Name: 면역형광에 의한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출 검출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: 학습하세요 면역형광법을 이용한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출 검출 방법을. HeLa 세포를 사용하여 핵막 구조와 DNA 손상 복구 메커니즘의 관계를 연구합니다.

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<ol><li>Navarro, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+ZMPSTE24+%28FACE1%29+mutations+in+patients+affected+with+restrictive+dermopathy+or+related+progeroid+syndromes+and+mutation+update%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">New ZMPSTE24 (FACE1) mutations in patients affected with restrictive dermopathy or related progeroid syndromes and mutation update.</a> Eur J Hum Genet. 22 (8), 1002-1011 (2014).</li>
<li>Dittmer, T. A., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lamin+protein+family%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">The lamin protein family.</a> Genome Biol. 12 (222), 1-16 (2011).</li>
<li>Gruenbaum, Y., Margalit, A., Goldman, R. D., Shumaker, D. K., Wilson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuclear+lamina+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The nuclear lamina comes of age.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 6, 21-31 (2005).</li>
<li>Navarro, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+A+and+ZMPSTE24+%28FACE-1%29+defects+cause+nuclear+disorganization+and+identify+restrictive+dermopathy+as+a+lethal+neonatal+laminopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Lamin A and ZMPSTE24 (FACE-1) defects cause nuclear disorganization and identify restrictive dermopathy as a lethal neonatal laminopathy.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2493-2503 (2004).</li>
<li>Barrowman, J., Wiley, P. A., Hudon-Miller, S. E., Hrycyna, C. A., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ZMPSTE24+disease+mutations%3A+Residual+proteolytic+activity+correlates+with+disease+severity%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Human ZMPSTE24 disease mutations: Residual proteolytic activity correlates with disease severity.</a> Hum Mol Genet. 21 (18), 4084-4093 (2012).</li>
<li>Richards, S., Muter, J., Ritchie, P., Lattanzi, G., Hutchison, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+accumulation+of+un-repairable+DNA+damage+in+laminopathy+progeria+fibroblasts+is+caused+by+ROS+generation+and+is+prevented+by+treatment+with+N-acetyl+cysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">The accumulation of un-repairable DNA damage in laminopathy progeria fibroblasts is caused by ROS generation and is prevented by treatment with N-acetyl cysteine.</a> Hum Mol Genet. 20 (20), 3997-4004 (2011).</li>
<li>Davies, B. S., Fong, L. G., Yang, S. H., Coffinier, C., Young, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+post-translational+processing+of+prelamin+A+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">The post-translational processing of prelamin A and disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 10, 153-174 (2009).</li>
<li>Barrowman, J., Hamblet, C., George, C. M., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+prelamin+A+biogenesis+reveals+the+nucleus+to+be+a+CaaX+processing+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Analysis of prelamin A biogenesis reveals the nucleus to be a CaaX processing compartment.</a> Mol Biol Cell. 19, 5398-5408 (2008).</li>
<li>Young, S., Meta, M., Yang, S. H., Fong, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prelamin+A+farnesylation+and+progeroid+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Prelamin A farnesylation and progeroid syndromes.</a> J Biol Chem. 281 (52), 39741-39745 (2006).</li>
<li>Houthaeve, G., Robijns, J., Braeckmans, K., De Vos, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bypassing+border+control%3A+Nuclear+envelope+rupture+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Bypassing border control: Nuclear envelope rupture in disease.</a> Physiol. 33 (1), 39-49 (2017).</li>
<li>Schreiber, K. H., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+lamins+go+bad%3A+Nuclear+structure+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">When lamins go bad: Nuclear structure and disease.</a> Cell. 152 (6), 1365-1375 (2013).</li>
<li>Fong, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterozygosity+for+Lmna+deficiency+eliminates+the+progeria-like+phenotypes+in+Zmpste24-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Heterozygosity for Lmna deficiency eliminates the progeria-like phenotypes in Zmpste24-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (52), 18111-18116 (2004).</li>
<li>Pendas, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+prelamin+A+processing+and+muscular+and+adipocyte+alterations+in+Zmpste24+metalloproteinase-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Defective prelamin A processing and muscular and adipocyte alterations in Zmpste24 metalloproteinase-deficient mice.</a> Nat Genet. 31, 94-99 (2002).</li>
<li>Goldman, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+mutant+lamin+A+causes+progressive+changes+in+nuclear+architecture+in+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Accumulation of mutant lamin A causes progressive changes in nuclear architecture in Hutchinson-Gilford progeria syndrome.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101, 8963-8968 (2004).</li>
<li>Eriksson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+de+novo+point+mutations+in+lamin+A+cause+Hutchinson%E2%80%93Gilford+progeria+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Recurrent de novo point mutations in lamin A cause Hutchinson–Gilford progeria syndrome.</a> Nature. 423, 293-298 (2003).</li>
<li>Young, S. G., Fong, L. G., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+Lipid+post-translational+modifications.+Prelamin+A%2C+Zmpste24%2C+misshapen+cell+nuclei%2C+and+progeria%E2%80%94new+evidence+suggesting+that+protein+farnesylation+could+be+important+for+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: Lipid post-translational modifications. Prelamin A, Zmpste24, misshapen cell nuclei, and progeria—new evidence suggesting that protein farnesylation could be important for disease pathogenesis.</a> J Lipid Res. 46 (12), 2531-2558 (2005).</li>
<li>Worman, H. J., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prelamin+A+and+ZMPSTE24+in+premature+and+physiological+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleus%22%5BJournal%5D)">Prelamin A and ZMPSTE24 in premature and physiological aging.</a> Nucleus. 14 (1), 1-17 (2023).</li>
<li>Pande, S., Ghosh, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+proteostasis+imbalance+in+laminopathy-associated+premature+aging+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Nuclear proteostasis imbalance in laminopathy-associated premature aging diseases.</a> FASEB J. 37 (8), 1025-1035 (2023).</li>
<li>Odell, I. D., Cook, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence techniques.</a> J Invest Dermatol. 133 (4), 1-12 (2013).</li>
<li>Kumar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+and+enzyme+immunomicroscopy+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunoassay+Immunochem%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence and enzyme immunomicroscopy methods.</a> J Immunoassay Immunochem. 21 (2-3), 235-253 (2000).</li>
<li>Tjaden, A., Giessmann, R. T., Knapp, S., Schroder, M., Muller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+live-cell+multiplex+screen+for+chemogenomic+compound+annotation+based+on+nuclear+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-content live-cell multiplex screen for chemogenomic compound annotation based on nuclear morphology.</a> STAR Protoc. 3 (101791), 1-15 (2022).</li>
<li>Gunn, A. L., Yashchenko, A. I., Dubrulle, J., Johnson, J., Hatch, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-content+screen+reveals+new+regulators+of+nuclear+membrane+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A high-content screen reveals new regulators of nuclear membrane stability.</a> Sci Rep. 14, 6013(2024).</li>
<li>Yu, L., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytosolic+DNA+sensing+by+cGAS%3A+Regulation%2C+function%2C+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytosolic DNA sensing by cGAS: Regulation, function, and human diseases.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 6 (170), 1-14 (2021).</li>
<li>Odinammadu, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+farnesyl+transferase+inhibitor+%28FTI%29+lonafarnib+improves+nuclear+morphology+in+ZMPSTE24-deficient+fibroblasts+from+patients+with+the+progeroid+disorder+MAD-B%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleus%22%5BJournal%5D)">The farnesyl transferase inhibitor (FTI) lonafarnib improves nuclear morphology in ZMPSTE24-deficient fibroblasts from patients with the progeroid disorder MAD-B.</a> Nucleus. 14 (1), 1-14 (2023).</li>
</ol>

