Name: Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids의 pH 의존성 가역적 자가 조립의 특성화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 학습하세요 Amyloid Beta 1-40 코팅된 금 콜로이드의 pH 의존성 가역적 자가 조립 특성화 방법을. SERS 분광법과 흡광 분석을 활용하여 알츠하이머병 관련 단백질 응집 동역학을 연구하는 기법입니다.

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1. aβ 1-40 코팅 금 나노 입자의 제조
<ol>
	<li>주사기 바늘을 사용하여 동결건조된Aβ 1-40(MW: 4.2kDa, 98% HPLC 순도) 1mg에 증류수 1mL 부피를 추가합니다. 용액을 와류 혼합기와 약 30초 동안 혼합하고 실온(RT, ~20°C)에서 용액에서 고체 입자가 관찰되지 않도록 합니다.<ol>
		<li>탈이온수 및 증류수(~18MΩ·cm)를 사용하여 모든 원액을 준비합니다.</li>
		<li>분자 흡광 ε계수가275 cm-1390 cm-1· 남-1.</li>
		<li>Aβ 1-40의 재고 용액을 -80 °C에서 보관하십시오. (Aβ 1-40의 상용 제품에 대한 재료 표 참조)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>데이터 수집 약 5분 전에 펩타이드 원액을 해동합니다. 15mL 원심분리 튜브에서 8μL 부피의 펩타이드 용액과 800μL의 금 콜로이드 입자를 혼합합니다. 4.2mL의 탈이온수 부피를 첨가한 다음 샘플을 10초 동안 와류로 가열합니다30,31,33,34.</li>
	<li>Aβ 1-40 펩타이드의 농도를 1.8 nmol로 고정하고 Aβ 1-40 펩타이드의 비율 범위를 지정합니다. 금 콜로이드의 수는 ~500:1에서 ~2000:1 사이였습니다25.</li>
</ol>
2. 반복적인 pH 변화 및 해당 SPR 대역 이동 모니터링
<ol>
	<li>UV-Vis-NIR(Ultraviolet-Visible-Near Infrared) 분광 광도계의 온도 제어 장치를 사용하여 용액 온도를 결정된 값(예: 25°C)으로 설정합니다.</li>
	<li>s의 초기 pH를 모니터링amppH 측정기를 사용하여 용액을 선택하고 pH 7보다 약간 낮게 설정합니다. 400nm에서 1000nm 사이의 범위에서 흡수 스펙트럼을 수집합니다.</li>
	<li>10μL 부피의 0.1M HCl을 첨가하여 샘플의 pH를 ~pH 4(즉, pH 4.0 ± 0.3)로 변경하고 400nm와 1000nm 사이의 흡수 스펙트럼을 수집합니다.</li>
	<li>10μL 부피의 0.1M NaOH를 첨가하여 샘플의 pH를 ~pH 10(즉, pH 10 ± 0.3)으로 변경하고 400nm와 1000nm 사이의 흡수 스펙트럼을 수집합니다.</li>
	<li>HCl과 NaOH를 10회 사용하여 pH 4와 pH 10 사이의 pH를 변경하고 25 ± 0.2 °C29,30에서 지속적으로 흡수 스펙트럼을 수집합니다. 참고: 모든 샘플 용액에서 SPR 대역 피크의 광학 밀도는 약 0.2로 유지되었습니다. 용액의 잔류 완충 용액으로 인한 완충 효과가 예상됩니다. 따라서, 최종 pH 값은 평형이 확인된 후에 결정되었다. pH 값은 ±0.005 pH의 정확도를 가진 마이크로 pH 전극을 사용하여 샘플 큐벳 셀에서 직접 측정되었습니다.</li>
	<li>흡광도의 함수로 파장의 ASCII(American Standard Code for Information Interchange) 데이터 세트를 얻습니다. Peak Fit 프로그램을 사용하여 대역 피크의 평균 위치를 추출합니다.<ol>
		<li>Plot 함수를 사용하여 광학 밀도를 파장(nm)의 함수로 보도록 데이터 세트를 플로팅합니다.</li>
		<li>플로팅된 데이터에서 초기 피크 파장 λ1, λ2, λ3 의 대략적인 위치를 선택하여 표시하고 RUN 함수를 사용하여 데이터를 피팅합니다.</li>
		<li>각 밴드의 면적(A,i)과 함께 각 피크(λ i)의 중심 피크(λi)를 포함하는 그래프를 구합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>추출된 피크 위치와 영역을 스프레드시트 프로그램으로 내보내고 주어진 pH에서 평균 피크 위치를 계산합니다.<ol>
		<li>각 피크 중심(λi)의 가중 계수 ai를 밴드의 면적(Ai)을 전체 밴드의 총 면적과 다음과 같이 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq01.jpg" style="margin: auto;">비교함으로써 결정한다.</li>
		<li>Eqn. (1)을 사용하여 평균 피크 위치( <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> pH)를 추출합니다. 
		<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq03.jpg" style="margin: auto;">(1)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>다음 프로세스를 사용하여 가역성 플롯을 생성합니다.<ol>
		<li>평균 피크 위치를 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">각 "작동" 번호의 함수로 n과 n으로 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> 표로 만듭니다. ~pH 7에서 산을 추가하기 전에 샘플에 대해 작업 번호 n을 1로 만듭니다. 매번 작업 횟수를 1씩 늘리고 pH를 HCl로 ~pH4로 변경하거나 pH를 NaOH로 ~pH 10으로 변경합니다. n을 산성 조건(즉, ~pH 4)에서 짝수로, 홀수를 염기성 조건(즉, pH 10)으로 만듭니다.</li>
