Name: En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 배우세요 마우스 망막 동결 절편법을 통해 공간 전사체학으로 망막 신경절세포를 완전히 매핑하는 방법을. 이 기술은 신경회로 연구와 망막 질환 이해에 필수적인 고해상도 분자 분석을 가능하게 합니다.

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<ol><li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Heukamp, A. S., Warwick, R. A., Rivlin-Etzion, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+variations+in+retinal+encoding+of+visual+space%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Topographic variations in retinal encoding of visual space.</a> Annu Rev Vis Sci. 6, 237-259 (2020).</li>
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<li>Tran, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiles+of+retinal+ganglion+cells+differing+in+resilience+to+injury+reveal+neuroprotective+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiles of retinal ganglion cells differing in resilience to injury reveal neuroprotective genes.</a> Neuron. 104 (6), 1039-1055.e12 (2019).</li>
<li>Yan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+retinal+cell+atlas%3A+Molecular+identification+of+over+sixty+amacrine+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mouse retinal cell atlas: Molecular identification of over sixty amacrine cell types.</a> J Neurosci. 40 (27), 5177-5195 (2020).</li>
<li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Curr Biol. 24 (3), 310-315 (2014).</li>
<li>Holmgren, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+pursuit+behavior+in+mice+maintains+the+pursued+prey+on+the+retinal+region+with+least+optic+flow%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual pursuit behavior in mice maintains the pursued prey on the retinal region with least optic flow.</a> eLife. 10, e70838(2021).</li>
<li>Tapia, M. L., Nascimento-dos-Santos, G., Park, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+survival+and+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific survival and regeneration of retinal ganglion cells in response to injury.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 956279(2022).</li>
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<li>de Gainza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trajectory+of+glaucoma+progression+in+2-dimensional+structural-functional+space%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">The trajectory of glaucoma progression in 2-dimensional structural-functional space.</a> Ophthalmol Glaucoma. 3 (6), 466-474 (2020).</li>
<li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+mouse+retina+at+single+cell+resolution+by+MERFISH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the mouse retina at single cell resolution by MERFISH.</a> Nat Commun. 14 (1), 4929(2023).</li>
<li>Kremers, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+STED+imaging+in+the+inner+and+outer+whole-mount+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution STED imaging in the inner and outer whole-mount mouse retina.</a> Front Ophthalmol. 3, 1126338(2023).</li>
<li>Simon, P., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+methods+of+retrograde+staining%2C+layer-separation+and+viscoelastic+cell+stabilization+to+isolate+retinal+ganglion+cells+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Combined methods of retrograde staining, layer-separation and viscoelastic cell stabilization to isolate retinal ganglion cells in adult rats.</a> J Neurosci Methods. 83 (2), 113-124 (1998).</li>
<li>Lindqvist, N., Vidal-Sanz, M., Hallböök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+RT-PCR+analysis+of+tyrosine+kinase+receptor+expression+in+adult+rat+retinal+ganglion+cells+isolated+by+retinal+sandwiching%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Single cell RT-PCR analysis of tyrosine kinase receptor expression in adult rat retinal ganglion cells isolated by retinal sandwiching.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 10 (2), 75-83 (2002).</li>
<li>Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+purified+rat+photoreceptors+in+vitro+is+stimulated+directly+by+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2.</a> J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).</li>
<li>Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+photoreceptor+circadian+oscillator+strongly+relies+on+lighting+conditions%3A+Molecular+clock+in+rat+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions: Molecular clock in rat photoreceptors.</a> Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).</li>
<li>Jaeger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+organization+of+the+rodent+retina+involves+strongly+coupled%2C+layer-specific+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Circadian organization of the rodent retina involves strongly coupled, layer-specific oscillators.</a> FASEB J. 29 (4), 1493-1504 (2015).</li>
<li>Hecht, R. M., Shi, Q., Garrett, T. R., Sivyer, B., Morgans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split+retina+as+an+improved+flatmount+preparation+for+studying+inner+nuclear+layer+neurons+in+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Split retina as an improved flatmount preparation for studying inner nuclear layer neurons in vertebrate retina.</a> J Vis Exp. (203), e65757(2024).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. A Complete spatial map of mouse retinal ganglion cells reveals density and gene expression specializations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>에임스&프라임; 미디엄</td><td>시그마-알드리치</td><td>A1420-10X1L</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>비드스미스 스레드 잭, 스레드 버너</td><td>비드스미스 스토어</td><td>7.90524E+11</td><td>대체 소작기를 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>cm1950</td><td>중요한 고려 사항은 부피와 스테이지 온도를 별도로 제어할 수 있다는 것입니다.</td></tr>드<tr><td>라이아이스</td><td>NA</td><td>NA NA</td><td>Fine</td></tr><tr><td>Science Tools Dumont #5 집게</td><td>Fine Science Tools 1129500</td><td>NC9889584</td><td>특정 브랜드 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Fisher Healthcare Tissue-Plus OCT 컴파운드</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>특정 브랜드 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Fisherbrand 고정밀 스트레이트 슬렌더 파인 포인트 핀셋/집게</td>, <td>Fisher Scientific</td><td>12-000-127</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Fisherbrand 표준 해부 가위</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-951-20</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Fisherbrand Superfrost Plus 현미경 슬라이드</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Integra Miltex Noyes Iris 가위</td><td>Integra Miltex 181510</td><td>12-460-278</td><td>특정 브랜드는 중요</td></tr><tr><td>하지 않음Olympus IX81 회전 디스크 epifluorescence 현미경</td><td></td><td></td><td>그림 7</td></tr><tr><td>RNAscope HiPlex</td><td>ACDBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>직사각형 커버 안경</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-033</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr> 중<tr><td>탄산나트륨</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014-25G</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc 유리 바닥 접시</td><td>Fisher 과학</td><td>12-567-400</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>세계 정밀 기기 정밀 스테레오 줌 삼안 현미경(IV) 붐 스탠드 세계</td><td>정밀 기기 PZMTIVBS</td><td>50-253-8607</td><td>특정 브랜드는 중요하지 않음</td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.M2 epifluorescence 현미경&nbsp;</td><td></td><td></td><td>광학 절편화 활성화(그림 8의 경우)</td></tr></tbody></table>