핵 얇은 판은 핵막의 기초가 되는 필라멘트 네트워크이며 얇은 판이라고 하는 단백질로 구성됩니다. 핵층은 핵 구조, 핵공의 위치, 유전자 발현 조절, 염색질 조직, DNA 복제 및 DNA 복구에 필수적인 역할을 합니다 1,2,3. 라민 단백질의 발현에 중요한 역할을 하는 유전자의 돌연변이는 층병증(laminopathies)이라고 하는 유전적 질환을 유발한다3.
제한적 피부병증(RD)은 주로 ZMPSTE24 유전자4에 조기 종결 코돈을 생성하는 복합 이형접합 돌연변이에 의해 유발되는 심각한 층병증 질환으로, 금속프로테아제 ZMPSTE24의 부재를 초래합니다. 이 층병증은 자궁 내 성장 지연, 단단하고 경직된 피부, 작은 입, 얇은 모발, 뼈 광물화 결함을 특징으로 한다1. RD 환자는 일반적으로 폐부전으로 인해 생후 첫 주를 넘기지 못한다1. 비정형 허친슨-길포드 조로증 증후군(AT-HGPS)과 하악 이형성증 B형(MAD-B)으로 알려진 두 가지 다른 층병증 장애는 ZMPSTE24 발현 감소를 수반하고 수명 감소와 관련이 있으며 조기 노화 장애와 유사성을 보인다5. 이러한 층병증에 영향을 받는 ZMPSTE24 프로테아제는 핵 층의 중요한 구성 요소인 lamin A의 번역 후 변형에 필수적입니다. ZMPSTE24 결핍은 prelamin A2로 알려진 불완전하게 처리된 farnesylated 형태의 lamin A의 축적을 초래합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67719/67719fig1.jpg"> 
그림 1: 일반 vs. RD 세포. 정상 세포의 Lamin A 처리 경로(왼쪽)와 RD 또는 ZMPSTE 결핍 세포의 변형된 lamin A 처리(오른쪽). 파르네실(Fa) 및 메틸(Me) 그룹이 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67719/67719fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
그림 1에서 볼 수 있듯이 일반 라민 A 공정에서 파르네실(지질) 그룹이 C-말단 근처의 시스테인 잔기에 부착된 후 3개의 C 말단 아미노산의 단백질 분해 절단이 발생합니다 3,6. 그런 다음 시스테인 잔류물이 메틸화됩니다. 이 두 가지 변형은 prelamin A가 내부 핵막2를 표적으로 할 수 있도록 합니다. 그런 다음 ZMPSTE24는 farnesyl 및 methyl group과 함께 마지막 15 개의 C 말단 아미노산을 제거하여 핵 lamina 6,7,8로 전달되는 성숙한 Lamin A 단백질을 생성하는 절단 반응을 수행합니다. RD, AT-HGPS 및 MAD-B에서는 ZMPSTE24 금속단백분해효소가 부족하거나 완전히 기능하지 않기 때문에 처리의 최종 단계가 효과적으로 발생하지 않습니다 8,9. 그 결과 프레알라민 A가 축적되며, 이는 영구적으로 파르네실화되고메틸화되어 9. 이러한 후자의 그룹은 그림 1에서 볼 수 있듯이 prelamin A가 핵 lamina에 국한하는 대신 내부 핵막에 달라 붙게합니다. 따라서 ZMPSTE 결핍은 핵 구조10,11,12,13,14,15와 함께 다양한 핵 기능에 지대한 영향을 미칩니다. 이러한 핵 구조의 변화에는 핵 블리빙(nuclear blebring) 및 핵 파열(nuclear rufturing)이 포함될 수 있으며, 이로 인해 DNA가 사이토졸로 누출되고 세포질이 핵으로 유입될 수 있습니다. 비정상적인 모양의 핵은 실제로 판병증 장애의 특징이며, 결함 있는 prelamin A 처리에 의해 유발되는 수많은 다른 표현형과 함께16,17. 핵층의 결함은 핵 단백질의 품질 관리 및 핵질에서 DNA 복구 단백질의 국소화 오류를 포함하여 여러 가지 해로운 영향을 미치며, 이는 차례로 핵 기능에 수많은 결함을 초래합니다18. 층병증의 이러한 특징을 식별하고 모니터링하는 데 도움이 될 수 있는 간단한 기술을 보유하여 층병증 표현형을 개선하기 위한 치료 접근법 개발에 대한 연구를 촉진하는 것이 중요합니다. 층병증이 있는 마우스의 경우, 핵 기포의 제거는 층병증 표현형의 일반화된 제거와 상관관계가 있는 것으로 나타났습니다16. 인간 세포의 핵 무결성을 모니터링할 수 있는 기술은 질병 표현형을 제거하거나 크게 개선하기 위한 잠재적 치료법에 대한 연구를 향상시킬 수 있습니다.
간접 면역형광(IF)은 1차 비표지 항체와 1차 항체를 인식하여 관심 표적을 검출하는 형광단 표지 2차 항체를 모두 사용하는 민감하고 널리 사용되는 기술입니다19. IF 방법은 특정 세포 내 구성 요소 및 구조를 시각화하기 위한 강력한 수단을 제공할 수 있습니다. 또한 하나 이상의 2차 항체 분자가 1차 항체와 상호 작용하여 신호19의 증폭을 초래할 수 있습니다. 간접 IF는 2차 항체가19종 내에서 보존된 1차 항체의 Fc 도메인에 대해 발생하기 때문에 상대적으로 적은 2차 항체 세트로 여러 1차 항체를 검출할 수 있는 다목적 기술입니다.
이 논문에서는 이중 가닥 DNA(dsDNA)와 lamin B1에 대한 항체를 사용하여 DNA와 핵 층을 각각 검출하여 ZMPSTE24이 결핍된 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출을 평가하는 간접(IF) 방법을 설명합니다. 이 접근법의 유용성을 입증하기 위해 ZMPSTE24 발현이 넉아웃된 HeLa 세포주와 ZMPSTE24 발현하는 HeLa 세포주에 이 절차를 적용하고 두 세포주에 대한 결과를 비교했습니다.

