헬리코박터 파일로리균 및 항생제 내성 검출을 위한 위 점막 정량적 중합효소 연쇄 반응 분석

이 연구는 위 점막에 QPCR을 사용하여 헬리코박터 파일로리와 항생제 내성을 신속하게 검출하여 이 감염을 치료하는 데 임상적으로 매우 중요한 빠르고 정확한 진단 도구를 제공합니다. QPCR에 대한 품질 대비 표준을 보장하는 것이 중요합니다. 결과적으로, 헬리코박터 파일로리균을 검출하기 위한 QPCR IC는 특정 기준에 따라 유지되어야 하며, 각 조건은 동시에 충족되어야 합니다.

조기 편차는 재실행이 필요한 테스트를 무효화합니다. 우리는 헬리코박터 파일로리균과 약물 내성을 검출할 수 있는 강력하고 포괄적인 진단 도구가 필요합니다. 우리는 위 점막 QPCR을 사용합니다.

이를 위해 특정 프라이머를 사용합니다. 우리는 더 큰 환자 그룹을 대상으로 한 향후 연구가 위 점막 QPCR의 모든 잠재력을 검증하고 실현하여 헬리코박터 파일로리 진단, 모니터링 및 치료를 향상시킬 것이라고 믿습니다. 시작하려면 생검 클램프 밸브를 열고 주로 사용하는 손으로 천천히 움직입니다.

겸자의 머리가 시야에 있을 때 클램프 플랩을 열고 샘플링 부위의 위 점막에서 내시경을 조작합니다. 약간의 압력을 가하고 생검 겸자를 닫아 위 점막 조직을 고정합니다. 플라이어를 사용하여 조직 샘플을 추출하고 보존 유체가 들어 있는 샘플링 튜브에 넣습니다.

모든 부위가 샘플링되면 샘플링 튜브 덮개를 조이고 밀봉하여 건조를 방지합니다. 튜브 외부에 고유 식별 번호를 표시하십시오. 수집된 샘플을 보관을 피하고 가능한 한 빨리 테스트를 위해 제출하십시오.

금속 수조의 온도를 미리 섭씨 100도로 조정하십시오. 샘플이 얼면 제거하고 실온에 도달하도록 합니다. 용해물을 완전히 혼합하여 아미노디아세트산 수지를 현탁시킵니다.

100마이크로리터의 용해액을 필터 요소가 있는 원심분리기 튜브에 넣고 위 점막을 추가합니다. 와류 진동을 사용하여 내용물을 혼합합니다. 원심분리기 튜브를 섭씨 100도의 금속 수조에 10분 동안 놓습니다.

가열 후에는 튜브를 제거하고 실온으로 식히십시오. 9, 500G에서 5-10분 동안 샘플을 원심분리하고 상등액을 다른 멸균된 라벨이 붙은 원심분리기 튜브로 조심스럽게 옮깁니다. 다음 단계로 즉시 진행하지 않으면 샘플을 섭씨 4도에서 임시로 보관하십시오.

키트에서 프라이머 프로브, 혼합 효소 용액 및 검출 버퍼를 제거합니다. 모든 구성 요소를 얼음 또는 섭씨 2도에서 8도에서 녹입니다. 샘플을 혼합하려면 부드럽게 흔들고 저속으로 간단한 원심분리를 수행합니다.

12.5 마이크로리터의 검출 버퍼, 7 마이크로리터의 프라이머 프로브 및 0.5 마이크로리터의 효소 용액을 혼합합니다. 튜브의 내용물을 섞고 잠시 원심분리합니다. PCR 반응 용액 20마이크로리터를 분배하고 각 PCR 반응 웰에 5마이크로리터의 핵산을 첨가합니다.

반응 튜브를 형광 PCR 열순환기에 삽입합니다. 사이클 매개변수를 설정하고 프로그램을 실행합니다. 원하는 마커에 대해 섭씨 58도에서 형광 신호를 수집합니다.

반응 후 데이터를 저장하고 특정 QPCR 소프트웨어를 사용하여 분석합니다. QPCR 분석은 샘플 A, B, C, E에서 헬리코박터 파일로리의 존재를 확인했으며, 샘플 F는 음성 판정을 받았습니다. 샘플 A는 두 항생제에 모두 감수성이 있었습니다.

샘플 B는 clarithromycin과 levofloxacin에 모두 내성을 보였습니다. 샘플 C는 clarithromycin에 내성을 보였으나 levofloxacin에는 여전히 취약합니다. 샘플 E는 레보플록사신에 내성이 있었으나 클래리스로마이신에는 취약했다.