Name: U2 OS 세포 배양을 사용한 라이브 셀, 형광 현미경 검사를 위한 전기천공법 세포 분석 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: 배우세요 전기천공법을 활용한 라이브 셀 형광 현미경 검사 기법으로 U2 OS 세포 배양에서 세포 주기 변화를 관찰하는 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 최대 72시간 연속 실험이 가능합니다.

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<ol><li>Shi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+electroporation-based+intracellular+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">A review on electroporation-based intracellular delivery.</a> Molecules. 23 (11), 3044(2018).</li>
<li>Kandušer, M., Miklavčič, D. Electroporation in biological cell and tissue: An overview. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKandu%C5%A1er%2C+M+%22Electrotechnologies+for+extraction+from+food+plants+and+biomaterials.+Food+Engineering+Series%22">Electrotechnologies for extraction from food plants and biomaterials. Food Engineering Series</a>. , Springer. New York. (2009).</li>
<li>Cemazar, M., Sersa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+electrochemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Bioelectricity%22%5BJournal%5D)">Recent advances in electrochemotherapy.</a> Bioelectricity. 1 (4), 204-213 (2019).</li>
<li>Iyengar, S. K., Iyengar, S., Srivathsan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promise+of+pulsed+field+ablation+and+the+challenges+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">The promise of pulsed field ablation and the challenges ahead.</a> Front Cardiovasc Med. 10, 1235317(2023).</li>
<li>Miklavčič, D., Mali, B., Kos, B., Heller, H., Serša, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemotherapy%3A+From+the+drawing+board+into+medical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Eng+Online%22%5BJournal%5D)">Electrochemotherapy: From the drawing board into medical practice.</a> Biomed Eng Online. 13 (1), 29(2014).</li>
<li>Ando, R., Sakaue-Sawano, A., Shoda, K., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+coral+fluorescent+proteins+of+distinct+colors+for+sharp+visualization+of+cell-cycle+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Two coral fluorescent proteins of distinct colors for sharp visualization of cell-cycle progression.</a> Cell Struct Funct. 48 (2), 132-144 (2023).</li>
<li>Nesmith, T., Vieira, C., Rackus, D., Gupta, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+electroporation+cytometry+system+for+long-term%2C+live+cell+cycle+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">An electroporation cytometry system for long-term, live cell cycle analysis.</a> Biomicrofluidics. 18 (4), 044105(2024).</li>
<li>Hulett, H. R., Bonner, W. A., Barrett, J., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sorting%3A+automated+separation+of+mammalian+cells+as+a+function+of+intracellular+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell sorting: automated separation of mammalian cells as a function of intracellular fluorescence.</a> Science. 166 (3906), 747-749 (1969).</li>
<li>Chao, H. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+the+human+cell+cycle+is+a+series+of+uncoupled%2C+memoryless+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Sys+Bio%22%5BJournal%5D)">Evidence that the human cell cycle is a series of uncoupled, memoryless phases.</a> Mol Sys Bio. 15 (3), e8604(2019).</li>
<li>Diehl, F. F., Sapp, K. M., Vander Heiden, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bidirectional+relationship+between+metabolism+and+cell+cycle+control%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Bio%22%5BJournal%5D)">The bidirectional relationship between metabolism and cell cycle control.</a> Trends Cell Bio. 34 (2), 136-149 (2024).</li>
<li>Rems, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+electrofusion+using+nanosecond+electric+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cell electrofusion using nanosecond electric pulses.</a> Sci Rep. 3, 3382(2013).</li>
<li>Klein, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+best+practices+for+controlling+mammalian+cell+culture+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Bio%22%5BJournal%5D)">Toward best practices for controlling mammalian cell culture environments.</a> Front Cell Dev Bio. 10, 788808(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>챔버 슬라이드(3D 프린팅/조립)&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>배양 플레이트(10 cm)</td><td>Sarstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Delta Vision</td><td>Olympus</td><td>N/A</td><td>대체 현미경 모델도 사용할 수 있습니다. 스테이지 및 환경 시스템이 전기천공 챔버슬라이드(55mm x&nbsp;</td></tr><tr><td>DMEM &ndash; 고포도당</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청&nbsp;</td><td>써모피셔</td><td>A5256701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>i3 MK3S 3D 프린터</td><td>Prusa</td><td>N/A</td><td>STL 파일을 사용할 수 있는 대체 프린터 모델을 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>펜 연쇄상구균</td><td>ThermoFisher</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>tFUCCI(CA)5</td><td>Addgene</td><td>153521</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-07-07</td><td></td></tr><tr><td>U2-OS 세포주</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td></td></tr></tbody></table>