<table><tbody><tr><td>22mm 사각형 유리 커버슬립</td><td>프로퍼 제조 회사</td><td>M8710</td><td>표준 현미경 슬라이드에 고정할 수 있다면 어떤 크기나 모양이든 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>36.5% 포름알데히드</td><td>시그마 Aldrich</td><td>F8775</td><td>고정 시약.&nbsp;</td></tr><tr><td>75cm 2 플라스크</td><td>Corning</td><td>430725U</td><td>세포 배양용.&nbsp;</td></tr><tr><td>소 혈청 알비눔 (BSA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>9048-46-8</td><td>항체 희석 완충액.&nbsp;</td></tr><tr><td>1 g/L 포도당, L-글루타민 & 피루브산나트륨이 함유된 DMEM</td><td>Corning</td><td>10-014-CV</td><td>세포 배양용.&nbsp;</td></tr><tr><td>에탄올 (200 Proof)</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td>장착 전 샘플의 탈수를 위해 여러 농도를 만들기 위해 희석합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>EVOS FL 디지털 반전 형광 현미경</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-563-460</td><td>이미징.&nbsp;</td></tr><tr><td>Fish Gelatin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G7041</td><td>항체 희석 완충액.&nbsp;</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td>광표백을 방지하기 위한 장착 매체.&nbsp;</td></tr><tr><td>파라필름 (4인치)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-12</td><td>사용되는 커버슬립이 맞을 수 있다면 어떤 크기든지 대체할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td>세포 배양용.&nbsp;</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>조직 배양 및 용액을 위해 실험실에서 제조 및 멸균되었습니다.</td></tr><tr><td>프리미엄 태아 소 세럼 (FBS)</td> <td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>세포 배양용.&nbsp;</td></tr><tr><td>Superfrost 프리미엄 현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-7</td><td>모든 표준 현미경 슬라이드를 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>조직 배양 처리된 6-웰 플랫 바텀 플레이트</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>세포 배양을 위해.&nbsp;</td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>A16046. AP</td><td>세탁용.</td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.5%)</td><td>Gibco</td><td>15-400-054</td><td>세포 배양용&nbsp;</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Scientific</td><td>9005-64-5</td><td>세포 투과 시약.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

