Name: 포도당 유사체, 6-(N-(7-니트로벤츠-2-옥사-1,3-디아졸-4-일)아미노)-6-데옥시글루코스의 흡수 측정, 온전한 쥐 신경 망막에서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 배우세요 생체외 쥐 신경 망막에서 형광 포도당 유사체 6-NBDG를 이용한 포도당 흡수 측정 방법을. 이 기술은 노화 및 신경퇴행성 질환 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 집게</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>망막 박리에 사용</td></tr><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리기 튜브</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8" needle</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>박리 중 각막을 뚫는 데 사용</td></tr><tr><td>5 mL 튜브</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 튜브</td><td>Avantor by VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>형광 gucose 아날로그</td></tr><tr><td>96 웰 플레이트 검은 색, 투명한 바닥</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>마취 숯 필터 캐니스터</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>GLUT1 억제를 위해.</td></tr><tr><td>4 &deg에 분리기; C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>압축 가스(5% 이산화탄소, 95% 산소)</td><td>Airgas</td><td>UN3156</td><td>마취에 사용</td></tr><tr><td>곡선 집게</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-5137</td><td>망막 박리에 사용</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>에탄올 다음으로 샘플</td></tr> <tr><td>사이의 초음파 발생기를 청소하는 데 사용됩니다.해부 현미경</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>망막 박리에 사용</td></tr><tr><td>에탄올 200 증거</td><td>Decon laboratories</td><td>2701</td><td>샘플 사이의 초음파 발생기를 청소하는 데 사용</td></tr><tr><td>폼 플로팅 튜브 랙</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>수조 단계에서 배양 중 튜브용</td></tr><tr><td>일반 가위</td><td>Roboz 수술 기구</td><td>RS-680</td><td>망막에 사용 해부</td></tr><tr><td>이소플루란 250 mL 병</td><td>Piramal 중환자 치료</td><td>NDC &nbsp; 6679401725</td><td>마취</td></tr><tr><td>Isoflurane 장비</td><td>Vetequip VWR</td><td>89012-492</td><td>판매 안락사 전에 마취에 사용</td></tr><tr><td>김 물티슈</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 플레이트 리더</td><td>분자 장치</td><td>SpectraMax M2 마이크로 플레이트 리더</td><td>샘플을 읽는 데 사용</td></tr><tr><td>Neurobasal- A 매체</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>노즈 콘 (낮음 프로필 마취 마스크)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>무세테시아 전달에 사용</td></tr><tr><td>해부 현미경 Olympus</td><td></td><td>DF plapo 1x pf</td><td>망막 해부에 사용</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>망막 해부</td></tr><tr><td>시 사용 피어스 분석 시약</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 P20</td><td>Olympus 플라스틱</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>피펫맨 피펫 P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M, F144059M</td><td></td></tr><tr><td>컴퓨터의 SoftMax Pro 소프트웨어</td><td>분자 장치</td><td>SoftMax Pro 7 소프트웨어</td><td>샘플을 읽는 데 사용되는</td></tr><tr><td>소프트웨어 Sonic dismembrator</td><td>Thermo Fisher 과학적</td><td>FB50110</td><td>Sonicate 샘플 (망막)</td></tr> <tr><td>이송 피펫</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>한 튜브에서 다른 튜브로 망막을 전송하는 데 사용</td></tr><tr><td>Vannas 스프링 가위</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>망막 해부에 사용</td></tr><tr><td>수조는 37 &deg로 설정; C</td><td>N/A</td><td>N/A 배</td><td>양에 사용</td></tr></tbody></table>

포도당 유사체, 6-(n-(7-니트로벤츠-2-옥사-1,3-디아졸-4-일)아미노)-6-데옥시글루코스의 흡수 측정, 온전한 쥐 신경 망막에서

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

그림 4는 서로 다른 기간 동안 6-NBDG로 배양된 WT 마우스 망막의 대표적인 포도당 형광 측정을 보여줍니다. 30분 배양 후 6-NBDG 수준은 평균 336 ± 27.91 AU인 반면, 60분 후 6-NBDG 수준은 평균 616.3 ± 8.38 AU로 증가했습니다. 30분의 추가 배양으로 6-NBDG(506.4 ± 5.3 AU) 수준이 감소했습니다. 60분에서 결과의 변동성은 최소였으므로 6-NBDG로 망막을 배양하기 위한 최적의 시간으로 선택되었습니다. 단위는 임의적이며 이러한 결과는 총 단백질로 정규화되지 않았습니다.
그림 5는 6-NBDG 및 GLUT1 억제제 BAY-876(100μM 최종 농도)과 함께 배양된 WT 마우스 망막의 포도당 형광 측정을 보여줍니다. 6-NBDG 흡수가 24% 감소하는 것이 관찰되었는데, 이는 신경쥐 망막에서 6-NBDG 흡수의 GLU...

