May 23rd, 2025
우리는 심장 기능을 기록하고 심장 잠금 척추 등쪽 뿔 뉴런을 분석하는 것과 함께 척추 다채널 세포 외 기록을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 방법은 침술에 의해 유발된 흉추의 내장 기능 변화의 기저에 있는 척추 메커니즘을 연구하기 위한 시간적으로 동기화된 틀을 제공합니다.
내 연구는 흉추 척추 안정화 MEA ECG 프로토콜을 통해 심혈관 조절의 침술 척추 신경 조절 효과를 해독하여 SDHN 역학과 같은 입자를 밀리초 단위로 처리하고 분석할 수 있도록 합니다.
현재의 실험적 과제에는 신경 위협을 예방하기 위해 신뢰할 수 있는 흉추 안정화를 달성하는 것이 포함됩니다. 신경 안정성을 위한 시작 프로토콜을 최적화하고 밀리초 수준의 MEA ECG 동기화를 보장합니다.
[윤류 ] 우리의 프로토콜은 신경 활동과 심장 기능을 동시에 모니터링하고 심전도와 미세 전극의 기록을 결합하여 칼슘 이미징보다 낮은 시간 해상도를 극복하는 지우기를 위한 일반적인 접근 방식을 제공했습니다.
우리의 결과는 심장에 위치한 척추 뉴런이 MI 진행을 유도하는지 여부와 경혈 특정 침술 조절이 심근 경색에 대한 치료적 이점을 제공하는지에 대한 조사를 촉진합니다.
[해설자] 시작하려면 Y자형 캐뉼라를 검사하여 완전히 건조되었는지 확인하십시오. 스프링 가위를 사용하여 마취된 쥐의 기관을 가로 절개합니다. 캐뉼라를 기관 구멍에 삽입합니다. 공기 누출 및 우발적인 발관을 방지하기 위해 3개의 비흡수성 봉합사로 기관 캐뉼라를 고정합니다. 다음으로 쥐의 피부에 세 개의 전극을 삽입합니다. 양극을 왼쪽 하지에, 접지 전극을 오른쪽 하지에, 음극을 오른쪽 상지에 놓습니다. 쥐를 바로 누운 자세로 눕힙니다. 피부를 소독한 후 흉선을 노출시키기 위해 개흉술을 시행합니다. 그런 다음 유리 해부 바늘 끝을 사용하여 심낭에 작은 구멍을 만듭니다. 이제 절개 부위를 통해 원위 끝에 여러 개의 작은 구멍이 있는 실리콘 카테터를 심낭에 1-2센티미터 삽입합니다. BioGlue로 카테터를 흉벽 조직에 고정합니다. 그런 다음 1헤르츠의 자극 매개변수를 사용하여 PC 6 경혈에서 수동 침술을 수행합니다. 약 3mm 깊이의 PC 6개 accupoint에 침술 바늘을 삽입합니다. 헤드 클램프에 부착된 근육과 긴 목 근육의 직선 부분을 제거하여 두 번째 흉추의 극돌기를 노출시킵니다. 그런 다음 반척추근과 척추근을 대체하여 척추궁을 T2에서 T6으로 노출시킵니다. rongeurs를 사용하여 T3 척추의 극돌기를 제거하여 T3 척수를 노출시킵니다. 흉추 고정의 경우 맞춤형 척추 클램프를 사용하여 T2 및 T6의 관절 돌기를 고정합니다. 수분을 유지하기 위해 식염수로 주변 근육을 적십니다. 이제 전극 어레이를 정위 기기의 마이크로 매니퓰레이터에 부착합니다. 등쪽 정중고랑을 통해 척수의 T3 등쪽 뿔에 수직으로 삽입합니다. 그런 다음 기준 전극을 등 근육에 삽입합니다. 자극을 위해 브래디키닌 용액이 있는 여러 개의 구멍이 있는 실리콘 카테터에 연결된 마이크로 주사기를 로드합니다. 4마이크로리터의 용액을 주입하고 심장 통각 자극을 유도합니다. 주사 후 30분 이내에 T3 척수 후각의 심박수 및 신경 분비물 변화를 관찰합니다. 소프트웨어를 실행하여 기록된 신경 데이터를 .ns6 형식으로 가져옵니다. .ns6 파일을 프로그램으로 끌어다 놓습니다. 파일을 선택하고 다른 이름으로 저장을 클릭한 다음 다음 .nex5 형식을 선택하여 표준화된 스파이크 트레인 데이터를 생성합니다. 변환된 .nex5 파일을 분류 소프트웨어로 가져옵니다. 신호를 필터링하고 분류하기 위한 관련 코드를 실행합니다. 그런 다음 파형 특성과 기본 성분 분석을 기반으로 스파이크 파형을 정렬하고 임계값 매개변수를 기준선 노이즈에서 ±3 표준 편차로 설정합니다. MATLAB을 실행하여 심장 고정 척추 등각 뉴런을 분석합니다. 실험 매개변수를 정의합니다. 실행을 클릭하여 실행합니다. 채널 19에서 기록된 뉴런은 PCA에서 대칭적인 상관 패턴과 촘촘하게 클러스터링된 파형 그룹을 가진 조밀한 리드미컬한 스파이크 트레인을 보여주었습니다. 채널 11의 뉴런은 각각 고유한 자동 상관 기능과 PCA 파형 클러스터를 가진 세 가지 별개의 발화 프로필로 분할됩니다. ECG로 리드미컬하게 발사되는 채널 17 C 및 21A의 심장 고정 뉴런은 기준선에서 파동이지만 브래디키닌은 이 패턴을 방해하고 P파와 Q파 사이에 새로운 스파이크 클러스터를 도입했습니다. MAPC6는 파동 고정 발사를 복원했지만 이 리드미움은 MAPC6 이후 다시 감소했습니다. 브래디키닌은 흥분된 뉴런의 비율을 급격히 증가시킨 반면 MAPC6는 이 반응을 감소시켰습니다. 반대로, 억제성 뉴런 비율은 브래디키닌으로 떨어졌지만 MAPC6 이후에는 회복되었습니다. Chan21a는 기준선에서 ECG P파와 동기화되어 발사되었고, 브래디키닌 후 P파와 Q파 사이에 클러스터링되었으며 MAPC6 이후 P파에 다시 고정되었습니다.
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본 연구는 심장 기능 평가와 함께 척수 다중 채널 세포외 기록을 위한 새로운 프로토콜을 설명하여 심장 잠금 척수 배측 각 뉴런을 분석합니다. 이러한 동기화 프레임워크는 침술과 관련된 흉부 내장 기능 변화에 의해 영향을 받는 척수 메커니즘을 탐구하는 데 중요합니다.
Simultaneous monitoring of cardiac-locked neuronal responses in the thoracic spinal dorsal horn enables mechanistic de-risking of neuromodulation strategies for cardiovascular indications. This protocol advances predictive confidence in target validation by integrating high-temporal-resolution neural and cardiac data, supporting translational continuity from discovery to preclinical research. The approach is strategically positioned to inform portfolio decisions on neuromodulatory interventions for cardiac dysfunction.
This protocol bridges early discovery and preclinical validation by enabling synchronized analysis of neural and cardiac responses to somatic stimulation in vivo.