Saccharomyces cerevisiae γ-Secretase에 의한 아밀로이드 베타 생산에 영향을 미치는 유전자, 돌연변이 및 화학 물질을 스크리닝하는 알츠하이머병 모델

우리는 효모에서 감마 분비효소를 재구성하여 FAD 연관 돌연변이가 그 활성에 미치는 영향과 억제 돌연변이 또는 화학적 조절자가 그 기능을 회복하고 병원성 Abeta-42 수치를 감소시키는 방식을 조사하고 있습니다. 포유류 세포 및 효모 시스템을 이용한 기능 분석과 냉동전자기(cryo-em)를 통한 구조 분석을 결합하여 감마-분비효소 조절 기전을 연구합니다. 우리는 효모에서 감마 시크레터제 재구성 시스템을 사용해 FAD 돌연변이를 분석하고, 감마 시크레터아제 FAD 돌연변이의 활성을 회복시키고 감마 시크레터제 조절자의 효과를 모방하여 Abeta 42 수치를 낮출 수 있는 억제자를 규명했습니다.

우리 프로토콜은 효모의 감마 시크레터아제 활성을 신속하고 확장 가능한 기능적 스크리닝을 가능하게 하여, 복잡한 포유류 시스템에 의존하지 않고도 인간의 돌연변이와 조절자를 분석할 수 있게 합니다. 우리는 감마-시크레터아제 A의 새로운 유전적 또는 화학적 조절자와 억제제를 규명하고, Abeta-42 생산 메커니즘을 설명하며, 인간 막내 단백질분해로서 효모 기반 재건 시스템 전체를 확장하는 데 집중할 것입니다. 우선, 표준 리튬 아세테이트 방법을 사용하여 플라스미드를 효모 PJ69-4A 균주로 변형하여 감마 시크레터아제와 그 기질을 발현합니다.