포도당 유사체, 6-(N-(7-니트로벤츠-2-옥사-1,3-디아졸-4-일)아미노)-6-데옥시글루코스의 흡수 측정, 온전한 쥐 신경 망막에서

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

망막 뉴런 사이의 간격 접합 추적 커플링의 범위를 결정하는 쉽고 편리한 방법을 설명합니다. 이 기술 하나는 서로 다른 조명 조건과 낮과 밤의 다른 시간대에있는 그대로 망막에있는 뉴런 사이의 전기 시냅스의 기능을 조사 수 있습니다.

잘라내기 -로드 : 망막 뉴런 사이 간격 접합 추적 커플링의 범위를 검토​​를위한 유용한 도구

이 비디오에서는 적출된 쥐 장기에서 세포외 포도당 아날로그 고갈을 측정하는 생체 외 기술을 보여줍니다. 그것은 세포가 흡수하는 형광 표지된 디옥시글루코스(deoxyglucose)를 포함하는 용액에서 마우스 조직을 배양하는 것을 포함합니다. 포도당 아날로그 흡수는 배양된 배지의 형광을 측정하여 간접적으로 결정할 수 있습니다.

세포 외 형광 포도당 아날로그 고갈 측정: 생체 외 마우스 장기의 포도당 흡수를 평가하기 위한 대리 측정 기법

이 비디오는 쥐의 뇌에서 채취한 시냅토솜의 도파민 흡수 평가를 보여줍니다. 도파민 수송체를 통한 도파민 흡수를 위해 시냅토솜을 준비하고, 다양한 농도의 방사성 표지된 도파민으로 처리하고, 시냅토솜을 분리하고, 도파민 흡수를 정량화하기 위해 방사능을 측정하는 단계를 간략하게 설명합니다.

방사성 표지된 도파민을 사용하여 마우스 뇌 시냅토솜에서 도파민 흡수 측정

성인 세 마우스의 단일 뉴런의 활동은 특정 뇌 영역에서 신경 세포를 해리와 형광 막 잠재적 인 염료 이미징을 사용하여 공부하실 수 있습니다. 포도당의 변화에​​ 시험 응답으로,이 기술은 성인 ventromedial 시상 하부 뉴런의 포도당 민감성을 연구하는데 사용될 수있다.

막 성인 쥐에서 Ventromedial 시상 하부 뉴런의 잠재적 인 염료 이미징은 포도당 감지를 연​​구하는

많은 비전을 위협 눈 질병 장애 망막 microvessels와 연결 됩니다. 따라서, 망막 되 응답의 측정은 기본 병 태 생리 기계 장치를 조사 하는 것이 중요. 이 문서에서는 마우스 망막 되 격리와 혈관 직경에 vasoactive 물질의 효과 평가 하기 위해 준비에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 망막 Arterioles Ex Vivo 에서 반응의 측정을 위한 준비 단계

이 기술은 산소 소비와 세포 외 산성화 속도 explanted 마우스 망막 조직 세포 외 유출 분석기를 사용 하 여 실시간으로 녹음을 설명 합니다.

Explanted 망막 조직 세포 외 유출 분석을 사용 하 여 신진 대사 에너지의 측정

포도당 섭취량은 FRET 기반의 유전자 인코딩 된 포도당 센서에 의해 표시된 바와 같이 TAR DNA 결합 단백질 (TDP-43) 단백질 병증에 의해 영향을받는 Drosophila 운동 뉴런에서 증가합니다.

TDP-43 단백질 요법의 드로소필라 모델에서 포도당 섭취 측정

생쥐의 망막 혈관 구조는 혈관 패턴 형성의 메커니즘을 이해하는 데 특히 흥미롭습니다. 이 프로토콜은 광학 디스크에서 고정된 거리에서 형광 혈관 조영술 안저 영상에서 마우스 망막 혈관의 직경을 자동으로 측정합니다.

Mouse Fluorescent Angiography 이미지에서 망막 혈관 직경 측정

우리는 반복 murine microglia를 시각화하고 monocytes 순환하는 방법을...

만성 두 광자를위한 박막 해골 창 기법 생체내에서</emNeuroinflammation의 모델 Murine Microglia의> 이미징

이 문서는 그대로 마우스 망막에서 찬란 태그의 연결 인구에서 각각의 세포의 녹음을 묘사. 두 광자 여기 적외선을 사용하여 transgenetically 라벨이 세포들은 빛의 반응, 수용 필드 속성 및 형태학을 연구하기 위해 패치 - 클램프 녹음 대상으로했다.

손상 망막의 특성 Electrophysiological GFP - 표현 세포 집단

배우세요 생체외 쥐 신경 망막에서 형광 포도당 유사체 6-NBDG를 이용한 포도당 흡수 측정 방법을. 이 기술은 노화 및 신경퇴행성 질환 연구에 활용됩니다.

포도당 유사체, 6-(N-(7-니트로벤츠-2-옥사-1,3-디아졸-4-일)아미노)-6-데옥시글루코스의 흡수 측정, 온전한 쥐 신경 망막에서

더 많은 동영상 탐색