Isolation and Identification of Bacterial Sstrain from Skin of Terrestrial Amphibians(육상 양서류의 피부에서 박테리아 균주의 분리 및 식별)

이 연구는 야생 육상 양서류로부터 피부 미생물군을 수집하고 보관 및 취급 중에 미생물 무결성을 보장하기 위한 효율적인 프로토콜을 개발하는 것을 목표로 했습니다.

주요 과제에는 샘플 오염 방지, 보관 중 미생물 생존력 유지, 양서류 피부 미생물군 다양성을 완전히 평가하기 위한 느린 성장 배양이 포함됩니다.

글리세롤 강화 식염수는 보관 및 취급 중에 양서류 피부 미생물군의 무결성을 보존하고, 일관된 박테리아 배양을 유지하고, 생태 및 생명공학 연구를 위한 미생물 보존 전략을 개선한다는 것이 확인되었습니다.

이 프로토콜은 표준화된 샘플링 방법의 부족을 해결하고, 배양 가능한 양서류 피부 박테리아를 보존 및 처리하며, 지역사회 무결성을 보장합니다.

[해설자] 시작하려면 섭씨 121도에서 134도에서 15분에서 30분 동안 고압멸균하여 배지를 멸균합니다. 고압멸균 후 한천 배지를 섭씨 약 45-50도까지 식히십시오. 이전에 멸균된 층류 후드 아래에서 냉각된 배지를 멸균 페트리 접시에 붓습니다. 한천이 굳으면 페트리 접시에 배지 유형과 준비 날짜를 표시하십시오. 현장에서 얻은 샘플을 튜브를 쥐어짜면서 면봉을 튜브 벽에 대고 밀고 면봉을 시계 방향으로 10회, 시계 반대 방향으로 10회 완전히 돌려 용액과 혼합합니다. 처리하기 전에 미생물 샘플을 완전히 혼합하십시오. 10에서 -1의 거듭제곱에서 10의 거듭제곱에서 -6의 거듭제곱 범위의 식염수로 피부 샘플의 연속 희석을 준비합니다. 100마이크로리터의 희석되지 않은 샘플을 접종하고 준비된 한천 플레이트에 연속 희석합니다. 멸균 L자형 루프를 사용하여 한천 배지 표면을 가로질러 샘플을 줄무늬로 만들어 과도한 압력을 가하지 않고 균일한 분포를 보장합니다. 접종된 플레이트를 뒤집어 섭씨 20-25도로 설정된 인큐베이터에 3-5일 동안 넣어 양서류 피부에서 중온성 및 향정신성 박테리아의 성장을 지원합니다. 배양 후, 추가 분석을 위해 뚜렷한 형태를 가진 박테리아 콜로니를 선택합니다. 콜로니가 잘 분리되어 있고 색상, 크기, 모양, 가장자리, 표면 또는 질감의 변화와 같은 다양한 모양을 나타내는지 확인하십시오. 선택된 콜로니를 계대배양하려면 무균 조건에서 접종 루프를 사용하여 원래의 한천 플레이트에서 신선한 한천 플레이트로 잘 분리된 콜로니를 옮깁니다. 군집을 줄무늬로 줄지어 격리하세요. 그런 다음 적절하게 배양합니다. 현장 환경에서 멸균 도구를 사용하는 speleomantes italicus 개인의 조정된 샘플링 절차가 여기에 나와 있습니다. 샘플링은 양서류에 가해지는 스트레스를 최소화하고 취급 중 정밀도를 보장하기 위해 멸균 장갑과 면봉을 사용하여 두 명의 작업자가 수행했습니다. 면봉은 실험실로 운송하는 동안 미생물 무결성을 보존하기 위해 20% 글리세롤이 함유된 식염수로 즉시 옮겨졌습니다. 글리세롤 첨가 유무에 관계없이 식염수에 보관된 미생물 군집 밀도의 비교가 여기에 나와 있습니다. 글리세롤이 없는 식염수 저장의 박테리아 부하는 대조군 및 글리세롤이 있는 식염수보다 유의하게 낮았습니다. 글리세롤과 함께 식염수에 저장된 미생물 군집은 대조군과 유사한 박테리아 부하를 보여 미생물 무결성의 보존을 나타냅니다. 미생물 군집의 최상의 보존은 섭씨 4도에 저장된 글리세롤이 있는 식염수에서 관찰되었으며, 시간이 지남에 따라 가장 안정적인 박테리아 부하를 보여주었습니다. 실온에서 식염수에만 보관하면 박테리아 성장이 가장 높았으며, 이는 미생물 오염 또는 특정 박테리아 그룹의 선택적 촉진을 나타냅니다. 섭씨 영하 20도에서 동결하면 박테리아 부하가 감소하여 저온이 미생물 생존에 부정적인 영향을 미쳤음을 시사합니다.