Name: 1차 인간 근위세뇨관 상피 세포의 분리 및 신장 근위세뇨관의 미세생리학적 모델 생성에 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 배우세요 인간 신장 근위세뇨관 상피 세포 분리 및 3차원 마이크로유체 플랫폼에서 배양하는 방법을. 이 기술은 약물 수송, 신독성 평가, 장기 배양에서 세포 생존율 유지에 활용됩니다.

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<ol><li>Bertram, J. F., Douglas-Denton, R. N., Diouf, B., Hughson, M. D., Hoy, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+nephron+number%3A+implications+for+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Human nephron number: implications for health and disease.</a> Pediatr Nephrol. 26 (9), 1529-1533 (2011).</li>
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<li>Weber, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+kidney+on+a+chip+assessment+of+polymyxin+antibiotic+nephrotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Human kidney on a chip assessment of polymyxin antibiotic nephrotoxicity.</a> JCI Insight. 3 (24), e123673(2018).</li>
<li>Imaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bridging+the+gap+between+in+silico+and+in+vivo+by+modeling+opioid+disposition+in+a+kidney+proximal+tubule+microphysiological+system%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Bridging the gap between in silico and in vivo by modeling opioid disposition in a kidney proximal tubule microphysiological system.</a> Sci Rep. 11 (1), 21356(2021).</li>
<li>Van Ness, K. P., Chang, S., Weber, E. J., Zumpano, D., Eaton, D. L., Kelly, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+systems+to+assess+nonclinical+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Microphysiological systems to assess nonclinical toxicity.</a> Curr Protoc Toxicol. 73, 14.18.1-14.18.28 (2017).</li>
<li>Lidberg, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+protein+exposure+activates+a+core+regulatory+program+driving+human+proximal+tubule+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Serum protein exposure activates a core regulatory program driving human proximal tubule injury.</a> J Am Soc Nephrol. 33 (5), 949-965 (2022).</li>
<li>Sakolish, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technology+transfer+of+the+microphysiological+systems%3A+a+case+study+of+the+human+proximal+tubule+tissue+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Technology transfer of the microphysiological systems: a case study of the human proximal tubule tissue chip.</a> Sci Rep. 8 (1), 14882(2018).</li>
<li>Hart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+prognostic+biomarkers+for+antibiotic+associated+nephrotoxicity+in+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cyst+Fibros%22%5BJournal%5D)">Identification of prognostic biomarkers for antibiotic associated nephrotoxicity in cystic fibrosis.</a> J Cyst Fibros. 23 (2), 293-299 (2024).</li>
<li>Lidberg, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotide+development+for+the+selective+modulation+of+CYP3A5+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotide development for the selective modulation of CYP3A5 in renal disease.</a> Sci Rep. 11 (1), 4722(2021).</li>
<li>Imaoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microphysiological+system+modeling+of+ochratoxin+A-associated+nephrotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Microphysiological system modeling of ochratoxin A-associated nephrotoxicity.</a> Toxicology. 444, 152582(2020).</li>
<li>Chapron, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reevaluating+the+role+of+megalin+in+renal+vitamin+D+homeostasis+using+a+human+cellderived+microphysiological+system%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Reevaluating the role of megalin in renal vitamin D homeostasis using a human cellderived microphysiological system.</a> ALTEX. 35 (4), 504-515 (2018).</li>
<li>Adashi, E. Y., O'Mahony, D. P., Cohen, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FDA+modernization+act+2.0%3A+drug+testing+in+animals+is+rendered+optional%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med%22%5BJournal%5D)">The FDA modernization act 2.0: drug testing in animals is rendered optional.</a> Am J Med. 136 (9), 853-854 (2023).</li>
<li>Qi, W., Johnson, D. W., Vesey, D. A., Pollock, C. A., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+propagation+and+characterization+of+primary+tubule+cell+culture+from+human+kidney+%28methods+in+renal+research%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology%22%5BJournal%5D)">Isolation, propagation and characterization of primary tubule cell culture from human kidney (methods in renal research).</a> Nephrology. 12 (2), 155-159 (2007).</li>
<li>Mihevc, M., Petreski, T., Maver, U., Bevc, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+proximal+tubular+epithelial+cells%3A+review+of+isolation%2C+characterization%2C+and+culturing+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Rep%22%5BJournal%5D)">Renal proximal tubular epithelial cells: review of isolation, characterization, and culturing techniques.</a> Mol Biol Rep. 47 (12), 9865-9882 (2020).</li>
<li>Shaver, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellfree+hemoglobin+augments+acute+kidney+injury+during+experimental+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cellfree hemoglobin augments acute kidney injury during experimental sepsis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 317 (4), F922-F929 (2019).</li>
