Name: 비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 26 s
Description: 배우세요 심근경색에서 대식세포 대사 플럭스 분석을 통해 면역세포 대사 변화가 심장 재형성에 미치는 영향을 이해하는 방법입니다. 이 기술은 생체 내 유전적 접근법과 정밀 세포 추출을 결합하여 신속한 대사 분석을 가능하게 합니다.

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<ol><li>Ma, Y., Mouton, A. J., Lindsey, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+macrophage+biology+in+the+steady-state+heart%2C+the+aging+heart%2C+and+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cardiac macrophage biology in the steady-state heart, the aging heart, and following myocardial infarction.</a> Transl Res. 191, 15-28 (2018).</li>
<li>Mouton, A. J., Li, X., Hall, M. E., Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+hypertension%2C+and+cardiac+dysfunction%3A+Novel+roles+of+immunometabolism+in+macrophage+activation+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Obesity, hypertension, and cardiac dysfunction: Novel roles of immunometabolism in macrophage activation and inflammation.</a> Circ Res. 126 (6), 789-806 (2020).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimethyl+fumarate+preserves+left+ventricular+infarct+integrity+following+myocardial+infarction+via+modulation+of+cardiac+macrophage+and+fibroblast+oxidative+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Dimethyl fumarate preserves left ventricular infarct integrity following myocardial infarction via modulation of cardiac macrophage and fibroblast oxidative metabolism.</a> J Mol Cell Cardiol. 158, 38-48 (2021).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+glucose+metabolism+reflect+polarization+in+resident+and+monocyte-derived+macrophages+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in glucose metabolism reflect polarization in resident and monocyte-derived macrophages after myocardial infarction.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1136252(2023).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+improves+left+ventricular+function+but+not+macrophage-mediated+inflammation+following+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism improves left ventricular function but not macrophage-mediated inflammation following myocardial infarction.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 327 (3), C571-C586 (2024).</li>
<li>Mouton, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+macrophage+polarization+over+the+myocardial+infarction+time+continuum%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Mapping macrophage polarization over the myocardial infarction time continuum.</a> Basic Res Cardiol. 113 (4), 26(2018).</li>
<li>XF software. Agilent Seahorse Analytics. , Agilent Technologies, Inc. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485">https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</a> (2025).</li>
<li>Matsuura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+suppresses+glucose+uptake+and+glycolysis+in+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Diabetes suppresses glucose uptake and glycolysis in macrophages.</a> Circ Res. 130 (5), 779-781 (2022).</li>
<li>Alexander, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bmal1+integrates+mitochondrial+metabolism+and+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Bmal1 integrates mitochondrial metabolism and macrophage activation.</a> Elife. 9, e54090(2020).</li>
<li>Wan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-34a+regulates+macrophage-associated+inflammation+and+angiogenesis+in+alcohol-induced+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatol+Commun%22%5BJournal%5D)">miR-34a regulates macrophage-associated inflammation and angiogenesis in alcohol-induced liver injury.</a> Hepatol Commun. 7 (4), e0089(2023).</li>
<li>Nomura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+oxidation+in+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fatty acid oxidation in macrophage polarization.</a> Nat Immunol. 17 (3), 216-217 (2016).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolytic+reprogramming+in+macrophages+and+MSCs+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolytic reprogramming in macrophages and MSCs during inflammation.</a> Front Immunol. 14, 1199751(2023).</li>
<li>Desousa, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calculation+of+ATP+production+rates+using+the+Seahorse+XF+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Calculation of ATP production rates using the Seahorse XF Analyzer.</a> EMBO Rep. 24 (10), e56380(2023).</li>
<li>Lewis, A. J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+immunometabolic+cardiac+inflammation+imaging+using+hyperpolarized+magnetic+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Noninvasive immunometabolic cardiac inflammation imaging using hyperpolarized magnetic resonance.</a> Circ Res. 122 (8), 1084-1093 (2018).</li>
<li>Walls, J., Romero, M. Assessing T cell bioenergetic poise and spare respiratory capacity using extracellular flux analysis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalls%2C+J+%22Agilent+Technologies+application+note%22">Agilent Technologies application note</a>. , 5994-4494 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Anti-CD11b Microbeads UltraPure, 마우스</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-126-725</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ly6G Microbeads UltraPure, 마우스</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-337</td><td></td></tr><tr><td>콜라게나제 유형 II</td><td>Worthington</td><td>NC9522060</td><td></td></tr><tr><td>Dnase 유형 I</td><td>MillPore Sigma</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS Octo Dissociator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>GentleMACS C 튜브</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td>MACS 세포 해리 튜브&nbsp;</td></tr><tr><td>행크 균형 소금 용액</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-025-076</td><td></td></tr><tr><td>LS 마그네틱 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MS 마그네틱 컬럼&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>단핵구 분리 키트 골수, 마우스</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-629</td>에는 <td>단핵구 비오틴-항체 칵테일 1mL, 항비오틴 마이크로비드 2mL, FcR 차단 시약 1mL가 포함되어</td></tr> 있습니다. <tr><td>OctoMACS 분리기</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-108</td><td></td></tr><tr><td>사전 분리 필터(30 & micro; m)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS 분리기</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-051</td><td></td></tr><tr><td>적혈구 용해 용액 (10x)</td> <td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 분석기</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>Pro 센서 카트리지 18개, Pro Cell Cutlure 마이크로플레이트 18개, Seahorse XF 교정 용액 1병</td></tr><tr><td>Seahorse XF 해당작용 스트레스 테스트 키트</td><td>Agilent</td><td>103020-100</td> 포<td>도당, 올리고마이신 및 2-데옥시-D-글루코스가 포함된 일회용 파우치 6</td></tr>개 <tr><td>Seahorse XF 미토콘드리아 스트레스 테스트 키트</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>올리고마이신, FCCP 및 로테논/안티마이신 A</td></tr> <tr><td>포함 일회용 파우치 6개Seahorse XF RPMI 배지, pH 7.4, 500 mL</td><td>Agilent</td><td>103576-100</td><td>페놀 레드, 중탄산염, 포도당, 피루베이트 또는 글루타민 없음</td></tr></tbody></table>

