Name: Mycobacterium tuberculosis에서 배양 여과액 단백질(CFP)의 분리 및 분획 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: 배우세요 Mycobacterium tuberculosis 배양 여과액 단백질 분리 및 분획 방법을. 등전기점 집중과 SDS-PAGE를 활용한 이 기술은 면역원성 단백질을 식별하여 결핵 진단 및 백신 개발에 기여합니다.

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<ol><li>Gomez, M., Johnson, S., Gennaro, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+secreted+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+by+a+bioinformatic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Identification of secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis by a bioinformatic approach.</a> Infect Immun. 68 (4), 2323-2327 (2000).</li>
<li>de Souza, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-accuracy+mass+spectrometry+analysis+as+a+tool+to+verify+and+improve+gene+annotation+using+Mycobacterium+tuberculosis+as+an+example%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">High-accuracy mass spectrometry analysis as a tool to verify and improve gene annotation using Mycobacterium tuberculosis as an example.</a> BMC Genomics. 9, 316(2008).</li>
<li>Lim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+new+T-cell-stimulating+antigens+from+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification of the new T-cell-stimulating antigens from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> FEMS Microbiol Lett. 232 (1), 51-59 (2004).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (5), 574-586 (2001).</li>
<li>Tucci, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+proteomic+and+glycoproteomic+profiling+of+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Integrative proteomic and glycoproteomic profiling of Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> PLoS One. 15 (3), e0221837(2020).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Yasuda, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cytokine+profiles+related+to+Mycobacterium+tuberculosis+latent+antigens+using+a+whole-blood+assay+in+the+Philippines%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cytokine profiles related to Mycobacterium tuberculosis latent antigens using a whole-blood assay in the Philippines.</a> Front Immunol. 15, 1330796(2024).</li>
<li>Målen, H., Søfteland, T., Wiker, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen+analysis+of+Mycobacterium+tuberculosis+H37Rv+culture+filtrate+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antigen analysis of Mycobacterium tuberculosis H37Rv culture filtrate proteins.</a> Scand J Immunol. 67 (3), 245-252 (2008).</li>
<li>Bekmurzayeva, A., Sypabekova, M., Kanayeva, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+diagnosis+using+immunodominant%2C+secreted+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis diagnosis using immunodominant, secreted antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Tuberculosis (Edinb). 93 (4), 381-388 (2013).</li>
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<li>Mustafa, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+biological+characterization+of+Mycobacterium+tuberculosis-specific+ESAT6-like+proteins+and+their+potentials+in+the+prevention+of+tuberculosis+and+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Princ+Pract%22%5BJournal%5D)">Chemical and biological characterization of Mycobacterium tuberculosis-specific ESAT6-like proteins and their potentials in the prevention of tuberculosis and asthma.</a> Med Princ Pract. 32 (4-5), 217-224 (2023).</li>
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<li>Lim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+new+T-cell-stimulating+antigens+from+Mycobacterium+tuberculosis+culture+filtrate%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Identification of the new T-cell-stimulating antigens from Mycobacterium tuberculosis culture filtrate.</a> FEMS Microbiol Lett. 232 (1), 51-59 (2004).</li>
<li>Rodríguez-Hernández, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+antigenic+biomarkers+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Zhejiang+Univ+Sci+B%22%5BJournal%5D)">Application of antigenic biomarkers for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 21 (11), 856-870 (2020).</li>
<li>Deenadayalan, A., Sundaramurthi, J. C., Raja, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+and+proteomic+analysis+of+preparative+isoelectric-focusing+separated+culture+filtrate+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological and proteomic analysis of preparative isoelectric-focusing separated culture filtrate antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Exp Mol Pathol. 88 (1), 156-162 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>&Auml; KTA 플럭스 접선 흐름 여과 시스템&nbsp;</td><td>사이티바</td><td>29038437</td><td></td></tr><tr><td>양쪽 전해질 (pH 3.0 - 10.0 )</td><td>바이오 RAD</td><td>1632094</td><td></td></tr><tr><td>양쪽 전해질 (pH 4.0 - 6.0 )</td><td>바이오 RAD</td><td>1631143</td><td></td></tr><tr><td>BCA 단백질 분석&nbsp;</td><td>머 크</td><td>71285-엠</td><td></td></tr><tr><td>모자</td><td>머 크</td><td>C2632</td><td></td></tr><tr><td>카제인 가수분해물</td><td>머 크</td><td>65072-00-6</td><td></td></tr><tr><td>구연산</td><td>머 크</td><td>C0759</td><td></td></tr><tr><td>디지토닌</td><td>머 크</td><td>300410</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>머 크</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>황산철 암모늄</td><td>히미디어</td><td>GRM10944</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>머 크</td><td>지5516</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤&nbsp;</td><td>머 크</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>Lowenstein-Jensen 경사&nbsp;</td><td>히미디어</td><td>SL001</td><td></td></tr><tr><td>황산마그네슘</td><td>머 크</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>Millipore Stericup 퀵 릴리스 진공 여과 시스템</td><td>머 크</td><td>S2HVU11RE</td><td></td></tr><tr><td>인산&nbsp;</td><td>머 크</td><td>695017</td><td></td></tr><tr><td>칼륨 이수소 오르토인산염</td><td>머 크</td><td>P0662</td><td></td></tr><tr><td>수산화칼륨&nbsp;</td><td>머 크</td><td>484016</td><td></td></tr><tr><td>분취 IEF 셀(Rotofor)&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>170-2986&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>아지드나트륨&nbsp;</td><td>머 크</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>글루타민산나트륨</td><td>머 크</td><td>49621</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>히미디어</td><td>MB095</td><td></td></tr><tr><td>트리스</td><td>머 크</td><td>252859</td><td></td></tr><tr><td>요소</td><td>머 크</td><td>U5128</td><td></td></tr><tr><td>전체 젤 용출 장치&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

