Name: 3차원 난포 배양을 위한 새로운 히알루로난 하이드로겔의 응용 및 마우스 난포 동결 보존을 위한 방법론 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 31 s
Description: 배우세요 마우스 난소 조직에서 유래한 히알루로난 하이드로겔을 이용한 3차원 난포 배양 및 동결 보존 방법론입니다. 이 기술은 생식 생물학 및 불임 치료 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Telfer, E. E., Andersen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+growth+and+maturation+of+primordial+follicles+and+immature+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Fertil+Steril%22%5BJournal%5D)">In vitro growth and maturation of primordial follicles and immature oocytes.</a> Fertil Steril. 115 (5), 1116-1125 (2021).</li>
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<li>Xiao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+follicle+growth+supports+human+oocyte+meiotic+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vitro follicle growth supports human oocyte meiotic maturation.</a> Sci Rep. 5, 17323(2015).</li>
<li>Carabatsos, M. J., Sellitto, C., Goodenough, D. A., Albertini, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa+cell+heterologous+gap+junctions+are+required+for+the+coordination+of+nuclear+and+cytoplasmic+meiotic+competence%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa cell heterologous gap junctions are required for the coordination of nuclear and cytoplasmic meiotic competence.</a> Dev Biol. 226 (2), 167-179 (2000).</li>
<li>Diaz, F. J., Wigglesworth, K., Eppig, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocytes+are+required+for+the+preantral+granulosa+cell+to+cumulus+cell+transition+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Oocytes are required for the preantral granulosa cell to cumulus cell transition in mice.</a> Dev Biol. 305 (1), 300-311 (2007).</li>
<li>Eppig, J. J., Pendola, F. L., Wigglesworth, K., Pendola, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+oocytes+regulate+metabolic+cooperativity+between+granulosa+cells+and+oocytes%3A+amino+acid+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Mouse oocytes regulate metabolic cooperativity between granulosa cells and oocytes: amino acid transport.</a> Biol Reprod. 73 (2), 351-357 (2005).</li>
<li>Dadashzadeh, A., Moghassemi, S., Shavandi, A., Amorim, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+biomaterials+for+ovarian+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">A review on biomaterials for ovarian tissue engineering.</a> Acta Biomater. 135, 48-63 (2021).</li>
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<li>Joo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+collagen+hydrogel+on+3D+culture+of+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">The effect of collagen hydrogel on 3D culture of ovarian follicles.</a> Biomed Mater. 11 (6), 065009(2016).</li>
<li>Telfer, E., Torrance, C., Gosden, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+study+of+cultured+preantral+ovarian+follicles+of+mice+after+transplantation+under+the+kidney+capsule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Morphological study of cultured preantral ovarian follicles of mice after transplantation under the kidney capsule.</a> J Reprod Fertil. 89 (2), 565-571 (1990).</li>
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<li>Park, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+maturation+on+an+agarose+matrix+improves+the+developmental+competence+of+porcine+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">In vitro maturation on an agarose matrix improves the developmental competence of porcine oocytes.</a> Theriogenology. 157, 7-17 (2020).</li>
<li>Zaniker, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensionally+printed+agarose+Micromold+supports+scaffold-free+mouse+ex+vivo+follicle+growth%2C+ovulation%2C+and+luteinization%5BTitle%5D)+AND+%22Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Three-dimensionally printed agarose Micromold supports scaffold-free mouse ex vivo follicle growth, ovulation, and luteinization.</a> Bioengineering. 11 (7), 719(2024).</li>
<li>Pangas, S. A., Saudye, H., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+for+the+three-dimensional+culture+of+granulosa+cell-oocyte+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Novel approach for the three-dimensional culture of granulosa cell-oocyte complexes.</a> Tissue Eng. 9 (5), 1013-1021 (2003).</li>