		<li>공식30을 사용하여 각 n, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (n) = λ(n)에서 피크 위치를 분석합니다. 
		<img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq04.jpg" style="margin: auto;">(2) 참고: n = 1에서 초기 평균 피크 위치를 A로 나타냅니다. 파라미터 B와 C를 n 종속 피크 위치 이동으로 표현합니다. 매개변수 D를 반복의 감쇠 계수 E의 진폭으로 만듭니다. sine 함수를 사용하여 피크 위치의 요동을 n의 함수로 표시합니다.</li>
		<li>(x, y)의 데이터 세트를 Origin 소프트웨어로 전송하고 플롯합니다.</li>
		<li>Nonlinear Curve Fitting Function Of Analysis에서 Eqn. (2)에 주어진 사용자 정의 함수를 형성합니다. 초기 A, B, C, D 및 E 값을 입력하고 RUN을 클릭하여 맞춤을 완료합니다.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>TEM 이미징<ol>
		<li>Formvar 코팅된 구리 그리드를 사용하여 Aβ 1-40 코팅된 20nm 금 콜로이드의 TEM 샘플을 만듭니다. 80kV에서 작동하는 TEM으로 샘플을 검사합니다.</li>
		<li>모델 XR-40 4메가픽셀 CCD 디지털 카메라(AMT)에서 28,000x 또는 71,000x의 공칭 배율로 이미지를 수집합니다. 각 작업 횟수 n = 1(~pH 7), n = 2, 4, 6, 8 및 10(pH 4) 및 n = 3, 5, 7 및 9(pH 10)에서 Aβ 1-40 코팅된 20nm 금에 대한 TEM 이미지를 수집합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Raman 이미징 및 가역적 응집체 조사
<ol>
	<li>작업 번호 n에서 각 샘플에 대해 운모 디스크(직경 1cm)에 100μL의 용액을 놓습니다. 측정하기 전에 밤새 샘플을 건조시키십시오.</li>
	<li>각 작업 번호 n에서 백색광 이미지를 수집합니다. 각 작업 번호 n에 대해 pH가 ~pH 4와 ~pH 10 사이에서 지속적으로 변경되었으므로 운모 디스크에 별도의 샘플을 준비합니다(그림 3).</li>
	<li>~200cm-1과 ~2,800cm-1 사이의 영역에 대해 100 ±× 100픽셀 스펙트럼의 통합 시간으로 스펙트럼 500ms/스펙트럼의 통합 시간으로 구성된 그리드에서 0.5 0.05mW 전력에서 0.5 0.05mW 전력에서 λ = 633nm 파장의 레이저를 사용하여 각 작업 번호 n에서 라만 이미지를 수집합니다(그림 4).</li>
	<li>n의 함수로 정렬된 각 n에 대한 대표 스펙트럼을 플롯하고Aβ 1-40 코팅 20nm 금에 대해 n의 함수로 3차원 SERS 스펙트럼을 구성합니다(그림 5A). 특정 pH 조건(즉, ~pH 4 및 ~pH 10)과 관련된 특정 모드를 추출하기 위해 3차원 SERS 스펙트럼의 평면도를 윤곽 맵(그림 5B)으로 활용합니다. n개의짝수 또는 n개의홀수에서만 향상된 스펙트럼 특징을 추출합니다.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아밀로이드 베타 펩타이드 1-40 (A&beta; 1&ndash; 40 펩타이드)</td><td>r-펩타이드 (Bogart, GA, USA)</td><td>A-1156-2</td><td></td></tr><tr><td>CCD 디지털 카메라</td><td>AMT</td><td>XR-40 4-메가픽셀 CCD&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q- 물 시스템</td><td>Millipore Sigma (Burlington, MA, USA)</td>에서 증류된 탈이온수 <td>Milli-Q IQ 7000</td><td></td></tr><tr><td>Freezer -86 oC</td><td>Thermo Scientific</td><td>Revco Chilly Willy&nbsp; RLE 시리즈 유닛 ID 187004 빌드 번호 40.04</td><td></td></tr><tr><td>골드 콜로이드(10nm)</td><td>Ted Pella, Inc.(미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15703-20</td><td></td></tr><tr><td>골드 콜로이드(100nm)</td><td>Ted Pella, Inc.(미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15711-22</td><td></td></tr><tr><td>골드 콜로이드(15nm)</td><td>Ted Pella, Inc.(미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15704-20</td><td></td></tr><tr><td>골드 콜로이드(20nm)</td><td>Ted Pella, Inc.