mycobacterium tuberculosis에서 배양 여과액 단백질(cfp)의 분리 및 분획

Separation and Fractionation of Culture Filtrate Proteins (CFPs) from Mycobacterium tuberculosis

그림 1은 준비된 배양 여과액 단백질(CFP)의 복잡성을 보여줍니다. 초기에는 100μg의 CFP를 2D-SDS PAGE 분석을 통해 복잡성을 평가했습니다. 이 분석을 통해 CFP에 거의 100개의 뚜렷한 단백질 반점이 존재하는 것으로 나타났습니다(그림 1).
각 실행에서 수집된 20개의 분획을 SDS-PAGE로 분석했습니다. 이 중 3개의 서로 다른 런에서 3개의 대표 분수가 그림 2에 나와 있습니다.
그림 3은 2.54에서 12.9 범위의 분리된 분획의 pH 분포를 보여줍니다. 대부분의 분획(분획 5 - 14)은 pH가 4와 6 사이였으며, 여기서 대부분의 마이코박테리아 단백질이 집중되어 있었습니다. 분획 전반에 걸...

Mycobacterium tuberculosis에서 배양 여과액 단백질(CFP)의 분리 및 분획

Secreted proteins of Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis) play a crucial role in tuberculosis pathogenesis, immune modulation, and disease ...

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. 철 제한 마이코박테리아에 의해 생성된 세포외 소포의 분리 및 특성화. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 숙주 환경을 모방하는 철분 제한 조건에서 배양된 Mycobacterium tuberculosis 에서 세포외 소포(EV)를 단계적으로 분리하는 방법을 보여줍니다. EV 함유 분획을 농축하고 식별하기 위해 한외여과, 차등 원심분리 및 밀도 구배 분리를 사용하는 방법을 간략하게 설명합니다.

Mycobacterium tuberculosis에서 Siderophore 함유 세포외 소포의 분리

출처: 왓슨, DC, et.al. 대장균 및 기타 박테리아로부터 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제. J. Vis. 경험. (2021년)이 비디오는 유전자 조작 박테리아의 외막에서 파생된 세포외 소포(EV)의 분리 및 농축을 보여줍니다. 이 과정에는 박테리아를 배양하여 EV를 방출한 다음 세포와 잔해물을 제거하기 위한 순차적 원심분리 및 여과 단계가 포함됩니다. 마지막으로, 한외여과는 다운스트림 분석을 위해 EV를 농축하는 데 사용됩니다.

박테리아로부터 외막 유래 세포외 소포의 분리 및 농축

이 동영상은 박막 크로마토그래피를 기반으로 한 마이콜산의 분리를 보여줍니다. 이 기술은 극성에 따라 다양한 마이콜산(마이코박테리아의 세포벽에 존재하는 장쇄 지질)을 분리합니다.