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<li>Wu, J., Nayudu, P. L., Kiesel, P. S., Michelmann, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Luteinizing+hormone+has+a+stage-limited+effect+on+preantral+follicle+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Luteinizing hormone has a stage-limited effect on preantral follicle development in vitro.</a> Biol Reprod. 63 (1), 320-327 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>항-알파 튜불린-FITC 표지</td><td>시그마-알드리치</td><td>F2168 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>항-베타 튜불린-FITC 표지</td><td>시그마-알드리치</td><td>에프2043</td><td></td></tr><tr><td>BZ-X700 시리즈</td><td>키엔스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>센터 우물 접시</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>08-772-12</td><td></td></tr><tr><td>콜라게나제 유형 I</td><td>워딩턴 생화학 공사</td><td>LS004196</td><td></td></tr><tr><td>크라이캡 바이알 통풍</td><td>햄튼 리서치</td><td>HR4-904</td><td></td></tr><tr><td>크라이오루프</td><td>햄튼 리서치</td><td>HR4-974</td><td></td></tr><tr><td>크리스탈 캡</td><td>햄튼 리서치</td><td>HR4-733</td><td></td></tr><tr><td>배양 접시 60mm</td><td>피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td>08-772B</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드(DMSO)</td><td>시그마-알드리치</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>표피 성장 인자(EGF)</td><td>R& D 시스템</td><td>236-EG</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌 글리콜(EG)</td><td>시그마-알드리치</td><td>293237</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청-열 비활성화</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>10082-147</td><td></td></tr><tr><td>난포 자극 호르몬(FSH)</td><td>시그마-알드리치</td><td>F4021</td><td></td></tr><tr><td>글로벌-헤페스&nbsp; 보통</td><td>쿠퍼외과</td><td>LGGH-100</td><td></td></tr><tr><td>회크스트 33342</td><td>시그마-알드리치</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>인간 융모막 성선 자극 호르몬(hCG)</td><td>시그마-알드리치</td><td>CG10 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>인간 혈청 알부민</td><td>쿠퍼외과</td><td>GHSA-125</td><td></td></tr><tr><td>히알루로니다제</td><td>쿠퍼외과</td><td>ART-4007-A</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소</td><td>CVS 약국 Inc.</td><td>372441</td><td></td></tr><tr><td>인슐린-트랜스페린-셀레늄(ITS)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz 미디엄(L-15)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>11415-064</td><td></td></tr><tr><td>황체 형성 호르몬</td><td>시그마-알드리치</td><td>엘9773</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 지팡이</td><td>햄튼 리서치</td><td>HR4-729</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫(1000 & micro; m)</td><td>미니튜브</td><td>19025/0050</td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫(175, 200 및 275&micro; m)</td><td>쿠퍼외과</td><td>MXL3-175, MXL3-200, MXL3-275</td><td></td></tr><tr><td>Millex GV 필터 0.22 및 마이크로; m</td><td>밀리포어</td><td>SLGU033RS</td><td></td></tr><tr><td>미네랄 오일</td><td>쿠퍼외과</td><td>LGOL-500</td><td></td></tr><tr><td>최소 필수 미디엄 알파(MEM)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>32561-037</td><td></td></tr><tr><td>난자 이미징 시스템-Spindleview</td><td>해밀턴 쏜</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>요오드화 프로피듐</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4170</td><td></td></tr><tr><td>빠른 i</td><td>체의학</td><td>14406</td><td></td></tr><tr><td>스마트박스</td><td>체의학</td><td>14423</td><td></td></tr><tr><td>합성 단백질 대체물(SPS)</td><td>쿠퍼외과</td><td>아트-3011</td><td></td></tr><tr><td>티라민 결합 히알루론난 바이오하이드로겔 키트&nbsp;</td><td>라이프코어</td><td>영어-00151</td><td></td></tr><tr><td>초음파 실러</td><td>체의학</td><td>14415</td><td></td></tr><tr><td>범용 GPS 문화 접시 8x 100 및 마이크로; 엘 우물</td><td>쿠퍼외과</td><td>UGPS-010</td><td></td></tr></tbody></table>

3차원 난포 배양을 위한 새로운 히알루로난 하이드로겔의 응용 및 마우스 난포 동결 보존을 위한 방법론

Application of a Novel Hyaluronan Hydrogel for Three-Dimensional Follicle Culture and Methodology for Mouse Ovarian Follicle Cryopreservation

이 논문은 마우스 전전 여포의 체외 배양을 위해 새로운 티라민 결합 히알루로난 젤을 사용하는 방법론을 자세히 설명합니다36,37. 그림 6은 기존 2-D 배양 시스템에 배치했을 때와 3-D 배양을 위해 HA 겔로 캡슐화된 단일 여포의 차이를 보여줍니다. 토착 여포 건축은 12일의 문화 기간 동안 유지되며, 성장의 마지막 날에 분명히 볼 수 있는 전개막이 있습니다.