(미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15705-20</td><td></td></tr><tr><td>금 콜로이드 (30 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15706-21</td><td></td></tr><tr><td>금 콜로이드 (40 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15707-21</td><td></td></tr><tr><td>금 콜로이드 (50 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15708-21</td><td></td></tr><tr><td>금 콜로이드(60 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (미국 캘리포니아주 레딩)</td><td>15709-22</td><td></td></tr><tr><td>골드 콜로이드 (80 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, USA)</td><td>15710-22</td><td></td></tr><tr><td>최고 등급 V1AFM 운모 디스크 10 mm</td><td>Ted Pella Inc.</td><td>#50</td><td></td></tr><tr><td>염산 표준 용액, 1.0 N</td><td>플루카</td><td>로트# SHBB4705V&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 318949-2L</td><td></td></tr><tr><td>매크로 석영 quvette Light Path 10 mm</td><td>Fire Fly Science&nbsp;</td><td>Type1-MC-Path10mm</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 pH 전극</td><td>HORIBA</td><td>모델 9618S (MFG 번호 9Y8E0050)</td><td></td></tr><tr><td>Peak Fit 프로그램</td><td>Origin (Northampton, MA, USA)</td><td>OriginPro2018b (64-bit) b9.5.5.409 (Academic)</td><td></td></tr><tr><td>pH 4.00 버퍼 용액&nbsp;</td><td>VWR</td><td>카탈로그 번호 34170-127</td><td></td></tr><tr><td>pH 7.00 버퍼 용액&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>SB107-4 Lot 191041</td><td></td></tr><tr><td>pH meter</td><td>HORIBA</td><td>모델 F-72G (MFG No. B27M0017)</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 팁 &nbsp; 맥시 팁 1&ndash; 5mL</td><td>피셔&nbsp; &nbsp;</td><td>02-707-467</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 10 mL</td><td>피셔</td><td>02-717-135</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 1000 mL</td><td>피셔</td><td>02-717-156</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 1&ndash; 200 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-143</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Fisher 브랜드 엘리트 0.5&ndash; 5 mL</td><td>Fisher</td><td>QU05317</td><td></td></tr><tr><td>Pipetter Fisher 브랜드 엘리트 100&ndash; 1000 mL</td><td>피셔</td><td>QU01672</td><td></td></tr><tr><td>피펫터 피셔 브랜드 엘리트 10&ndash; 100 mL</td><td>피셔</td><td>MU10985</td><td></td></tr><tr><td>피펫터 피셔 브랜드 엘리트 1&ndash; 10 mL</td><td>Fisher</td><td>MU08178</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨 용액 1.0 M</td><td>플루카</td><td>로트#05096BPV&nbsp; &nbsp; 319511-2L</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>FEI Co</td><td>Morgagni 모델 268&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>TempAssure PCR 튜브, 플랫 캡, 자연스러운&nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td></td><td>폴리프로필렌. 젖빛 플랫 캡이 부착된 0.2mL 개별 박막 튜브</td></tr>, <tr><td>UV-Vis-NIR 분광 광도계</td><td>Varian</td><td>CARY 5000 UV1106M074</td><td></td></tr><tr><td>WI Tec alpha300R 컨포칼 라만 현미경</td><td>WITec-Oxford Instrument</td><td>XMB3000-3001</td><td></td></tr></tbody></table>