Mycolic Acid Variants의 박막 크로마토그래피 기반 분리: 극성에 따라 Mycobacterial 세포벽 지질을 분리하는 방법

이 비디오는 한외여과를 사용하여 박테리아 세포외 소포체를 포함하는 박테리아 배양 여과액 단백질의 분리 및 농축을 보여줍니다. 농축된 세포외 소포체는 질병 감지를 위한 진단 마커 역할을 합니다.

한외여과 장치를 사용한 박테리아 배양 여과 단백질 농도 여과

이 동영상은 결핵균(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)의 배양 여과액에서 박테리아 세포외 소포체(EV)를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술을 보여줍니다. 이 기술은 다공성 수지 충전 컬럼을 사용하여 EV의 정제된 분획을 얻습니다. 다공성 입자는 더 작은 단백질이 기공으로 들어가도록 선택적으로 허용하여 용리 속도를 늦춥니다. 동시에 EV는 크기가 크기 때문에 모공으로 들어가는 것이 배제되고 먼저 용출됩니다.

Mycobacterial Extracellular Vesicles를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 기술

결핵 균은 낮은 철 조건에 응하여 세포외 소포의 증가된 생산 그리고 방출을 보여줍니다. 이 작품은 철 결핍에 응하여 풀어 놓인 진균 세포외 소포의 정제 그리고 특성화를 위한 낮은 철 조건 및 방법을 생성하기 위한 프로토콜을 상세히 기술합니다.

철분 제한 마이코박테리아에 의해 생성된 세포외 소포의 격리 및 특성화

박테리아는 생리 활성 생물학적 분자를 운반하는 나노 미터 크기의 세포 외 소포 (EV)를 분비합니다. EV 연구는 생물 발생, 미생물-미생물 및 숙주-미생물 상호 작용 및 질병에서의 역할, 잠재적 인 치료 응용 프로그램을 이해하는 데 중점을 둡니다. EV 연구의 표준화를 촉진하기 위해 다양한 박테리아로부터 EV를 확장 가능한 분리를 위한 워크플로우가 제시됩니다.

대장균 및 다른 박테리아로부터의 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제

이 프로토콜은 크기 배제 크로마토그래피, 배양 상청액으로부터 Mycobacterium tuberculosis 세포밖 소포를 풍부하게하기 위한 용이하고 재현 가능한 기술을 기술한다.

마이코박테리움 결핵 크기 배제 크로마토그래피를 통한 세포밖 소포 농축

이 프로토콜은 Mycobacterium smegmatis(Msm)의 액센 배양에서 천연 마이코박테리아 세포외 소포체(mEV)의 농축과 mCherry(적색 형광 리포터) 함유 재조합 MsmEV를 설계하고 농축할 수 있는 방법을 자세히 설명합니다. 마지막으로, 결핵균(Mycobacterium tuberculosis)의 EsxA 단백질을 함유한 MsmEV의 농축을 통해 새로운 접근법을 검증합니다.

마이코박테리아의 native and recombinant extracellular vesicles 농축

여기에서는 박테리아가 분비하는 단백질로 구성된 박테리아 성장 배지인 Mtb 배양 여과액(CF)의 제조를 보여줍니다. Mtb 는 발병에 중요한 숙주 신호 전달 및 면역 반응을 조절하기 위해 단백질을 분비합니다. 준비된 CF는 모든 분비 인자를 식별하기 위해 질량 분석법으로 분석됩니다.

결핵 발병기전을 이해하기 위한 Mycobacterium tuberculosis 배양 여과액의 제조

이 프로토콜은 등전점을 기반으로 한 분취 등전 초점(IEF)을 사용하여 불용성 세포벽 및 막 단백질을 간단한 분획(1-5 단백질)으로 분리한 다음 분자량으로 분리합니다. 생성된 분획은 추가 정제 없이 면역학적 및 단백질체학 분석에 직접 사용할 수 있습니다.

다운스트림 단백질 분석을 위한 결핵균 의 세포벽 및 세포막 단백질의 분리 및 분획

배우세요 Mycobacterium tuberculosis 배양 여과액 단백질 분리 및 분획 방법을. 등전기점 집중과 SDS-PAGE를 활용한 이 기술은 면역원성 단백질을 식별하여 결핵 진단 및 백신 개발에 기여합니다.

Mycobacterium tuberculosis에서 배양 여과액 단백질(CFP)의 분리 및 분획

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