Name: 다운스트림 단백질 분석을 위한 결핵균 의 세포벽 및 세포막 단백질의 분리 및 분획 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: 학습하세요 Mycobacterium tuberculosis의 세포벽 및 세포막 단백질을 등전점 초점화와 분자량 분리로 단순 분획화하는 방법을. 이 기술은 직접적인 프로테오믹스 및 면역학 분석에 활용되어 결핵 진단 개발에 기여합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
<li>Kunnath-Velayudhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+antibody+responses+to+the+Mycobacterium+tuberculosis+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).</li>
<li>Drage, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+and+its+co-receptors+determine+responses+of+macrophages+and+dendritic+cells+to+lipoproteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Wallin, E., von Heijne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+integral+membrane+proteins+from+eubacterial%2C+archaean%2C+and+eukaryotic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms.</a> Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).</li>
<li>Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+structures%3A+A+review+on+computational+modeling+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).</li>
<li>Finkelstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structures of membrane proteins.</a> Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).</li>
<li>Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Strategies for the purification of membrane proteins.</a> Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).</li>
<li>Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVon+Jagow%2C+G+%22A+Practical+Guide+to+Membrane+Protein+Purification%22">A Practical Guide to Membrane Protein Purification</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).</li>
<li>Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G%2C+A%2C+and+M+responses+in+serum+and+circulating+immune+complexes+elicited+by+the+16-kilodalton+antigen+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9 국물&nbsp;</td><td>히미디어&nbsp;</td><td>M198</td><td></td></tr><tr><td>40% 바이오 해정 3/10 Ampholyte&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>BCA 단백질 분석&nbsp;</td><td>머 크</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>바이오 라이트 5/7 Ampholyte&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>원심 농축기 3 kDa</td><td>머 크</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>디지토닌.</td><td>머 크</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>드나제</td><td>머 크</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>머 크</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>머 크</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>에그타</td><td>머 크</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>머 크</td><td>지5516</td><td></td></tr><tr><td>류펩틴</td><td>머 크</td><td>18회</td><td></td></tr><tr><td>펩스타틴 A</td><td>머 크</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>머 크</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>르나제</td><td>머 크</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>로토포&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>170-2986</td><td>&nbsp; 등전초점(IEF) 장치</td></tr><tr><td>초음파 처리기</td><td>비브라 셀, 소닉스</td><td>VC 750 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>TLCK</td><td>머 크</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCK</td><td>머 크</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>요소</td><td>머 크</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>전체 젤 용출 장치&nbsp;</td><td>바이오 RAD</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

다운스트림 단백질 분석을 위한 결핵균 의 세포벽 및 세포막 단백질의 분리 및 분획

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

고속 초원심분리에 의한 세포벽 및 세포막 단백질 분리 세포벽 및 막 단백질은 프로토콜에 설명된 대로 초원심분리를 통해 전체 세포 용해물에서 분리되었습니다. M. tuberculosis 의 분리된 세포내 분획-세포벽, 세포막 및 세포질 단백질 프로파일의 SDS-PAGE 분석이 그림 1에 나와 있습니다.
분취 액상 등전 포커싱에 의한 세포벽 단백질의 분리 
Mycobacterium tuberculosis 세포벽 단백질은 프로토콜에 설명된 대로 IEF 완충액을 사용하여 가용화되었습니다. 가용화된 단백질은 등전점을 기준으로 20개의 분획으로 분리되었습니다. 그림 2 는 IEF로 분리된 세포벽 분획의 pH 프로파일을 보여줍니다. 단백질 프로파일을 보여주는 이러한 분획의 SDS-PA...

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: Gupta, S., Marcela Rodriguez, G. 철 제한 마이코박테리아에 의해 생성된 세포외 소포의 분리 및 특성화. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 숙주 환경을 모방하는 철분 제한 조건에서 배양된 Mycobacterium tuberculosis 에서 세포외 소포(EV)를 단계적으로 분리하는 방법을 보여줍니다. EV 함유 분획을 농축하고 식별하기 위해 한외여과, 차등 원심분리 및 밀도 구배 분리를 사용하는 방법을 간략하게 설명합니다.

Mycobacterium tuberculosis에서 Siderophore 함유 세포외 소포의 분리

이 동영상은 박막 크로마토그래피를 기반으로 한 마이콜산의 분리를 보여줍니다. 이 기술은 극성에 따라 다양한 마이콜산(마이코박테리아의 세포벽에 존재하는 장쇄 지질)을 분리합니다.

Mycolic Acid Variants의 박막 크로마토그래피 기반 분리: 극성에 따라 Mycobacterial 세포벽 지질을 분리하는 방법

이 동영상은 결핵균(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)의 배양 여과액에서 박테리아 세포외 소포체(EV)를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 기술을 보여줍니다. 이 기술은 다공성 수지 충전 컬럼을 사용하여 EV의 정제된 분획을 얻습니다. 다공성 입자는 더 작은 단백질이 기공으로 들어가도록 선택적으로 허용하여 용리 속도를 늦춥니다. 동시에 EV는 크기가 크기 때문에 모공으로 들어가는 것이 배제되고 먼저 용출됩니다.