HA 젤은 아주 다재다능하, 고립된 여포의 성장을 단독으로 또는 그룹으로 허용하고 또한 난소 조직은 기계적으로 여포의 작은 송이로 끊어집니다. 젤은 투명하여 깊이가 다르더라도 난포를 시각화할 수 있습니다. 캡슐화된 여포와 FL-C는 지속적인 과립층 세포 증식으로 인해 방사상 확장을 나타냅니다(그림 7). 초기 난포 직경은 평균 139.8 ± 28 μm이며 GV 난모 세포 직경은 63.5 ± 4.6 μm입니다. 단독으로 배양된 여포에서 최종 직경은 약 385.6 ± 36.7 μm로 측정되며, 이는 크기가 약 3배 증가합니다. 배란 중기 II 난모세포는 약 84.8 ± 3.8 μm를 측정합니다. 배양된 FL 클러스터 내에서 여포 크기는 상당히 다양합니다(그림 5, 그림 7). hCG 유발 후 배란된 난모세포는 여포 근처에서 발견됩니다(그림 8). 중기 II기 난모세포의 대부분은 배란된 COC에서 회수됩니다. 방아쇠 후에도 여전히 박혀 있는 난포는 일반적으로 GV와 중기 I 난모세포를 포함합니다.
표 1 은 신선 난소 또는 냉동 난소에서 분리된 난포와 FL 클러스터 간의 성숙 속도를 대조합니다. 동결 보존된 난소의 FL-C는 성숙 속도가 현저히 낮았습니다. 현미경 관찰에 따르면 그들은 자주 기저판이 부러져 조기 난모세포 압출에 매우 취약한 것으로 나타났습니다. 난포 군집의 연약한 특성은 캡슐화에 의해 다소 상쇄되었습니다. 동결 보존된 난소에 대한 콜라겐분해효소 처리는 생존율이 낮고 온전한 난포의 수율이 낮아 특히 손상되기 때문에 피했습니다.
분리된 난포의 동결 보존은 전체 난소 보존보다 훨씬 더 효과적입니다. 조사된 두 가지 유리화 방법을 모두 사용하여 높은 성숙 속도를 달성할 수 있습니다(표 2). 냉각 속도의 큰 차이에도 불구하고 IVC 후 난모세포 성숙은 차이가 없었습니다. CL 오픈 캐리어는 단일 CL 오픈 캐리어에 최대 10개의 난포를 적재할 수 있으므로 더 많은 효율성을 허용합니다. 이는 또한 여러 동결 보존된 여포를 복구하는 데 걸리는 전체 시간을 단축합니다. 그러나, 인간 여포에 대한 유리화의 궁극적인 임상적 적용의 경우, 폐쇄형 밀봉 시스템이 선호될 수 있습니다.
GV 난모세포의 핵소체(nucleolus) 주위의 염색질 배열은 배란 후 수정되어 배반포로 발달할 가능성이 가장 높은 난모세포를 식별하는 데 사용할 수 있습니다38. 그림 9 는 염색질 분포 패턴을 시각화하기 위해 난모세포의 살아있는 염색을 보여줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig01.jpg"> 그림 1: 난포 성장의 개략도. 이 다이어그램은 1차 여포에서 2차 전방기, 그리고 마지막으로 배란이 준비된 완전히 성숙한 3차 난포에 이르기까지 여포 발달의 여러 단계를 보여줍니다. 전형적인 전방(preantral follicle)의 현미경 이미지도 다양한 형태학적 특징과 함께 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig02.jpg"> 그림 2: HA 캡슐화 방법의 개략도. 히알루로난 겔의 구조와 난포 포매를 위한 다양한 단계가 이 다이어그램에 설명되어 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig03.jpg"> 그림 3: 난포 분리 및 캡슐화. (A, B) 40배 및 200배 확대에서 포매를 위해 선택된 전전여포. (C) 자가사멸 여포는 난모세포가 중심이 아닌 건강한 전전여포로 표시됩니다. (D) 여포와 (E) 2개의 FL-C가 파종된 HA 겔 비드의 이미지. 전체 젤 비드를 보여주기 위해 실체 현미경으로 촬영한 이미지. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig04.jpg"> 그림 4: 분리된 여포의 동결 보존을 위한 유리화(Vitrification) 장치. CL 개방형 캐리어 장치를 사용하면 유리화(vitrification) 단계가 난포를 액체 질소에 직접 담그는 방식으로 수행됩니다. 따라서 냉각 속도는 -20,000°C/min 이상으로 매우 높습니다. 대조적으로, RI 폐쇄형 캐리어를 사용하면 내부 플라스틱 스틱에 난포가 적재되어 액체 질소에 잠긴 외부 빨대에 떨어집니다. 이 폐쇄형 유리화(vitrification) 방법은 액체 질소와의 직접적인 접촉을 방지합니다. 그러나 냉각 속도는 -1220°C/min에서 현저히 낮습니다. 