<li>Sbarbati, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+human+endothelial+cells+from+fibroblasts+by+centrifugation+in+Percoll+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22Biosci+Rep%22%5BJournal%5D)">Separation of human endothelial cells from fibroblasts by centrifugation in Percoll gradients.</a> Biosci Rep. 5 (6), 469-472 (1985).</li>
<li>Horn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+is+more+efficient+by+red+blood+cell+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Isolation of human mesenchymal stromal cells is more efficient by red blood cell lysis.</a> Cytotherapy. 10 (7), 676-685 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1mL 루어-록 팁 주사기</td><td>벡턴, 딕킨슨</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리관</td><td>셀트리트 사이언티픽 프로덕츠</td><td>229442</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 멸균 원뿔형 폴리프로필렌 튜브</td><td>피셔 사이언티브</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>3D 미세생리학적 장치</td><td>노르티스</td><td>TCC-001</td><td></td></tr><tr><td>5mL 루어-록 팁 주사기</td><td>벡턴, 딕킨슨</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 멸균 원뿔형 폴리프로필렌 튜브</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12-565-271</td><td></td></tr><tr><td>항생제-항균제(100회)</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>콜라게나아제, 타입 IV, 분말</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>17104019</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-포도당</td><td>밀리포어 시그마</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>정의된 트립신 억제제</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>R007100</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 황산화, 바이오리시약, 서모 사이언티픽 케미컬스</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>J66650-AK</td><td></td></tr><tr><td>디스파이즈 II, 분말</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>둘벡코 s MEM (DMEM)/포도당 없는 F-12</td><td>미국 생물생명과학</td><td>D9807-02</td><td></td></tr><tr><td>둘벡코 인산염 완충 식염수(DPBS), 칼슘, 마그네슘</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>14040117</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS), 프리미엄</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>핀피펫 F2 우수 실험실 피펫팅(GLP) 키트</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>05-719-511</td><td>마이크로피펫</td></tr><tr><td>피셔브랜드 슈어원 마이크로포인트 피펫 팁, 유니버설 핏, 비필터</td><td>피셔 사이언티브</td><td>02707407, 02707410, 02707438</td><td></td></tr><tr><td>신선한 인간 신장 통째</td><td>노바바이오시스</td><td>https://www.novabiosis.com/research-organ-allocation-services/</td><td>인간 신장은 UNOS 승인 OPO인 노바비시시스를 통해 확보되었습니다</td></tr><tr><td>가습 인큐베이터 (37 & deg; C 및 5% CO2)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>51033556</td><td></td></tr><tr><td>하이드로코르티손</td><td>밀리포어 시그마</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이팅 궤도 셰이커</td><td>아반토르</td><td>12620-946</td><td></td></tr><tr><td>인슐린-트랜스페린-셀레늄 (100X) (ITS -G)</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>내부 나사산 냉동 바이알</td><td>코닝</td><td>430487</td><td></td></tr><tr><td>킴텍 사이언스 킴와이프</td><td>킴벌리-클라크 프로페셔널</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>루어 스텁(무딘 주니들), 22 G x 0.5인치</td><td>인스테크 연구소 주식회사</td><td>LS22</td><td></td></tr><tr><td>미디엄 199, 얼스 솔트 (10배)</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>21180021</td><td></td></tr><tr><td>메가퓨지 8 소형 벤치탑 원심분리기</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>75007210</td><td></td></tr><tr><td>금속 커플러 (둔탁)</td><td>인스테크 연구소 주식회사</td><td>SC 20/15</td><td></td></tr><tr><td>서리 냉동 용기 씨</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>5100-0036</td><td></td></tr><tr><td>니콘 이클립스 Ti-S 현미경</td><td>니콘 인스트루먼트</td><td>https://www.thelabworldgroup.com/product/nikon-eclipse-ti-fluorescent-microscope/</td><td>원래 모델은 단종되었습니다.</td></tr><tr><td>Nunc 비처리 플라스크, T-25</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 비처리 플라스크, T-75</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>156800</td><td></td></tr><tr><td>피펫, 10 mL, 눈금, 1/10 mL, 멸균</td><td>그레이너 바이오-원</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 튜빙, C-플렉스 튜빙, (내각: 0.020", 외경: 0.083")</td><td>콜-파머</td><td>06422-00</td><td></td></tr><tr><td>단면 면도날 (멸균)</td><td>바이오실</td><td>KI-205/50</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>밀리포어 시그마</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>밀리포어 시그마</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>PES 멤브레인이 있는 멸균 일회용 필터 유닛</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>567-0020</td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 처리 접시, 150 mm&nbsp; x 20mm 통풍구</td><td>제네시 사이언티브</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.05%), 페놀 레드</td><td>서모피셔 사이언티픽</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>1형 콜라겐, 쥐꼬리</td><td>코닝</td><td>354236</td><td></td></tr><tr><td>IV 콜라겐, 쥐</td><td>코닝</td><td>354233</td><td></td></tr></tbody></table>

1차 인간 근위세뇨관 상피 세포의 분리 및 신장 근위세뇨관의 미세생리학적 모델 생성에 사용

Isolation of Primary Human Proximal Tubule Epithelial Cells and Their Use in Creating a Microphysiological Model of the Renal Proximal Tubule

Kidney disease affects over 850 million people globally, including 37 million Americans. Risk factors for&#160;chronic kidney disease include ...

isolation-primary-human-proximal-tubule-epithelial-cells-their-use

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오에서는 광범위한 분자 생물학 및 세포 배양 연구를 위해 신장 세뇨관 상피 세포를 분리하고 정제하는 단계를 보여줍니다.