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

Analyzing Ex Vivo Metabolic Flux in Splenic and Cardiac Macrophages and Bone Marrow Monocytes

서로 다른 조직에서 얻은 일반적인 세포 수는 동물의 크기, 나이 및 성별에 따라 다릅니다. 성체 수컷 마우스(즉, 생후 16주, ~30g)의 경우 비장은 3.0-4.0 × 106 대식세포를 산출할 수 있는 반면, 골수(2개의 경골과 2개의 대퇴골)는 일반적으로 1.0-1.5 × 106 단핵구를 산출합니다(그림 2A). 경색된 심장은 일반적으로 MI 4,5,6 이후 날에 따라 높은 수치를 산출합니다. 3일차에 수율은 일반적으로 심장당 ~1.5 × 106 세포입니다. 건강한 심장에는 일반적으로 대식세포가 거의 없습니다(0.1-0.2 × 105/심장)6. 따라서 건강한 심장(경색되지 않은 심장)의...

Metabolic reprogramming is a hallmark of monocyte/macrophage activation and polarization between pro- and anti-inflammatory states. For example, ...

analyzing-ex-vivo-metabolic-flux-splenic-cardiac-macrophages-bone

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

단핵구는 선천성 면역의 핵심 조절자이며 말초 단핵 식세포 시스템의 재생과 염증의 경우에 중요한 역할을 합니다. 이 원고는 단핵구 동원 메커니즘을 연구하기 위해 마우스 칼바리아 골수를 실시간으로 이미징하는 절차를 설명합니다.

마우스 골수 단핵구를 추적<em&gt; 생체</em

대사 재프로그래밍은 M1 및 M2 대식세포 분극의 특성이자 전제 조건입니다. 이 원고는 마우스 골수 유래 대식세포에서 해당작용 및 미토콘드리아 기능의 기본 매개변수를 측정하기 위한 분석을 설명합니다. 이 도구는 특정 요인이 대식세포의 대사와 표현형에 어떤 영향을 미치는지 조사하는 데 적용할 수 있습니다.

