Name: 전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구의 분리 및 특성화(The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 배우세요 인간 전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구를 비접촉 방식으로 분리하는 방법을. 밀도 그래디언트 원심분리와 음성 자기 분리를 활용하여 높은 순도와 생존율을 확보하고, 호중구 이질성 및 질병 역할 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Tracchi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neutrophil+lifespan+in+patients+with+congestive+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Increased neutrophil lifespan in patients with congestive heart failure.</a> Eur J Heart Fail. 11 (4), 378-385 (2009).</li>
<li>Ballesteros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+neutrophil+fates+by+tissue+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of neutrophil fates by tissue environments.</a> Cell. 183 (5), 1282-1297.e18 (2020).</li>
<li>Mckenna, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils%3A+Need+for+standardized+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils: Need for standardized nomenclature.</a> Front Immunol. 12, 602963(2021).</li>
<li>Hacbarth, E., Kajdacsy-Balla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+neutrophils+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%2C+rheumatoid+arthritis%2C+and+acute+rheumatic+fever%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low density neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and acute rheumatic fever.</a> Arthritis Rheumatol. 29 (11), 1334-1342 (1986).</li>
<li>Hardisty, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+purity+isolation+of+low+density+neutrophils+casts+doubt+on+their+exceptionality+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">High purity isolation of low density neutrophils casts doubt on their exceptionality in health and disease.</a> Front Immunol. 12, 625922(2021).</li>
<li>Scapini, P., Marini, O., Tecchio, C., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neutrophils+in+the+saga+of+cellular+heterogeneity%3A+Insights+and+open+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: Insights and open questions.</a> Immunol Rev. 273 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Ssemaganda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neutrophil+subsets+in+healthy+human+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of neutrophil subsets in healthy human pregnancies.</a> PLoS One. 9 (2), e85696(2014).</li>
<li>Tay, S. H., Celhar, T., Fairhurst, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (10), 1587-1595 (2020).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> J Leukoc Biol. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Cowland, J. B., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neutrophil+precursors+from+bone+marrow+for+biochemical+and+transcriptional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of neutrophil precursors from bone marrow for biochemical and transcriptional analysis.</a> J Immunol Methods. 232 (1-2), 191-200 (1999).</li>
<li>Blanco-Camarillo, C., Aleman, O. R., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+healthy+individuals+display+a+mature+primed+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in healthy individuals display a mature primed phenotype.</a> Front Immunol. 12, 672520(2021).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+display+immature+cells+with+enhanced+NET+formation+in+people+living+with+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes display immature cells with enhanced NET formation in people living with HIV.</a> Sci Rep. 13 (1), 13282(2023).</li>
<li>Denny, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subset+of+proinflammatory+neutrophils+isolated+from+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+induces+vascular+damage+and+synthesizes+type+I+IFNs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A distinct subset of proinflammatory neutrophils isolated from patients with systemic lupus erythematosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs.</a> J Immunol. 184 (6), 3284-3297 (2010).</li>
<li>Ui Mhaonaigh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+granulocytes+in+anca+vasculitis+are+heterogenous+and+hypo-responsive+to+anti-myeloperoxidase+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low density granulocytes in anca vasculitis are heterogenous and hypo-responsive to anti-myeloperoxidase antibodies.</a> Front Immunol. 10, 2603(2019).</li>
<li>Mosca, T., Forte, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficiency+and+impact+on+the+activity+of+blood+neutrophils+isolated+by+Percoll%2C+Ficoll+and+spontaneous+sedimentation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Comparative efficiency and impact on the activity of blood neutrophils isolated by Percoll, Ficoll and spontaneous sedimentation methods.</a> Immunol Invest. 45 (1), 29-37 (2016).</li>
<li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+apoptotic+neutrophils+and+macrophages+and+impaired+macrophage+phagocytic+clearance+of+apoptotic+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Increased apoptotic neutrophils and macrophages and impaired macrophage phagocytic clearance of apoptotic neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 48 (10), 2888-2897 (2003).</li>
<li>Connelly, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+the+accurate+characterization+of+whole+blood+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for the accurate characterization of whole blood neutrophils.</a> Sci Rep. 12 (1), 3667(2022).</li>
<li>Carmona-Rivera, C., Kaplan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+in+systemic+autoimmunity+and+autoinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes in systemic autoimmunity and autoinflammation.</a> Immunol Rev. 314 (1), 313-325 (2023).</li>
<li>Yennemadi, A. S., Keane, J., Leisching, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+bioenergetic+changes+in+systemic+lupus+erythematosus+immune+cell+subsets%3A+Contributions+to+pathogenesis+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial bioenergetic changes in systemic lupus erythematosus immune cell subsets: Contributions to pathogenesis and clinical applications.</a> Lupus. 32 (5), 603-611 (2023).</li>
<li>Futoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+low-density+granulocytes+after+colorectal+cancer+surgery+in+predicting+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BJS+Open%22%5BJournal%5D)">Peripheral low-density granulocytes after colorectal cancer surgery in predicting recurrence.</a> BJS Open. 7 (1), zrac154(2023).</li>
<li>Dwivedi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+dysfunctional+neutrophils+with+a+defect+in+arginase-1+release+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Emergence of dysfunctional neutrophils with a defect in arginase-1 release in severe COVID-19.</a> JCI Insight. 9 (17), e171659(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>14 mL 폴리프로필렌 둥근 바닥 튜브 (17 x 100 mm)</td><td>코닝 사이언</td>스 <td>352059</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-human CD14 (63D3)</td><td>BioLegend</td><td>367118</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 anti-human CD10 (25 테스트)</td><td>BioLegend</td><td>312217</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco의 인산염 완충 식염수</td><td>시그마</td><td>D8537-1L</td><td></td></tr><tr><td>EasyEights EasySep 자석</td><td>StemCell Technologies</td><td>#18103</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Buffer (세포 분리 완충액)</td><td>StemCell Technologies</td><td>#20144</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Direct Human Neutrophil Isolation Kit</td><td>StemCell Technologies</td><td>#19666</td><td></td></tr><tr><td>FcR 차단 시약, human</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-human CD16 (3G8)</td><td>BioLegend</td><td>302005</td><td></td></tr><tr><td>OneComp eBeads 보상 비드</td><td>eBioscience Inc.</td><td>01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 anti-human CD86 (BU63)</td><td>BioLegend</td><td>374209</td><td></td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 anti-human CD15 (SSEA-1)</td><td>BioLegend</td><td>323037</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 정제&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td></td></tr><tr><td>좀비 NIR 고정 가능한 생존력 키트</td><td>BioLegend</td><td>423105</td><td></td></tr></tbody></table>