두 보인자 중 하나에서 난포를 적재하고 회복하는 것은 쉽습니다. CL 개방형 캐리어는 장치당 최대 10개의 난포를 적재할 수 있는 반면, RI 폐쇄형 캐리어는 2개에 불과했습니다. 이 수치는35에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig05.jpg"> 그림 5: 발생한 문제의 대표 이미지. (A) 난모세포가 압출되는 난포 클러스터. (B) 부러진 기저 층막이 있는 고립된 여포와 돌출된 난모세포가 있는 여포. (C) 젤의 거품 아래에 끼워진 여포. (D) 젤에 남아 있는 난포 클러스터(왼쪽)와 너무 깊게 박혀 결국 접시에 부착된 클러스터와 비교. FL-C의 다양한 난포 크기가 명확하게 보입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig06.jpg"> 그림 6: HA에서 2-D 대 3-D 배양 컨벤션의 난포 성장 비교. 2-D 성장의 경우, 4일차까지 난포가 편평해지고 조직 배양 접시에 과립층 세포가 부착되는 것이 관찰되었으며, 이로 인해 난모세포는 과립층 세포 이동, 간극 연접 파괴 및 조기 난모세포 압출에 취약해졌습니다. HA-캡슐화된 여포는 배양 간격 동안 부착되지 않은 상태로 유지되었습니다. 과립층 세포 확장은 모든 방향에서 발생하여 난모세포를 감싸고 3D 구조를 유지했습니다. 이 수치는36에서 수정되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig07.jpg"> 그림 7: 티라민 결합 히알루로난 겔에 캡슐화된 난포의 대표 이미지. (A) 1일차에 신선한 난소의 콜라겐분해효소 분해 후 수집된 전방난포. (B) 배양 1일차 및 (C) 4일차에 이미지화된 4개의 전방(preantral follicle)이 파종된 젤 드롭, (D) 2일차에 신선한 난소에서 추출한 난포 클러스터, (E) 6일차, (F) 배양 9일차에 이미지화. (G) 유리화된 전체 난소에서 기계적으로 절개된 난포 클러스터, 배양 2일차 및 (H) 배양 6일차에 나타남. (I) antrum 형성이 있는 난포는 배양 9일차에 명확하게 볼 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig08.jpg"> 그림 8: 난모세포 배란. (A, B) 배란된 적운-난모세포 복합체(COC)가 다음에 나타난 HA-gel bead. (C) 주변 적운 세포를 제거하기 위해 히알루로니다아제(hyaluronidase)로 COC를 효소 처리한 후 난모세포를 이미지화했습니다. 수많은 중기 II 난모세포. (D) 두드러진 극체를 가진 중기 II 난모세포. 배율 400x. (E)37에 설명된 대로 감수분열 방추체를 시각화하고 조직을 평가하기 위해 편광과 이미징 시스템을 사용한 중기 II 난모세포의 라이브 이미징. 배율 400x. 수직 복굴절 스핀들이 보입니다. (F) 감수분열 방추체 조직을 시각화하기 위해 anti-alpha/beta-tubulin 및 propidium iodide로 고정 및 염색된 중기 II 난모세포. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig08large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67786/67786fig09.jpg"> 그림 9: GV 난모세포의 염색질 재조직. antrum 형성 후 GV 난모세포의 염색질 배열을 Hoechst 33342(50ng/mL)로 DNA를 염색하여 검사했습니다. 대표적인 난포는 부드러운 피펫팅을 통해 HA beads에서 채취했습니다. 과립층 세포는 히알루로니다아제를 사용하여 제거하였다. 그런 다음 GV 난모세포를 15분 동안 염색했습니다(Monti et al.38의 프로토콜 참조). 이미지는 40배 확대하여 촬영되었습니다. (A) 배양 시작 시 1일차에 나타난 GV 난모세포는 비주위 염색질(NSN) 염색 패턴을 나타냅니다. (B) hCG 유발 당일에 나타난 antrum과 함께 성장하는 여포에서 나온 GV 난모세포. 염색질은 응축되어 핵소체 주위에 핵주위 고리를 형성했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67786/67786fig09large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>매개 변수</td>
			<td colspan="2">신선한 난소</td>
