쥐를 위한 직접 미주신경 주사 프로토콜

우리는 유전자 대체 요법에 대한 전임상 연구를 수행합니다. 우리는 실험 동물을 사용하여 자율신경계 및 말초 신경계 문제를 해결하기 위한 최적의 약물 전달 방법을 확립합니다. 벡터 기반 유전자 대체 요법은 유전자 치료의 새로운 기술 중 하나입니다. 아디노 관련 바이러스 벡터의 적용은 현재 사용 가능한 잠재적 옵션 중 하나입니다. AAV9는 관심 유전자를 중추 및 말초 신경계에 전달하기 위해 유전자 치료 연구에 널리 사용되었습니다. 연구자들은 약물을 말초 신경계에 직접 전달할 수 있는 옵션이 충분하지 않습니다. 말초 또는 자율 신경계로 인한 신경 장애와 관련된 상황이 있습니다. 그러나 이러한 상황을 해결할 수 있는 효과적인 약물 전달 방법이 부족합니다.

이 방법은 쥐를 사용한 전임상 연구에서 자율신경계 문제를 해결하기 위해 미주 신경에 직접 약물을 전달하는 방법을 보여줍니다. 또한, 이 방법은 다른 종에서 필요한 변형을 통해 다른 말초 신경을 통해 약물을 전달하기 위해 수출될 수 있습니다. 회색 연구실은 설치류와 대형 동물을 모두 사용하여 AV 매개 전임상 유전자 치료 연구를 계속할 것입니다. 또한 우리는 유전자 대체 요법의 전략을 마련하는 데 적용할 수 있는 새로운 방법을 개발하는 데 중점을 두었습니다.