전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구의 분리 및 특성화(the isolation and characterization of low- and normal- density neutrophils from whole blood)

The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood

밀도 구배 매질에 걸친 총 호중구의 성공적인 층화는 그림 1B에서 관찰할 수 있습니다. 두 개의 별개의 밴드를 얻어야 합니다. 구배의 혼합이 발생하거나 튜브당 층을 이룬 총 호중구의 수가 많으면(대략 5-6 × 106 이상) 띠가 분산되어 보이며(그림 1C), 두 호중구 아형이 혼합될 위험이 크게 증가합니다. 후자를 피하려면 밀도 구배 튜브당 총 호중구를 최대 5-6개 ×10-6 개까지 층을 이루는 것이 좋습니다. 건강한 개인에서 LDN의 수가 매우 낮아 다운스트림 연구에서 달성할 수 없다는 보고에도 불구하고, 이 방법은 LDN(평균 3.28 × 106 cells/mL)과 NDN(평균 10.64 ×10 6 cells/mL) 모두의 우수한 수율과 건강한 참가자의 순도를 보여줍니다(그림 2).</...

전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구의 분리 및 특성화(The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood)

Emerging research shows that the circulating neutrophil population in humans consists of diverse subtypes and should not be studied as a single ...

the-isolation-characterization-low-normal-density-neutrophils-from

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Neutrophils은 염증성 면역 반응의 사이트에 도착을 가장 먼저 세포 사이에하며, 그들의 기능과 메커니즘은 체외에서 광범위하게 연구되고있다. 우리는 상용 분리 미디어를 사용 전체 혈액에서 인간 neutrophils을 분리하기위한 기준 밀도 기울기 분리 방법을 보여줍니다.

호중구 격리 프로토콜

이 비디오에서는 수술 후 인간 환자의 복막 세척액에서 저밀도 호중구(LDN)를 분리하는 절차를 설명합니다. 이렇게 얻은 LDN은 종양 성장 및 진행에 대한 LDN의 역할을 이해하기 위한 추가 다운스트림 실험에 사용할 수 있습니다.

Peritoneal Low-density Neutrophil Isolation: A Technique to Obtain Low-density Neutrophils from Peritoneal Lavage Fluid Using Magnetic Activated Cell Sorting(복막 저밀도 호중구 분리: 자기 활성화 세포 분류를 사용하여 복막 세척액에서 저밀도 호중구를 얻는 기술)

이 비디오에서는 종양이 있는 마우스의 혈액에서 불연속 자당 구배 원심분리를 통해 세포독성 고밀도 호중구와 저밀도 호중구를 분리하는 방법을 보여줍니다.