쥐 신장 세포 분리: 신장 세뇨관 상피 세포의 1차 배양을 분리하고 생성하는 기술

신 세뇨관 상피에서 발현 이온 채널은 다낭성 신장 질환의 병리에 중요한 역할을한다. 여기에서 우리는 갓 쥐의 신장에서 분리 낭포 성 상피 세포에서 패치 클램프 분석 및 세포 내 칼슘 수준 측정을 수행하는 데 사용되는 실험 프로토콜을 설명합니다.

패치 클램프 및 라이브 형광 현미경을 구현 갓 고립 PKD 상피 세포의 기능적 특성을 모니터링하려면

이 프로토콜은 혈관 구조를 통한 세제의 사전 관류에 의한 Sprague Dawley 쥐 신장의 탈세포화를 설명하며, 인간 신장 상피 세포로 재증식하기 위한 템플릿 역할을 하는 무세포 신세포 외 기질을 생성합니다. 성장을 모니터링하기 위한 재세포화 및 레사주린 관류 분석법의 사용은 특별히 설계된 관류 생물반응기 내에서 수행됩니다.

상피 세포 다시 채우기 및 신장 조직 개발을위한 설치류 세포 외 기질 비계의 준비

여기 우리는 신장 혈관 주위 Stromal 세포 (kPSCs) 소화 효소와 NG2 셀 농축 전체가 장기 관류에 따라 새로운 임상 등급 고립과 문화 방법 제시. 이 방법으로 세포 치료에 대 한 충분 한 셀 번호 취득 가능 하다.

인간의 신장 혈관 주위 Stromal 세포에 대 한 새로운 임상 등급 격리 방법

신장 구조 조직 설계 기관 부족 및 투 석의 해로운 효과 위한 솔루션을 제공합니다. 여기, 우리는 마이크로 프로토콜 설명 cortico 골 수 세그먼트의 격리 murine 신장 해 부. 이 세그먼트는 신장 organoids를 형성 세포 비 계 없는 구문으로 이식.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

이 프로토콜에는 분리 하 고 마우스 기본 신장 관 세포 이후에 하위 신장 생물학 기능 비보 전, 미토 콘 드리 아 생체를 포함 하 여 평가 양식 수 있는 특성화 하는 비용 효율적인 접근 방식을 제공 합니다.

마우스 기본 신장 관 상피 세포의 고립, 특성, 및 높은 처리량 세포 외 유출 분석

인간 신장 관형 배양은 신장 생리학 및 질병을 공부하는 중요한 체외 모형을 나타냅니다. Tubuloids는 신장 조직 (건강하고 병은) 뿐만 아니라 소변에서 설치될 수 있고, 후자는 연구 자료의 쉽게 얻을 수 있고 덜 침습적인 근원을 나타내는.

조직과 소변에서 인간 신장 tubuloids의 생성

여기에서는 미세생리학적 시스템에서 콜라겐 및 콜라겐-아가로스 매트릭스를 사용하여 3D 세포 배양을 구현하기 위한 지침을 자세히 설명하는 프로토콜을 제시합니다. 이러한 프로토콜은 신장 근위세뇨관 및 신세포 암 스페로이드 공동 배양을 지원하여 생체 내 조건을 시뮬레이션하고 신장암 세포 상호 작용에 대한 고급 조사를 가능하게 합니다.

신장암 진행을 모델링하기 위한 건강한 신장과 종양 상피의 미세유체 공동 배양

여기에서는 신장 피질에서 인간 신장 세뇨관 상피 세포(HRTEC)의 1차 배양을 얻어 세포외 기질(3D-HRTEC)에서 단층 및 3차원 배양을 개발하기 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

Development of human renal tubular epithelial cell primary cultures in monolayers and three-dimensional conditions(단층 및 3차원 조건에서의 인간 신장 세뇨관 상피 세포 1차 배양 개발)

여기서는 고대사성 근위 소관 상피 세포에서 저산소증/산소 재산화 손상을 모델링하는 시험관 내 프로토콜을 설명합니다. 이 모델은 대사 스트레스 유발 손상을 유도하도록 설계되었으며, 근위 세뇨관 손상 지표의 발현과 미토콘드리아 호흡 기능 평가를 통해 측정할 수 있습니다.

근위 관 상피 세포에서 저산소증/재산소화 손상 모델링

배우세요 인간 신장 근위세뇨관 상피 세포 분리 및 3차원 마이크로유체 플랫폼에서 배양하는 방법을. 이 기술은 약물 수송, 신독성 평가, 장기 배양에서 세포 생존율 유지에 활용됩니다.

1차 인간 근위세뇨관 상피 세포의 분리 및 신장 근위세뇨관의 미세생리학적 모델 생성에 사용

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