무균 마우스에 인간 배설물 이식을 위한 Bioexclusion IsoPositive 케이지 실험의 준비 및 유지 관리

우리는 박테리아와 숙주 사이의 상호 작용을 연구했고, 내부 및 외부 요인이 이 관계를 수정하여 건강을 변화시켰습니다. 특히, 우리는 암 발생, 진행 및 치료에서 박테리아의 역할을 이해하는 데 관심이 있습니다. 우리와 다른 마이크로바이옴 실험실은 ISO 포지티브 케이지 시스템을 사용하여 인간 피험자의 대변 군집을 수용자 쥐 숙주로 전달하여 안정적이고 장기적인 미생물 군집을 만듭니다.

이 기술을 통해 우리는 건강과 질병에서 관련 임상 박테리아의 역할에 대한 새로운 발견을 할 수 있었습니다. 많은 전향적 임상시험에서 특정 미생물과 암 발병, 진행 및 치료 반응 사이의 연관성을 발견했지만, 상관관계가 인과 관계를 의미하지는 않습니다. 무균 마우스와 인간 배설물 표본을 인간화하면 관련 암 모델에서 인과 관계를 검증할 수 있습니다.

ISO 포지티브 케이지 시스템을 사용하여 인간 면역요법 반응자인 비소세포폐암 환자의 특정 박테로이드 균주가 정소성 폐 종양을 가진 마우스에 반응을 부여한다는 것을 입증했습니다. 시작하려면 이산화염소 살균제 덩크 탱크에 물티슈 10개를 넣고 완전히 비누칠했는지 확인합니다. 그런 다음 눈금이 매겨진 실린더를 사용하여 큰 비닐 봉지에 최소 100ml의 이산화염소 살균제를 채웁니다.

가방을 흔들어 모든 내부 표면이 젖었는지 확인하고 옆에 둡니다. 랙에서 단일 ISO 케이지를 제거하고 이산화염소 멸균 덩크 탱크에 넣어 액체가 완전히 접촉하도록 합니다. 물에 적신 물티슈를 사용하여 모든 케이지 표면을 문지릅니다.

케이지를 담근 후 조수에게 불린 비닐 봉지를 열도록 합니다. 케이지를 내부에 놓고 즉시 개구부를 닫으십시오. 스프레이 병을 사용하여 백 입구에 이산화염소 살균제를 뿌립니다.

모든 케이지와 용품을 자루에 넣으면 내화학성 장갑을 이산화염소 살균제에 담그십시오. 그 동안 물에 적신 물티슈를 생물 안전 캐비닛으로 옮기고 모든 표면을 적십니다. 보호되지 않은 표면의 경우 만지지 않고 물티슈를 꽉 쥐십시오.

20분 후 멸균된 내화학성 장갑을 사용하여 각 케이지와 병을 멸균된 생물 안전 캐비닛으로 옮깁니다. 밀폐된 ISO 케이지를 열려면 뚜껑 측면에 있는 두 클램프의 흰색 탭을 들어 올리고 각 클램프를 옆으로 당겨 뚜껑의 잠금을 해제합니다. 철사 랙 상단의 케이지 내부에 있는 멸균 집게를 사용하여 빈 물병을 제거하고 뚜껑 안쪽에 놓습니다.

고무 씰을 제거하고 병에 물을 부어 채웁니다. 멸균 집게를 사용하여 노즐을 물병에 놓고 단단히 눌러 밀봉합니다. 그런 다음 멸균 집게로 와이어 랙을 들어 올리고 몇 인치 뒤로 밀어 케이지 바닥에 구멍을 만듭니다.

멸균 집게를 와이어 랙에 놓고 손잡이가 케이지 표면에 닿지 않도록 합니다. 전사 디스크를 받으면 보조 작업자가 플라스틱 덮개를 잡고 부분적으로 풀어 젖은 표면이 노출되지만 만지지 않도록 합니다. 이산화염소 살균제에 적신 내화학성 장갑을 착용하고 플라스틱 포장에서 전사 디스크를 제거하고 멸균된 생물 안전 캐비닛 내부의 평평한 표면에 놓습니다.

전사 디스크를 열려면 디스크 둘레를 밀봉하는 테이프를 떼어낸 다음 뚜껑을 제거합니다. 다음으로, 이전에 와이어 랙에 놓여 있던 멸균 집게를 사용하여 구획 덮개를 조작하여 개구부를 전송할 마우스와 정렬합니다. 멸균 집게를 사용하여 전사 디스크 덮개의 구멍을 통해 마우스 꼬리 바닥을 잡고 와이어 랙과 케이지 사이의 구멍을 통해 마우스를 들어 올려 ISO 케이지로 옮깁니다.

모든 마우스가 옮겨지면 와이어 랙을 멸균 집게로 교체합니다. 케이지 뚜껑을 들어 올려 케이지 위에 다시 놓습니다. 케이지 뚜껑의 각 클램프를 위로 들어 올리고 케이지 측면 위로 조심스럽게 내립니다.

흰색 탭을 아래로 눌러 케이지 뚜껑을 단단히 밀봉합니다. 이제 조수가 케이지 랙에 있는 도킹 사이트의 각 노즐에 이산화염소 살균제를 분사하도록 합니다. 생물 안전 캐비닛에서 케이지를 제거하고 케이지 랙에 도킹합니다.

Dawn은 화학 물질 방지 장갑 대신 새로운 멸균 수술 가운과 멸균 수술 장갑을 제공합니다. 개비지 바늘을 준비하려면 각 멸균 파우치의 포장을 풀고 파우치 내부를 건조 멸균 휴지 표면으로 사용하십시오. 개비지 바늘을 주사기에 연결합니다.

대변 슬러리 튜브를 열고 각 주사기에 200마이크로리터의 슬러리를 당겨 넣습니다. 집게를 사용하여 마우스 꼬리의 바닥을 잡고 와이어 랙에 놓습니다. 목 뒤의 느슨한 피부를 긁어 마우스를 부드럽게 제지합니다.

마우스를 수직으로 똑바로 세운 상태에서 개비지 바늘을 삽입하고 대변 슬러리를 부드럽게 주입합니다. 주사 후 즉시 바늘을 제거하십시오. 관찰을 위해 멸균된 컵 중 하나에 마우스를 직접 넣습니다.

모든 마우스가 개비지를 받은 후 집게를 사용하여 각 마우스를 케이지 침대로 다시 이동합니다. 인간화된 쥐의 배설물 군집 구조는 세 가지 시점 모두에서 반응 표현형에 따라 유의하게 달랐습니다. 반응자 대변 군집 쥐는 1주와 2주, 2주와 4주 사이에 미생물 군집 구조에 차이가 없었습니다.

무반응 대변 군집화 쥐는 1주와 2주 사이에 다른 미생물 군집 구조를 보였지만 2주와 4주 사이에는 유사한 구조를 보였습니다. 인간 공여자 접종자는 Blautia, Eubacterium, ruminococcus 및 streptococcus의 발현이 증가한 반면, 수혜 마우스는 bacteroides, Lachnoclostridium, Marvinbryantia 및 Parabecteroides의 상대적 풍부도가 증가했습니다.