amyloid beta 1-40-coated gold colloids의 ph 의존성 가역적 자가 조립의 특성화

Characterization of pH-Dependent Reversible Self-Assembly of Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids

금 나노 콜로이드 입자 표면에 Aβ 1-40을 부착하면 용액이 더 산성 (pH 4) 35로 만들어졌을 때 530nm 흡수 최대 주위의 SPR 대역이 ~ 650nm 피크 위치로 크게 적색 편이되었습니다. TEM 이미지와 함께, pH 4에서 관찰된 분광 특징이 금 표면30 위에 흡착된 주변의 펼쳐진 Aβ 1-40 단량체와 그럴듯하게 펼쳐진 형태 및 네트워킹을 가진 금 콜로이드 응집체의 형성과 일치한다는 것을 확인했습니다. 우리는 Aβ 1-40 단량체가 염기성(pH 10) 조건에서 접힌 형태로 역전되어 준가역적 방식으로 응집체가 변형되는 것을 관찰했습니다. 이 준가역적 과정은 더 짧은 파장과 더 긴 파장 사이에서 이동하는 평균 대역 피크(<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">((n))의 교대와 염기(pH = 10)와 산성(pH = 4) 조건 사이의 TEM 이미지에서 분산된 형태와 응집된 형태에서 분명했습니다. Aβ 1-40 단량체의 일부는 용액이 염기성 조건36으로 되돌아간 후에도 풀린 상태로 남아 있는 것이 이전에 관찰되었습니다. 동영상 1은Aβ 1-40 및 20nm 베어 골드 콜로이드의 pH 의존적 색상 변화를 보여줍니다.
이에 비해 20nm 베어 골드 콜로이드의 pH hop 조사가 수행되었습니다(그림 5C 및 D). pH 변화 작업이 진행됨에 따라 SPR 밴드 쇼프트, TEM 이미지 및 백색광 이미지에서 금 콜로이드의 클러스터링 성장을 보여주었습니다. 매우 흥미롭게도, n홀수와 n짝수에 따라 여러 SERS 스펙트럼 라인이 있었습니다. 예를 들어, n의 짝수(pH ~4)에서 Aun(n = 5, 6, 12, 16, 20, 58)37 또는 Au-Cl-리간드(38)와 관련된 모드로 할당된 275cm-1의 선이 집중적으로 관찰되었습니다. 반면에,n개의 짝수에 대해서는, 1008 cm-1 C-N str에서 39 가 관찰되었고, 1291 cm-1 에서 CH2 wag39, CH2 변형40 이 광범위하게 관찰되었다.
백색광 이미징에서 관찰된 명확한 pH 의존성 및 가역적 응집 형태와 대조적으로, n개의홀수와 n개의 짝수 사이의 SERS 스펙트럼의 스펙트럼 특징에는 상대적으로 미묘한 차이가 있었습니다. 첫 번째 근사치로, 250cm-1과 1750cm-1 사이의 영역에서의 스펙트럼 라인 밀도는 n짝수보다 n 홀수에 대해 더 높았습니다. n홀수에 대한 지문 영역, 1250 cm-1 및 1750 cm-1 (아미드 I, II 및 III 대역)의 스펙트럼 라인은 덜 해상도 된 스펙트럼 특징을 보여 주었으며, 이는 스펙트럼 밀도의 확대 또는 증가를 의미합니다. 그림 6에서 그림 5B(그림 6B)에 제공된 등고선 맵은 761cm-1(빨간색) 및 1395cm-1(파란색)의 SERS 신호로 구성되어 각각 n개의 홀수 및 n개의 짝수(그림 6C)에서 강조를 나타냅니다. n개의홀수 및 n개의 짝수에 대한 대표적인 SERS 스펙트럼으로, n=7(빨간색) 및 n=4(파란색)의 SERS 스펙트럼이 상단에 표시되어 있습니다(그림 6A). Aβ 1-40 코팅 20nm 금에 대한 SPR 대역 이동에 대한 대응을 보여주기 위해 그림 3의 대역 이동 플롯이 측면에 표시됩니다(그림 6D).
