의한 PMU를 유도한 후, 이미징 및 조직병리학적 검사를 사용하여 눈의 만성 염증의 진행을...

감염 후 포도막염을 연구하기 위한 프라이밍 마이코박테리아 포도막염의 쥐 모델

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오는 생쥐 모델에 살아있는 약독화 포자형성물을 면역시키기 위한 분석을 보여줍니다. 방사선 감쇠된 Plasmodium sporozoites는 쥐 귀의 등쪽에 주입됩니다. 양쪽 귀의 여러 위치에 주사를 맞은 후 마우스가 회복할 수 있습니다.

마우스 모델에서 약독화 포자조산을 이용한 피내 면역

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

세포 외 기질은 상처 치유, 염증과 종양 발생시 상당한 개조를 겪는다. 우리는 섬유의 역학뿐만 아니라 표면 형광 또는 이광자 현미경을 사용하여 높은 공간 및 시간 해상도를 가진 메쉬 형상의 매트릭스 성분을 시각화하는 신규의 intravital 면역 형광 현미경 방식을 제시한다.

표면 형광을 가진 조직 매트릭스 구성 요소 및 두 개의 광자 현미경의 장기의 intravital 면역 형광 이미징

염증 부위에서 이펙터 CD4 T 세포의 삽입 운동을 제어하는​​ 메카니즘은 상대적으로 알려져 있지 않다. 우리는 시각화 현장에서 이러한 세포의 동적 거동의 연구를 허용 염증 귀 진피의 시험 관내 -primed CD4 T 세포에서 조작하는 비 침습적 방법을 제시한다.

염증이 진피의 이미징 CD4 T 세포 간질 마이그레이션

피부에서 배출 림프절로의 세포 이동을 추적하기 위한 마우스의 분석법이 설명되어 Bacille Calmette-Guérin에 발바닥 패드 감염 후 림프절로 동원된 피부 수지상 세포의 특성을 분석할 수 있습니다.

와 감염시 배수 림프절에 쥐 피부 수지상 세포의 마이그레이션을 연구하는 CFSE 기반 분석<em&gt; 소 결핵균</em&gt; Bacille 칼 메트 - GUERIN

이 보고서에서 우리는 조사자가 안내 포도막염의 마우스 모델을 생성 할 수있는 프로토콜을 제시합니다. 더 일반적으로 실험적 자가면역 포도막염(EAU)이라고 하는 이 확립된 모델은 인간 질병의 여러 측면을 포착합니다. 여기에서는 여러 판독값을 사용하여 질병 진행을 유도하고 모니터링하는 방법을 설명합니다.

실험적 자가면역 포도막염: 안구내 염증성 마우스 모델

이 프로토콜은 마우스에서 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)을 유도하는 단계를 설명합니다. 이 방법은 마우스 모델 시스템에서 신뢰할 수 있고 강력한 안구 염증을 생성하는 데 도움이 되는 단계를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜을 사용하여 면역학, 전사 및 단백질체학 분석을 통한 추가 평가를 위해 단일 동물에서 포도막 눈과 염증이 없는 동료 눈을 생성했습니다.

감염 후 포도막염의 모델로서의 프라이밍 된 마이코 박테리아 포도막염 (PMU)

생쥐는 일반적으로 Mycobacterium abscessus에 의한 감염에 내성이 있으며, 이는 폐 감염에 대해 절실히 필요한 항생제의 발견 및 개발을 복잡하게 만듭니다. 여기에서는 면역 능력이 있는 마우스에서 지속적인 감염을 전달하는 것으로 나타난 접종 준비 및 기관 내 감염 방법에 대해 설명합니다.

면역 능력이 있는 마우스를 기관내로 접종하기 위한 한천 비드 내장 마이코박테리움 농양의 제조

배우세요 쥐 귀에 Mycobacterium avium을 피내 접종하여 비결핵성 마이코박테리아 감염 모델을 구축하는 방법을. 이 기법은 면역 반응 연구에 활용됩니다.

쥐 귀에 Mycobacterium avium 의 피내 접종

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