면역형광에 의한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 dna 누출 검출

Detection of Nuclear Blebbing and DNA Leakage in Mammalian Cells by Immunofluorescence

본 연구에서는 이중가닥 DNA(double-stranded DNA)와 함께 핵층을 시각화하는 IF 방법을 소개합니다. IF가 수행되면 캡처된 이미지를 검사하여 핵 블리빙 및 DNA 누출의 징후를 확인할 수 있습니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67719/67719fig2.jpg"> 
그림 2: HeLa CT 및 ZMPSTE24 KO 세포 의 핵 블리빙.blebbed nuclei의 빈도를 결정하는 데 사용되는 두 세포주의 대표 이미지. (A) 적색(Alexa Fluor 594 conjugate...

면역형광에 의한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출 검출

The nuclear lamina is a network of filaments underlying the nuclear membrane, composed of lamins and lamin-associated proteins. It plays critical roles in ...

detection-nuclear-blebbing-dna-leakage-mammalian-cells

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

라이브 셀에서 개별 DNA 분자를 관찰하는 방법이 설명되어 있습니다. 기술은 관심의 DNA에 설계 구속력이 사이트에 휘황 태그 LAC 억제 단백질의 바인딩에 기반을두고 있습니다. 이 방법은 시간이 지남에 라이브 세포에서 많은 재조합 DNAs를 수행하도록 구성 할 수 있습니다.

형광 현미경으로 여러 세대 이상 라이브 포유류의 세포에 플라스미드 복제 모니터링

이 비디오에서는 방사선 조사된 세포핵의 이중 가닥 DNA 절단 부위에서 DNA 복구 단백질 γH2AX 및 53BP1의 국소화를 시각화하기 위한 면역형광 방법에 대해 설명합니다.

DNA 복구 단백질 상호 작용의 면역형광 기반 시각화

이 비디오에서는 인간 단핵 세포의 DNA 이중 가닥 절단 부위에 국한된 특정 DNA 손상 반응 단백질을 검출하는 면역형광 현미경 검사 기술에 대해 설명합니다. 단백질은 특정 1차 항체에 의해 인식되며, 이 항체는 다시 현미경 시각화 중에 형광을 발하는 형광단 표지된 2차 항체에 결합하여 단백질을 세포핵 내에서 뚜렷한 형광 병소로 시각화할 수 있습니다.