관찰된 SERS 스펙트럼의 전체 할당에 대한 예비 데이터가 있지만, 여기서는 몇 가지 주목할 만한 라만 이동 특징에 주목합니다. n홀수에서 강화 된 스펙트럼 라인 및 (그럴듯한 할당)은 주로 1000cm-1 미만의 영역에서 발생합니다 : 394 cm-1 (Trp) 41,42,43, 761 cm-1 (His, Ala) 39,44,45,46,47, 875 cm-1 (인돌 NH 변위, Met의 C-C 스트레칭) 39, 974 cm-1 (Glu, C-COO- Asp의 스트레칭, 구연산염과 관련된 모드) 39,48,49. n에서 강화 된 라만 이동은 지문 영역 (Amide I, II 및 III)에서 중요한 분광 기능을 보여주었습니다 : 1166 cm-1 (Tyr의 N-H + 변형) 39,41, 1227 cm-1 (Ala-Pro-Gly, Amide III) 39,50,51, 1395 cm-1 (COO- 대칭 스트레칭 또는 CH2- CH3- Glu의 가위) 39 , 48, 1585 cm-1 (Phe의 고리 CC 스트레칭, 카르복실레이트 -Au의 비대칭 스트레칭, 구연산염의 COO- 스트레칭, 벤젠 링의 변형) 39,41,45,46,47,49,52, 1592 cm-1 (Phe, Tyr, C = C 스트레칭, Phe의 고리 CC 스트레칭, 벤젠 링 스트레칭 및 COO- Phe 및 Tyr에서 스트레칭, OH) 39,41,48,50,51 및 1628 cm-1 (분자간 β-시트 구조53, C=O 및 병렬 β-시트 유형 구조에서 유래한 단백질 백본의 결합된 CN/NH 진동 모드에 고유한 아미드 I 서브 피크, 응집된 Aβ 54의 축적, 무작위 코일, β-턴, β 머리핀48. n,홀수 또는 n,짝수에 대해 나타나는 시퀀스는 그림 7에 나와 있습니다. 전반적으로,Aβ 1-40의 가역적 응집 또는 풀린 형태에 해당하는 n에 대해서도 벤젠 고리를 포함하는 Phe/Tyr, COO-의 대칭 연신, Glu의 CH2-CH 3- 가위화 모드, Tyr의 -NH+ 변형이 펩타이드의 구조적 변화에 유의하게 관여했습니다. 펩타이드가 n 홀수에서 두드러진 모드에 해당하는 접힌 형태를 채택했을 때 관찰된 응집체를 분해하는 동안 Glu, Asp, Met, His 및 Ala가 관여하는 것으로 나타났습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig01.jpg"> 
그림 1: pH 의존적 흡광도 및 형태. Aβ 1-40 코팅된 금 나노 입자(20nm)에 대한 pH 4(A) 및 pH 10(B)의 흡수 스펙트럼과 해당 TEM 이미지, 응집/분산 입자 스케치 및 바이알 내 용액 사진이 표시됩니다. A는 산성 조건에서 Aβ 1-40 단량체의 풀린 형태이고 B는 염기성 조건에서 접힌 형태입니다. 각 형태 및 응집/분산 형태에서 Aβ 1-40 단량체의 다이어그램이 TEM 이미지 옆에 표시되어 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig02.jpg"> 
그림 2: 나노 크기에 따른 자체 조립 가역성. 테스트된 모든 크기의 금 콜로이드 입자에 대한 작동 번호 n의 함수로 SPR 대역 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">의 평균 피크 위치의 이동. 그림 1 에 표시된 응집체의 대략적인 pH 값과 해당 단계도 제공됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig03v2.jpg"> 