u2 os 세포 배양을 사용한 라이브 셀, 형광 현미경 검사를 위한 전기천공법 세포 분석 프로토콜

An Electroporation Cytometry Protocol for Live-Cell, Fluorescence Microscopy Using U2 OS Cell Culture

FUCCI 시스템(그림 2)을 사용하여 단백질 발현 및 비퀴틴화(unbiquitination)의 결과로 세포에서 각 색상이 발현되는 시간을 측정하여 시각적 세포 주기 데이터를 얻었습니다. 비동기식 및 동기화된 실험의 결과를 바탕으로 (그림 3) S상 PEF 노출이 세포 주기를 상향 조절하는 것이 분명했습니다. 이는 평균 상 길이의 감소로 입증되었으며, 이는 세포 주기가 더 빠르다는 것을 나타냅니다. 또한, 그것은 또한 세포주기에 대한 thymidine의 장기적인 효과를 입증했다. 동기화된 집단에 대한 대조군 데이터는 동기화되지 않은 집단에 비해 평균 세포 주기가 더 긴 것으로 나타났습니다. 반대로, S-위상 동기화된 집단이 펄스된 후 평균 세포주기 길이는 비동기 대조군과 비슷했습니다.
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U2 OS 세포 배양을 사용한 라이브 셀, 형광 현미경 검사를 위한 전기천공법 세포 분석 프로토콜

Pulsed electric fields (PEFs) have a wide range of applications in medical research and clinical applications. A key area of research focuses on ...

an-electroporation-cytometry-protocol-for-live-cell-fluorescence

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 비디오에서 우리는 세포의 효율적인 electrofusion을...

세포는 형광 현미경 Electrofusion와 시각

RNA 효소 II transcriptional 운동은 살아있는 세포에서 특정 유전자를 측정합니다. 관심의 유전자에서 베꼈는데 mRNAs는 찬란 태그와 (FRAP) transcriptional 신장의 생체내 반응 속도론에있는가를 얻을 수있다 Photobleaching 후 형광 복구를 사용하고 있습니다.

싱글 생활 세포에서 mRNA의 전사의 속도론을 측정

출처: Aigrain, L. 외. 전기공공을 통한 생체 미생물 내 형광 생체분자의 내부 추출 및 관찰.  J. Vis. 경험 (2015)이 영상은 전기공공을 이용해 형광 생체분자를 전기적(electroporation)을 이용한 전기적(electro-potation) 미생물 세포에 전달하는 과정을 시연합니다. 이 과정은 형광포자 태그가 부착된 DNA 또는 단백질을 냉각된 세포 현탁액에 주입하는 것으로 시작됩니다. 그 후 고전압 펄스를 가해 임시 막 구멍을 만들어 생체분자가 세포질 내 침투를 가능하게 합니다. 회복 후에는 세포를 세척하고 여과하여 내부화되지 않았거나 표면에 결합된 분자를 제거합니다. 마지막으로, 표지된 세포를 형광 영상을 위해 부착하여 세포 내 구성 요소를 시각화합니다.

형광 생체분자를 박테리아 세포에 전기천공 기반 전달

이 동영상은 단백질과 단백질의 상호작용을 평가하기 위한 BiFC-PALM(광활성화 국소화 현미경과 이분자 형광 보완법의 조합)에 대해 설명합니다. BiFC는 두 개의 형광 단백질 단편과 두 개의 상호 작용하는 관심 단백질의 융합을 포함합니다. 두 단백질이 상호 작용할 때 단편이 근접하게 되어 두 부분이 함께 모여 기능적 형광 단백질을 재구성할 수 있습니다. 단일 형광단의 형광은 PALM에 의해 세포 내부의 단일 분자 수준에서 국한됩니다.