			<td>얼어붙은 난소</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>FL 절연</td>
			<td>FL 클러스터</td>
			<td>FL 클러스터</td>
		</tr><tr><td>IVC 중 관찰된 난포</td>
			<td>130</td>
			<td>154</td>
			<td>69</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">HCG (%) 후에 배란</td>
			<td>71%</td>
			<td>66%</td>
			<td>93%</td>
		</tr><tr><td>(92/130)</td>
			<td>(101/154)</td>
			<td>(64/69)</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">GVBD (%)</td>
			<td>30%</td>
			<td>28%</td>
			<td>52%</td>
		</tr><tr><td>(28/92)</td>
			<td>(28/101)</td>
			<td>(33/64)</td>
		</tr><tr><td>MII 난모세포 형성(%)</td>
			<td>59%</td>
			<td>55%</td>
			<td>*34%</td>
		</tr><tr><td></td>
			<td>(54//92)</td>
			<td>(56/101)</td>
			<td>(22/64)</td>
		</tr></tbody></table>표 1: 신선 난소와 유리화된 난소에서 HA가 포매된 난포의 결과. 신선한 난소의 난포 및 FL-C는 HA 겔에 캡슐화된 후 시험관 에서 숙성되었습니다. HA 겔은 또한 EG/DMSO 프로토콜39를 사용하여 유리화한 난소의 난포에 대해 테스트되었습니다. 신선한 난소의 경우, 콜라겐분해효소 소화 후 개별 난포(FL)와 여포 클러스터(FL-C)를 모두 수집했습니다. 유리화된 난소의 경우, 콜라겐분해효소에 노출되면 실제로 난포가 손상되었습니다. 동결 보존된 난소를 사용하는 가장 좋은 방법은 개별 난포가 아닌 FL 클러스터를 분리하고 바늘을 사용한 기계적 절제만 사용하는 것이었습니다. 이 표는 4-6개의 그룹으로 난포가 파종된 HA 비드와 6-10개의 여포를 포함하는 단일 FL-C가 있는 비드 간의 결과를 대조합니다. *동결보존된 난소에서 FL-C의 성숙률은 유의하게 낮았다(p=0.008; 유의성을 검정하기 위한 카이제곱 분석).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2">항공모함</td>
			<td>RI</td>
			<td>씨엘</td>
		</tr><tr><td>(종료)</td>
			<td>(오픈)</td>
		</tr><tr><td>생존율 (%)</td>
			<td>100% (24/24)</td>
			<td>100% (41/41)</td>
		</tr><tr><td>앤트럼 형성* (%)</td>
			<td>25.0% (6/24)</td>
			<td>75.6% (31/41)*</td>
		</tr><tr><td>배란률(%)</td>
			<td>66.7% (16/24)</td>
			<td>87.8% (36/41)</td>
		</tr><tr><td>성숙률(% MII)</td>
			<td>81.3% (13/16)</td>
			<td>69.4% (25/36)</td>
		</tr></tbody></table>표 2: 두 개의 서로 다른 유리화 장치에서 분리된 난포를 동결 보존한 후의 결과. 높은 성숙률은 개방형 CL 장치와 폐쇄형 RI 캐리어 모두에서 달성되었으며 냉각 속도가 더 낮았습니다. 앤트럼 형성은 유의미한 것으로 관찰된 유일한 결과 측정이었지만 전체 성숙률에는 영향을 미치지 않았다(p &lt; 0.05; 유의성을 검정하기 위한 카이제곱 분석).

The 3-D architecture of the ovarian follicle and the complex interactions between somatic cell components and the oocyte that are necessary for ...

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Research

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