[해설자] 시작하려면 플런저를 제거한 100마이크로리터 유리 주사기를 27게이지 바늘에 연결합니다. 약 45cm의 멸균된 폴리에틸렌 튜브의 한쪽 끝을 27게이지 바늘에 연결한 다음 3밀리리터 플라스틱 주사기에 27게이지 바늘을 끼우고 주사기에 약 0.5밀리리터의 0.9% 생리 식염수를 넣습니다. 0.9% 생리 식염수를 사용하여 열린 끝에서 폴리에틸렌 튜브를 채우고 튜브의 전체 길이를 보장하고 식염수가 넘칠 때까지 유리 주사기의 배럴을 채웁니다. 완료되면 3밀리리터 주사기와 바늘을 제거하고 버립니다. 이제 플런저를 유리 주사기의 배럴에 삽입하고 배럴 중앙으로 약간 앞으로 밀고 유리 주사기를 주사기 펌프에 넣습니다. 주사기 펌프를 사용하여 플런저를 약간 뒤로 당겨 튜브의 열린 끝에 약 1.5cm의 공역을 만듭니다. 멸균된 파라 필름 조각에 10마이크로리터 마이크로 피펫을 사용하여 최소 5마이크로리터의 염료와 후보 약물 혼합물을 피펫팅합니다. 주사기 펌프를 사용하여 후보 약물 혼합물을 튜브로 빼내고 주사 혼합물의 수준을 마커로 표시합니다. 35게이지 바늘을 튜브에 끼우고 테이프로 수술 단계의 깨끗한 표면에 고정하여 고정되고 멸균된 상태로 유지되며 다른 어떤 것도 닿지 않도록 합니다. 주사 용액이 바늘 끝에서 나오기 시작할 때까지 10-15초 동안 주사기 펌프를 시작합니다. 마취된 쥐를 제모 및 부위 준비를 위한 테이블로 옮깁니다. 과도한 건조를 방지하기 위해 쥐의 양쪽 눈에 인공 눈물 연고를 바르십시오. 쥐가 의식을 회복할 때 통증을 조절하기 위해 승인된 기관 동물 프로토콜에 따라 진통제를 투여합니다. 경추 부위의 목 복부 면도를 깎고 턱에서 흉골까지 양쪽 정중선에서 수직으로 약 2cm까지 확장합니다. 면도한 부위를 에틸알코올 70%와 베타딘 10%로 3회 살균하고 바깥쪽으로 원형으로 닦아냅니다. 해부 현미경 아래에서 누운 자세로 쥐를 수술 단계로 옮깁니다. 쥐 아래의 가열 패드가 적절하게 템퍼링되었는지 확인하고 수술을 위해 경부 부위를 시각화하도록 초점을 맞춘 현미경을 조정하십시오. 비흡수성 봉합사로 쥐를 연결하거나 턱 치아를 연결하십시오. 마취 기간 동안 콧구멍이 코뿔 안에 유지되도록 봉합사의 열린 끝을 노즈콘 내부에 고정합니다. 쥐의 머리가 오른손잡이 외과 의사의 왼쪽에 놓이도록 위치시킵니다. 목 아래에 멸균된 거즈 쿠션을 놓고 경추 부위를 곧게 펴십시오. 쥐의 몸을 멸균된 드레이프로 덮어 수술 부위를 노출시킵니다. 수술 단계의 네 모서리에 자기 고정 장치로 4개의 견인기 핀을 고정합니다. 이제 국소 마취제를 주입합니다 절개가 이루어질 경추 부위의 정중선에 표피. 메스 칼날을 사용하여 복부 경추 부위의 턱과 흉골 사이의 정중선에 2cm 세로 피부 절개를 합니다. 그런 다음 멸균된 면 끝으로 절단된 피부 가장자리를 뭉툭하게 분리합니다. 견인기 팁을 사용하여 분리된 피부 가장자리를 반대 방향으로 후퇴시킵니다. 면 끝을 사용하여 근막을 분리하여 더 깊숙이 들어가고 침샘을 옆으로 밀어 넣습니다. 이제 면 끝으로 흉골 유양돌근을 분리하고 견인기 핀으로 옆으로 집어넣습니다. 경동맥초가 보일 때까지 기관 왼쪽의 조직을 계속 분리합니다. 미세한 겸자를 사용하여 경동맥을 손상시키지 않고 경동맥초에 작은 구멍을 만들고 왼쪽 미주 신경을 총경동맥에서 조심스럽게 분리합니다. 겸자를 사용하여 신경을 동맥에서 분리하면 1밀리리터 주사기에 장착된 25게이지 곡선 바늘을 사용하여 걸고 주로 사용하지 않는 손으로 신경을 잡습니다. 주로 사용하는 손으로 후보 약물 염료 혼합물이 담긴 바늘을 잡습니다. 부드럽게 찌르려면 25게이지 후크를 사용하여 신경을 부드럽게 당겨 신경을 곧게 유지하십시오. 바늘을 신경에 삽입하고 바늘을 미주 신경과 평행하게 유지하면서 0.5cm 이상 앞으로 전진시킵니다. 바늘의 약 0.4-0.5센티미터가 신경 내부에 남아 있도록 약간 뒤로 당깁니다. 단일 바늘로 신경을 찌르는 횟수를 3회 이하로 제한하십시오. 바늘 삽입을 확인한 후 움직이지 않고 위치를 유지하고 주사기 펌프를 켭니다. 주입이 신경 내부에 남아 있고 원활하게 흐르는지 모니터링하십시오. 주입 튜브에 표시된 지점을 사용하여 약물 염료 혼합물의 움직임을 추적합니다. 신경이 염료의 색을 발달시키기 시작하는 것을 관찰하십시오. 25게이지 곡선 바늘을 제거하고 멸균 면봉 끝을 사용하여 티슈를 원래 위치로 부드럽게 다시 이동합니다. 그런 다음 견인기 팁을 제거합니다. 흡수성 또는 비흡수성 봉합사로 상처를 봉합하고 필요한 경우 실밥 사이에 소량의 티슈 접착제를 바르면 상처가 완벽하게 봉합됩니다.