실시간 세포 외 유출 분석을 사용하여 편광 M1과 M2 골수 유래 대 식세포의 대사 특성

신진대사에 대한 연구는 면역학 연구와 점점 더 관련성이 높아지고 있습니다. 여기에서는 마우스 비장 세포와 T 및 B 림프구에서 해당작용 및 미토콘드리아 호흡을 측정하기 위한 최적화된 방법을 제시합니다.

최적화 된 프로토콜은 림프구에 해당 작용과 미토콘드리아 호흡을 분석하는

이 프로토콜 격리, 식별 하 고 안정 된 상태 또는 염증 동안 쥐의 심근에 있는 면역 세포를 계량 하는 간단 하 고 효율적인 방법을 제공 합니다. 프로토콜은 cytometry에 의해 더 분석 될 수 있는 단일 세포 현 탁 액의 세대에 대 한 효소 및 기계적 소화를 결합 합니다.

절연 및 심장의 Extravascular 면역 세포의 식별

여기 선물이 leukemic 세포 백혈병 환자 골 수에서 격리 및 그들의 대사 상태 분석을 위한 프로토콜. 기본 백혈병 세포의 신진 대사 프로필의 평가 1 차 셀의 수요 특성을 더 나은 하는 데 도움이 수 그리고 더 맞춤된 의학까지 이어질 수 있습니다.

기본 백혈병 세포의 신진 대사 프로필의 평가

조혈 줄기 전구 세포 (HSPC) 혈액 형성 동안 그들의 신진 대사 가소성으로 인해 분화 상태로 정지 상태에서 전환. 여기에서는 HSPC의 미토콘드리아 호흡 및 당화 분석을 측정하기 위한 최적화된 방법을 제시합니다.

조혈 줄기 선조 세포 대사 분석

여기에 제시된 방법은 HSPC의 세포외 산성화 속도 (ECAR) 및 산소 소비 속도 (OCR)를 실시간으로 측정하기 위해 세포외 플럭스 분석기를 사용하여 비 부착성 마우스 조혈 줄기 및 원시 전구 세포 (HSPCs)에서 세포 생물 에너지를 평가하기위한 최적화 된 프로토콜을 요약합니다.

세포외 플럭스 분석기를 사용한 마우스 조혈 줄기 및 원시 전구 세포의 세포 생체 에너지 평가

여기에서 우리는 쥐 골수 세포를 표현형 조혈 줄기 및 전구 세포와 함께 지지하는 틈새 내피 및 중간엽 줄기 세포로 분리 및 염색하기 위한 간단한 프로토콜을 설명합니다. 내골 및 중앙 골수 영역에 위치한 세포를 풍부하게 하는 방법도 포함됩니다.

쥐 골수, 조혈 줄기 및 전구 세포, 기질 틈새 세포의 유세포 분석

체외 이식 모델을 사용하여, 저지방 쥐의 내장 백색 지방 조직의 앞부분 일부를 7일에서 10일간 배양하여, 고지방 식이 섭취 중 지방 조직 염증을 유도하고 연구할 수 있게 합니다.

고지방 식이와 유사한 지방 조직 염증을 위한 체외 마우스 모델

Toxoplasma gondii는 조직 문화 모델 했었 수있는 환경 스트레스에 대한 응답으로 낭종 형태로 변환됩니다. 이 동영상은 골수 파생 macrophages 뼈를 활성화하거나 fibroblast 세포 성장 매체 산도를 변경하여 낭종 벽 형성을 검토하기 위해 기술을 보여줍니다.

활성 골수 - 유래 Macrophages과 Bradyzoite Toxoplasma gondii 약관의 낭종의 벽 형성

배우세요 심근경색에서 대식세포 대사 플럭스 분석을 통해 면역세포 대사 변화가 심장 재형성에 미치는 영향을 이해하는 방법입니다. 이 기술은 생체 내 유전적 접근법과 정밀 세포 추출을 결합하여 신속한 대사 분석을 가능하게 합니다.

비장 및 심장 대식세포와 골수 단핵구의 생체 외 대사 플럭스 분석

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