그림 3: <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq05.jpg" style="margin: auto;"> 각 작업 번호에서의 TEM/백색광 이미지. <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> 작업 번호 n의 함수로 Aβ 1-40 코팅 20nm 금(닫힌 원) 및 20nm 금 콜로이드(열린 원)에 대해 함께 표시되었으며 Aβ 1-40 코팅 20nm 금(A 및 B) 및 20nm 금 콜로이드(C 및 D)를 참조하십시오. 검은색 글꼴은 pH 7, 파란색 글꼴은 pH 4, 빨간색 글꼴은 pH 10을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig04.jpg"> 
그림 4: 대표적인 백색광 및 라만 이미지. (A) n = 2 및 (B) n = 3에 대한 백색광 이미지, 라만 이미지 및 SERS 스펙트럼; i) 넓은 시야의 백색광 이미지, ii) 라만 이미지가 수집된 영역에서의 백색광 이미지(i)에서 빨간색 사각형으로 표시됨), iii) 두 성분이 결합된 라만 이미지, iv) 성분 1 및 그 v) SERS 스펙트럼 iv), vi) 성분 2의 라만 이미지, 및 vii) VI)의 SERS 스펙트럼). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig05.jpg"> 
그림 5: n개의홀수, n개의짝수 및 n모두에 대한 SERS 스펙트럼의 등고선 맵.(A) 250cm-1 및 1750cm-1 영역에서Aβ 1-40 코팅된 20nm 금에 대한 n의 함수로 표시되는 SERS 스펙트럼의 3차원 맵과 상단의 (B)에 표시된 등고선 맵. (C) 250cm-1 및 1750cm-1 영역에서 SERS 스펙트럼의 3차원 지도는 20nm 금에 대한 n의 함수로 상단에 (D)에 표시된 등고선 맵과 함께 제공됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig06v2.jpg"> 
그림 6: SERS 스펙트럼의 등고선 맵. n(1-10)의 함수로 나타낸 SERS 스펙트럼의 등고선 맵. (A) 1395cm-1(파란색) 및 761cm-1(빨간색)에서의 흡광도. (B-D) 하단 패널은 SERS 스펙트럼을 보여주고 오른쪽 패널은 각 n에서 SERS 신호의 신호 강도 변화 진폭을 보여줍니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig06largev2.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig07v3.jpg"> 
그림 7: Aβ1-40의 주목할 만한 서열. n홀수 (접힌 형태의 형성에 해당)에서 상당한 관여를 갖도록 할당된 서열은 아래쪽 빨간색 화살표로 표시되고, n짝수 (펼쳐진 형태의 형성에 해당)에서 상당한 관여를 갖도록 할당된 시퀀스는 파란색 화살표로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig07largev3.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
동영상 1: Aβ1-40 및 20nm 베어 골드 콜로이드의 pH 의존적 색상 변화. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/Movie%20Abeta-Gold%20Color%20Change.wmv" target="_blank">이 비디오를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids의 pH 의존성 가역적 자가 조립의 특성화