DNA Double-Strand Break 분석을 위한 면역형광 현미경 검사

이 원고는 살아있는 세포에서 직접 형광 표지된 나노 입자의 세포내이입 후 세포 내 유전자 발현을 검출할 수 있는 새로운 기술을 설명합니다. 이 방법은 세포의 조작을 필요로 하지 않으며 표적 유전자 또는 종에 대해 제한되지 않습니다.

형광 표지 된 나노 입자를 사용하여 쥐, 인간과 돼지 유래의 살아있는 세포에서 세포 내 유전자 발현의 검출

여기에서는 유전 독성 스트레스에 노출 된 현탁 세포 배양 물에서 ATM과 p53 사이의 직접적인 단백질 - 단백질 상호 작용을 검출하고 시각화하기 위해 현장에서의 근접 연결 분석 (PLA)이 어떻게 사용될 수 있는지 보여줍니다.

Proximity Ligation Assay를 이용한 현탁 세포 배양에서의 DNA 손상 유발 단백질 복합체의 검출 및 가시화

레이저 microirradiation는 살아있는 세포에서 DNA 수리의 연구에 대 한 유용한 도구입니다. 다양 한 DNA 병 변 유발 하 UVA 레이저의 사용에 대 한 방법론 접근 표시 됩니다. 우리 지역 microirradiation; 정상적인 세포 주기를 유지 하는 방법을 최적화합니다 따라서, 비친된 세포 유사 분열을 통해 진행합니다.

고급 단백질 단백질 상호 작용 및 DNA 병 변에서 속도 론 연구에 Confocal 현미경 검사 법 기술

공초점 형광 현미경 검사 법 및 레이저 마이크로 조사 제공 도구 DNA 손상 유도 및 선택한 하위 핵 분야에서 DNA 수 선 단백질의 응답을 모니터링. 이 기술은 크게 손상 감지, 신호, 및 채용의 우리의 지식의 전진 했다. 이 원고에서는 단일 및 이중 가닥 브레이크 수리 검사 이러한 기술을 보여 줍니다.

단일의 검사 및 포유류 세포에서 이중 가닥 브레이크 수리에 대 한 레이저 마이크로-방사선의 응용

라이브 셀 이미징 고정된 셀 이미징 혼자 여 달성 하지 않은 단일 셀 이나 전체 인구에 풍부한을 정보를 제공 합니다. 여기, 라이브 세포 이미징 프로토콜 안티 mitotic 마약 paclitaxel와 치료 다음과 세포 운명 결정을 평가 하는 설명 합니다.

장기 라이브 셀 이미징 셀 운명 Paclitaxel에 대 한 응답에서을 평가 하

이중 가닥 DNA 틈의 수리 후 병 변 해결 뿐만 아니라 휴식, 하지만 또한 그들의 해상도에 선 단지의 형성을 필요로 역동적인 과정 이다. 여기, 사용 면역 형광 검사 현미경 검사 법 과도 하 고 오래 견 딘 더블-좌초 휴식을 위한 도구로 서이 게놈 유지 관리 메커니즘을 해 부 합니다.

면역 형광 검사 현미경 검사 법에 의해 변이 및 긴-지속 이중 가닥 DNA 틈에 DNA 복구 과정을 특성화

붕소 중성자 포획 요법(BNCT)에 사용되는 중성자 혼합빔에 의해 활성화된 방사선 유도 DNA 손상 반응은 완전히 확립되지 않았다. 이 프로토콜은 중성자 혼합 빔으로 조사 한 후 인간 대장암 세포주에서 면역 형광 염색에 의해 수리 단백질의 방사선 유도 포시 (RIF)를 검출하는 단계별 절차를 제공합니다.

인간 결장 암 세포에 있는 DNA 손상 및 복구 Foci의 면역 형광 화상 진찰

본 프로토콜에서, 우리는 면역 형광 기지를 둔 방법을 사용하여 세포 주기의 S/G2 단계 도중 DNA 이중 가닥 말 절제술을 구상하는 방법을 보여줍니다.

세포 주기 차별 화상 진찰과 결합된 BrdU DNA 라벨링을 사용하여 글로벌 DNA 이중 가닥 끝 절제술의 평가

학습하세요 면역형광법을 이용한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출 검출 방법을. HeLa 세포를 사용하여 핵막 구조와 DNA 손상 복구 메커니즘의 관계를 연구합니다.

면역형광에 의한 포유류 세포의 핵 블리빙 및 DNA 누출 검출

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