Mycobacterial Extracellular Vesicles를 정제하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 기술

세균성 세포벽은 펩티드에 의해 교차된 당가닥의 거대 분자 네트워크인 펩티도글리칸으로 구성됩니다. 울트라 퍼포먼스 액체 크로마토그래피는 펩티도글리칸 조성물의 새로운 발견을 위한 고해상도 및 처리량을 제공합니다. 우리는 세포벽 (sacculi)의 격리와 UPLC를 통해 분석을위한 후속 준비를위한 절차를 제시합니다.

초성능 액체 크로마토그래피에 의한 조성 분석을 위한 세균세포벽의 격리 및 준비

그람 음성 박테리아는 두 개의 공간적으로 분리된 막을 일으킵니다. 외부 멤브레인은 자두 및 펩티도글리칸 층에 의해 내부 막으로부터 분할됩니다. 이 세균의 이중 이중 층을 격리하는 기능은 그들의 생리학 및 병인을 이해하는 것을 위해 중요했습니다.

아시네토박터 바우만니에 대한 기술적 조정을 통해 그람 음성 박테리아에 대한 셀 봉투를 내부 및 외부 멤브레인 분획으로 분리

프로토콜은 광범위한 진균의 세포벽의 총 지질 함량을 추출하기 위해 제시된다. 더욱이, 진동산의 상이한 모형의 추출 및 분석 프로토콜이 도시된다. 이러한 진균 화합물을 모니터링하는 얇은 층 크로마토그래피 프로토콜도 제공됩니다.

얇은 층 크로마토그래피에 의한 진균의 지질 조성 분석

세균성 소포는 병인에 중요한 역할을 하고 유망한 생명 공학 응용 프로그램이 있습니다. 소포의 이질성은 분석과 사용을 복잡하게 합니다. 따라서 다양한 크기의 소포를 분리하는 간단하고 재현 가능한 방법이 필요합니다. 여기에서, 우리는 Aggregatibacter actinomycetemcomitans에의해 생성된 이기종 소포를 분리하기 위하여 크기 배제 크로마토그래피의 사용을 보여줍니다.

크기 배제 크로마토그래피는 세균 외부 막 소포 이질성을 분석

이 프로토콜은 크기 배제 크로마토그래피, 배양 상청액으로부터 Mycobacterium tuberculosis 세포밖 소포를 풍부하게하기 위한 용이하고 재현 가능한 기술을 기술한다.

마이코박테리움 결핵 크기 배제 크로마토그래피를 통한 세포밖 소포 농축

이 프로토콜은 Mycobacterium smegmatis(Msm)의 액센 배양에서 천연 마이코박테리아 세포외 소포체(mEV)의 농축과 mCherry(적색 형광 리포터) 함유 재조합 MsmEV를 설계하고 농축할 수 있는 방법을 자세히 설명합니다. 마지막으로, 결핵균(Mycobacterium tuberculosis)의 EsxA 단백질을 함유한 MsmEV의 농축을 통해 새로운 접근법을 검증합니다.

마이코박테리아의 native and recombinant extracellular vesicles 농축

원핵생물에는 소기관 시스템이 없지만 국소적인 단백질이 있는 세포 내 영역이 있습니다. 세포 내 영역의 효소와 단백질에 대한 정량적 및 정성적 분석은 약물 및 백신 표적을 개발하는 데 중요합니다. 여기에서는 Triton X-114를 사용한 렙토스피럴 단백질의 세포내 분획과 그 분석을 설명합니다.

Triton X-114 기반 분획 접근법을 사용하여 렙토스피라의 세포하 단백질 농축

이 프로토콜은 Mycobacterium tuberculosis의 분비된 단백질의 배양, 수확 및 농축을 설명합니다. 배양 여과액 단백질(CFP)을 정량화하고, 등전 집속으로 20개의 분획으로 분리하고, 분취용 SDS-PAGE 및 전기 용출 시스템을 사용하여 30개의 분획으로 추가로 분해합니다.

Mycobacterium tuberculosis에서 배양 여과액 단백질(CFP)의 분리 및 분획

학습하세요 Mycobacterium tuberculosis의 세포벽 및 세포막 단백질을 등전점 초점화와 분자량 분리로 단순 분획화하는 방법을. 이 기술은 직접적인 프로테오믹스 및 면역학 분석에 활용되어 결핵 진단 개발에 기여합니다.

다운스트림 단백질 분석을 위한 결핵균 의 세포벽 및 세포막 단백질의 분리 및 분획

더 많은 동영상 탐색