Isolation of Cytotoxic Neutrophils from Tumor-Bearing Mouse Blood(종양을 지닌 쥐 혈액에서 세포독성 호중구의 분리)

이 비디오는 호중구-생물막 상호 작용을 연구하기 위한 체외 분석을 보여줍니다. 생물막에 내장된 병원성 세균과 분리된 호중구는 형광 표지를 사용하여 태그를 지정하고, 호중구에 의한 면역 반응과 박테리아에 의한 면역 반응 회피를 형광 현미경을 사용하여 평가했습니다.

호중구와 생물막 사이의 상호 작용을 연구하기 위한 체외 분석

호중구는 침입하는 미생물에 대한 숙주 방어뿐만 아니라 종양 세포의 면역 감시에도 중요한 역할을 합니다. 여기에서는 항종양 특성을 가진 호중구의 분리와 관련된 기술과 in vitro 및 in vivo에서 항종양 호중구 기능을 모니터링하는 방법에 대해 설명합니다.

항 종양 특성을 가진 분리 및 호중구의 특성

호중구는 백혈구 중 가장 풍부한 유형입니다. 밀도 구배 분리 방법에 의한 인간 혈액에서 호중구의 분리 및 과립구 경로를 따른 인간 전골수구(HL60) 세포의 분화가 여기에 설명되어 있습니다. 항림프종제에 대한 림프종 세포의 민감도에 대한 역할을 테스트합니다.

호중구의 분리 및 분석 치료제에 림프종 세포 감도에서 자신의 역할을 확인하는 방법

새로운 프로토콜 분리 하 고 인간에서 파생 된 미의 특성 설명 및 마우스 호 중구. 이러한 프로토콜 활용 ultracentrifugation, cytometry, 기술과 immunoblotting microparticle 콘텐츠를 분석 하 고 세포질 기능에 다양 한 셀 형식에서 파생 된 미의 역할을 연구 하기 사용할 수 있습니다.

절연 및 특성화 Neutrophil 파생 된 미의 기능 연구

이 프로토콜 면역 형광 3 차원 confocal 현미경 검사 법에 의해 ex vivo 그물 형성의 반자동된 정량화에 대 한 매우 민감하고 높은 처리량 호 중구 extracellular 함정 (그물) 분석 결과를 설명합니다. 이 프로토콜 네트워크 형성 및 다른 자극 후 저하를 평가 하는데 사용 될 수 있습니다 그리고 잠재적인 NET 타겟 치료를 공부 하는 데 사용할 수 있습니다.

평가 하 고 호 중구 Extracellular 함정 대형 계량 높은 처리량 분석 결과

이 프로토콜은 전혈, 버피 코트 또는 백혈구 막에서 호중구를 분리하여 좋은 수율, 높은 순도 및 최소한의 세포 활성화를 달성하는 방법을 자세히 설명합니다. 그라데이션 정제, 적혈구(RBC) 퇴적물 및 RBC 용액을 활용하여 고품질/순도 호중구 제제를 획득합니다.

전신 혈액과 버피 코트에서 인간의 호중구의 격리

이 연구는 쥐의 골수에서 풍부한 호중구 세포외 트랩(NET)을 분리하는 두 가지 기술을 간략하게 설명합니다. 한 가지 방법은 상용 호중구 분리 키트와 밀도 구배 원심분리를 결합하는 반면, 다른 방법은 밀도 구배 원심분리만 사용합니다. 두 접근법 모두 말초 혈액 호중구의 NET을 능가하는 기능적 NET을 산출합니다.

비슷한 용량의 쥐 골수 호중구를 분리하기 위한 독특한 접근법

저밀도 호중구(LDN)는 여러 질병에서 크게 증가합니다. LDN은 일반적으로 세포 분류를 통해 분리됩니다. 순수하고 실행 가능한 LDN을 얻는 실용적인 방법을 제시합니다. 말초 혈액의 밀도 구배 원심분리 후 세포를 자성 마이크로비드와 함께 배양한 다음 LDN을 자기 컬럼을 통해 분리합니다.

저밀도 호중구의 효율적인 정제를 위한 신속한 자기-마이크로비드 방법

배우세요 인간 전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구를 비접촉 방식으로 분리하는 방법을. 밀도 그래디언트 원심분리와 음성 자기 분리를 활용하여 높은 순도와 생존율을 확보하고, 호중구 이질성 및 질병 역할 연구에 활용할 수 있습니다.

전혈에서 저밀도 및 정상 밀도 호중구의 분리 및 특성화(The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood)

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