The characterization of A&#946;1-40 coated over the nano-gold colloidal particle surfaces was conducted using surface plasmon resonance (SPR) spectroscopy ...

characterization-ph-dependent-reversible-self-assembly-amyloid-beta-1

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

사진 유발 가교 수정되지 않은 단백질 (PICUP)의 것은​​ metastable 단백질 혼합물의 올리고머 크기 분포의 특성을 허용합니다. 우리는 세 대표 amyloidogenic 펩티드 40 PICUP의 응용 프로그램을 보여줍니다 - 그리고 아밀로이드 β 단백질 및 칼시토닌의 42 잔여물 형태 및 제어 펩타이드 성장 호르몬 방출 인자.

사진 유발 가교 수정되지 않은 단백질 (PICUP) Amyloidogenic 펩티드에 적용

Aptamers는가 선택한 짧은 ribo-/deoxyribo-oligonucleotides...

아밀로이드 β 단백질, 알츠하이머 병의 원인이되는 에이전트에 대한 Aptamers의 선택

APP 세포 도메인 (AICD)의 대규모 정화하기위한 방법이 설명되어 있습니다. 우리는 또한 유도하는 방법을...

아밀로이드 전구체 단백질 세포 내 도메인의 정화 및 집계

단백질은 네이티브 구조를 채택하거나 불용성 아밀로이드로 잘못 접힐 수 있습니다. 잘못 접히는 경로를 선호하는 조건은 다양한 유형의 아밀로이드 섬유의 형성으로 이어집니다. 여기에 설명된 방법을 사용하면 in vitro에서 네이티브 단백질을 아밀로이드로 빠르게 전환할 수 있습니다.

천연 단백질에서 아밀로이드의 빠른 생성<em&gt; 체외</em

여기에서 우리는 올리고머 형성이 가능한 고순도 아밀로이드 베타 42(Aβ42) 및 아밀로이드 베타 40(Aβ40) 펩타이드를 생성하는 맞춤형 HPLC 정제 프로토콜을 보고합니다. 아밀로이드 베타는 알츠하이머병과 관련된 응집이 잘 되는 소수성 펩타이드입니다. 펩타이드의 아밀로이드 생성 특성은 정제를 어렵게 만듭니다.

맞춤형 HPLC 정화 프로토콜 즉, 올리고머 형성 할 수있는 수율 고순도 아밀로이드 베타 42과 아밀로이드 베타 펩티드 (40),

이 프로토콜 분석 blotting 점이 상대적인 양의 Aβ 올리고 머를 평가 하는 합성 펩 티 드에 생체 외에서 에서 Aβ 올리고 준비 하는 방법을 설명 합니다.

A11-긍정적인 β 아 밀 로이드 올리고 머 준비 및 평가 분석 Blotting 도트를 사용 하 여

1, 2-dithiolane의 합성에 대 한 프로토콜 펩 티 드와 펩 티 드에서 자기 조립 결과 supramolecular 구조의 특성 수정.

합성 및 특성 1, 2-Dithiolane의 수정 자가 조립 펩 티 드

여기에 제시 된 분석 섬유 소 혈전 구조에 베타-아 밀 로이드의 효과 개별적으로 또는 조합에서 사용할 수 있는 두 가지 방법이 있습니다. 생체 외에서 섬유 소 혈전, 만드는 뒤에 병 탁도 및 스캐닝 전자 현미경 검사 법 방법 포함 된 프로토콜이입니다.

분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석

질량 분광법 기반 프로테오믹 분석을 통한 이 생화학적 정제 방법은 아밀로이드 피브릴 코어의 강력한 특성화를 용이하게 하며, 이는 알츠하이머병 예방을 위한 표적의 식별을 가속화할 수 있다.

뇌에서 아밀로이드 피브릴 코어의 생화학 적 정제 및 프로테오믹 특성화

아밀로이드 섬유는 수많은 단백질에 의해 형성되며, 그 결과 섬유들은 '교차 β-시트' 구조를 공유합니다. 여기서는 아밀로이드 섬유 샘플이 X선 섬유 회절을 위해 어떻게 준비되는지, 그리고 그 패턴이 어떻게 분석될 수 있는지 설명합니다.

아밀로이드와 교차 베타 구조

학습하세요 Amyloid Beta 1-40 코팅된 금 콜로이드의 pH 의존성 가역적 자가 조립 특성화 방법을. SERS 분광법과 흡광 분석을 활용하여 알츠하이머병 관련 단백질 응집 동역학을 연구하는 기법입니다.

Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids의 pH 의존성 가역적 자가 조립의 특성화

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