Bimolecular Fluorescence Complementation-Coupled Photoactivated Localization Microscopy

이 비디오는 T 림프구와 형광 항원을 운반하는 상피 세포 간의 상호 작용을 조사하여 면역학적 시냅스 토폴로지의 라이브 셀 이미징을 보여줍니다. 형광 현미경 검사는 내피 세포에서 적색 세포질 변위와 노란색 막 고리를 보여주어 면역학적 시냅스의 형성을 나타냅니다.

Live-Cell Imaging을 통한 면역학적 Synapse 토폴로지 평가

생체 내 생체 분자에 대한 연구는 생물학적 맥락에서 분자 기능을 이해하는 데 중요합니다. 여기에서는 DNA 또는 단백질과 같은 형광 생체 분자를 살아있는 미생물로 내재화할 수 있는 새로운 방법을 설명합니다. 형광 현미경 검사로 기록된 생체 내 데이터 분석도 제시되고 논의됩니다.

일렉트로을 통해 생활 미생물의 국제화 및 형광 생체 분자의 관측

단백질-단백질 상호 작용은 BiFC(bimolecular fluorescence complementation)와 PALM(photoactivated localization microscopy)을 결합하여 나노미터 공간 해상도로 세포에서 시각화됩니다. 여기에서는 개별 Ras-Raf 복합체의 나노 스케일 클러스터링 및 확산을 시각화하기 위해 U2OS 세포에서 Ras-Raf 상호 작용을 이미징하기 위해 BiFC-PALM을 사용하는 방법에 대해 설명합니다.

이분자 형광 보완과 광 활성화 현지화 현미경 (BiFC-PALM)

자궁 전기기화의 이중은 공간적으로 그리고 일시적으로 분리되는 세포 집단을 표적으로 할 수 있습니다. 이 기술은 정상 조건에서 형광 단백질을 사용하여 그 세포 인구 사이 상호 작용을 구상하는 데 유용하지만 기능적 실험 후 관심의 유전자를 어지니로 조정합니다.

자궁에서 두 배의 자궁 전기화는 시간적으로 그리고 공간적으로 분리된 세포 인구를 표적으로 합니다

이 프로토콜은 랩온어칩, 마이크로유체 전기천공 장치를 구축하는 데 필요한 미세 가공 기술을 설명합니다. 실험 설정은 연속 흐름에서 제어된 단일 세포 수준 형질주입을 수행하며 집단 기반 제어를 통해 더 높은 처리량으로 확장할 수 있습니다. 세포막 투과 정도를 실시간으로 전기적으로 모니터링하는 기능을 보여주는 분석이 제공됩니다.

연속 흐름의 제조 및 작동, 투과화 감지 기능이 있는 미세 전기 천공 시스템

체외에서 흥분성 세포의 반응을 연구하기 위해 이 프로토콜은 유전적으로 조작된 tet-on 스파이킹 HEK 세포의 간단한 흥분성 세포 모델에 대한 전기천공으로 인한 활동 전위 생성의 변화와 관련 매개변수의 자동 추출을 통한 막관통 전압의 변화에 대한 광학 모니터링을 설명합니다.

유전자 조작 Tet-On 스파이킹 HEK 세포에서 전기천공법으로 유도된 작용 전위 생성 변화 모니터링

이 프로토콜은 광학 광자 재할당이 가능한 회전 디스크 공초점 현미경을 사용하여 심층 전세포 단일 분자 위치 현미경(SMLM)을 수행하는 절차를 설명하여, 맞춤형 광학 장치나 복잡한 조명 없이 DNA-PAINT 이미징을 가능하게 합니다.

광학 광자 재배치가 포함된 회전 디스크 공초점 디스크에 대한 DNA-PAINT를 통한 전세포 초해상도 영상

배우세요 전기천공법을 활용한 라이브 셀 형광 현미경 검사 기법으로 U2 OS 세포 배양에서 세포 주기 변화를 관찰하는 방법을 익히세요. 이 프로토콜은 최대 72시간 연속 실험이 가능합니다.

U2 OS 세포 배양을 사용한 라이브 셀, 형광 현미경 검사를 위한 전기천공법 세포 분석 프로토콜

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