두 번째 상부 대구치에서 나일론 결찰에 의해 유발된 진행성 치주염의 쥐 모델

우리 연구의 범위는 결찰 유발 치주염의 쥐 모델을 사용하는 치주염에 유리한 세포 및 분자 요인을 연구하는 것입니다.

최근 연구에 따르면 염증의 중요성이 확립되었습니다. 세균불균형과 전신 질환은 치주염 발병의 결정적인 요인입니다.

최근 치주학에 사용되는 기술에는 동물 모델이 포함되며 일부는 다양한 분자, 단백질체학 시퀀싱, 유세포 분석, 조직학 등이 포함됩니다.

현재의 실험적 과제는 전신 질환과 치주염 사이의 상호 작용을 이해하는 것과 관련이 있습니다.

우리는 결찰성 치주염의 쥐 모델을 사용하여 전염증성 사이토카인 A와 S가 임신 중 치주염 발병에 관여한다는 것을 입증합니다.

[해설자] 시작하려면 마취된 마우스를 작업대에 머리가 작업자를 향하도록 위쪽을 향하게 놓습니다. 긴장 없이 각 다리를 부드럽게 당기고 갑작스러운 비자발적 움직임을 방지하기 위해 미세 기공 테이프로 고정합니다. 체온을 유지하기 위해 담요나 거즈로 마우스를 덮으십시오. 교정용 고무줄의 한쪽 끝을 윗 앞니 주위에 놓고 다른 쪽 끝은 장력을 가하지 않고 윗쪽 홀더에 고정합니다. 그런 다음 하니치 주위에 두 번째 교정용 고무줄을 놓고 고무줄을 사용하여 하니치에 고정합니다. 이제 뺨 분리기를 삽입하고 혀를 한쪽으로 조심스럽게 움직여 가시성을 향상시킵니다. 가장 낮은 배율 대물렌즈를 사용하여 상악 어금니를 시각화하도록 현미경을 배치합니다. 일단 위치를 찾으면 배율을 높여 작업자의 편안함과 집중력을 최적화합니다. 이미지가 선명해지면 가장 큰 근위 어금니 M1, 다음 어금니 M2, 가장 작은 원위 어금니 M3을 식별합니다. 합찰 배치에는 6-0 나일론 봉합사를 사용하면 더 넓은 봉합사에 비해 기계적 손상이 적습니다. 조직 겸자를 사용하여 6-0 나일론 봉합사의 원위 끝을 잡고 M2 원위부의 구개 쪽에서 유두 기저부에 놓습니다. 치간 구개 공간의 기저부를 통해 가벼운 압력을 가하여 협측 표면 쪽으로 전진시킵니다. 봉합사가 교차하면 치간 공간을 통해 협측 쪽으로 당깁니다. 이제 협측에서 M2의 근심 표면에 있는 치간 영역의 기저부에 봉합사의 끝을 놓습니다. 부드럽게 밀어 치간 공간을 가로질러 협측 공간을 통해 구개로 다시 통과시킵니다. 6-0 나일론 봉합사를 부드럽게 당깁니다. M2 주위에 조정된 조직 겸자로 팁을 잡고 세 개의 간단한 매듭을 사용하여 봉합사를 고정합니다. 그런 다음 가는 가위로 봉합사를 자릅니다. 마우스를 풀려면 먼저 아래 앞니 주변의 고무줄을 제거한 다음 볼 분리기를 제거합니다. 그런 다음 윗 앞니 주변의 고무줄과 다리에서 미세 기공 테이프를 제거합니다. 이제 작업대에서 마우스를 제거하고 혀를 한쪽으로 유지하여 기도를 열어두고 막힘을 방지합니다. 마우스를 거즈나 천으로 싸서 앞면이 위로 향하게 놓습니다. 동물을 따뜻하게 유지하고 천이나 거즈로 덮고 완전히 깨어날 때까지 관찰하십시오. 마우스가 정상적으로 깜박일 수 있을 때까지 양쪽 눈에 히프로멜로스 한 방울을 바릅니다. 그런 다음 일반 케이지로 되돌립니다. 합자의 영속성을 확인하려면 마우스를 가져 가십시오. 머리와 몸통을 단단히 잡고 조직 겸자를 사용하여 입을 벌립니다. 램프 조명 아래에서 M2 주변의 6-0 나일론 봉합사를 관찰합니다. 조직학을 이용한 생물막 형성을 확인하기 위해 30일 후에 안락사된 동물로부터 상악을 채취합니다. 0.9% 염화나트륨 용액으로 조직을 세척하고 라벨이 부착된 미세 원심분리기 튜브에 넣습니다. 교반 하에서 2시간 동안 샘플을 4% 파라포름알데히드 용액에 고정시킵니다. 그런 다음 고정된 샘플을 수돗물로 2시간 동안 세척합니다. 다음으로, 20일 동안 pH 7.3에서 4% EDTA 20부피로 샘플을 탈회하고 4일마다 EDTA를 변경합니다. 그런 다음 샘플을 파라핀에 삽입합니다. M2 영역에서 5마이크로미터 절편을 잘라내고 헤마톡실린과 에오신으로 염색합니다. 광학 현미경으로 염색된 절편을 관찰하여 고랑 상피, 치은 및 치주 섬유, 높이 및 치조능 무결성의 변화를 설명합니다. 디지털 편집 프로그램을 사용하여 cemento 법랑질 접합부와 뼈 능선의 가장 높은 지점 사이의 거리를 결정하여 부착 손실을 측정합니다. 조직 분석 후 Mann-Whitney U 테스트를 사용하여 대조군 및 치주 치료군의 데이터를 분석합니다. 치주염은 대조군과 달리 30일까지 마우스의 조직 손실, 염증, 출혈 및 치주 주머니 형성을 유발합니다. 조직학적 분석은 치주낭의 존재, 섬유의 박리 및 상피의 정점 이동과 함께 PT 그룹에서 상당한 구조적 손상을 확인했습니다. 치은의 세포핵과 협측 및 구개 측의 뼈의 손실도 관찰되었습니다. 대조적으로, CTL 그룹은 건강한 조직학을 보였습니다. 정량적 분석 결과 PT 그룹에서 협측 손실이 약 209마이크로미터, 구개측 손실이 약 254마이크로미터로 유의하게 증가한 것으로 나타났습니다.