en 얼굴 high-dimensional spatial molecular analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

En face Cryosectioning of Mouse Retina for High-dimensional Spatial Molecular Analysis

이 프로토콜의 성공적인 구현은 망막 표면 전체에 걸쳐 공간 관계를 유지하면서 여러 분자 프로파일링 접근 방식에 적합한 온전한 망 막 단면을 생성합니다. 당사는 기존의 면역조직화학(immunohistochemistry)에서 수동 멀티플렉스 RNA 검출을 거쳐 자동화된 고처리량 분자 프로파일링(high-throughput molecular profiling)에 이르기까지 체계적인 검증 접근 방식을 통해 프로토콜의 유용성을 입증합니다.
본 프로토콜의 초기 검증은 모든 망막 층판에 걸쳐 조직 무결성과 구조적 보존을 평가하기 위해 두 가지 잘 특성화된 마커를 사용합니다(그림 7). 망막 신경절 세포는 항-RBPMS 면역염색으로 표지되며, 혈관 구조망은 토마토 렉틴(Tomato Lectin)을 사용하여 시각화됩니다. 이 조합은 두 마커 모두 건강한 망막에서 뚜렷하고 잘 문서화된 분포 패턴을 가지고 있기 때문에 프로토콜 성...

En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

The complex laminar structure of the retina presents significant challenges for comprehensive spatial molecular mapping. Current techniques for ...

en-face-cryosectioning-mouse-retina-for-high-dimensional-spatial

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

분해 기술은 높은 처리량 화면에서 phenotyping을 수행 할 조직 고정에 대한 마우스 눈의 핵의 제거를 보여줍니다.

원격 높은 처리량 Phenotyping에 마우스 눈 핵의 제거

출처: Wang, Z., et al. Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina.  J. Vis. 특급 (2021). 이 동영상은 이광자 현미경을 사용한 in vivo 망막 이미징 기술을 보여줍니다. 마취된 마우스는 머리를 고정하고, 눈 윤활제를 바르고, 눈 위에 커버슬립을 놓아 이미징을 준비합니다. 형광 단백질을 발현하는 망막 신경절 세포(Retinal ganglion cell, RGC)는 정렬을 위해 상피형광(epifluorescence)을 사용하여 먼저 시각화됩니다. 마지막으로, 이광자 이미징이 사용되어 망막 신경절의 고해상도 시각화가 가능합니다.

마우스 망막의 Two-Photon In Vivo 이미징

여기, 우리 다운스트림 RNA 분석에 대 한 배수 채널 (TM)를 격리 하기 위한 재현성 레이저 캡처 기정 (LCM)에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. TM에 유전자 발현에 변화를 분석 하는 능력은 TM 관련 눈 질병의 근본적인 분자 메커니즘을 이해에 도움이 됩니다.

레이저 캡처 서 유전자 표정 분석에 대 한 마우스 눈에서 높은 순수 배수 채널의

쥐 망막 microvascular pericytes, 즉, cryo 섹션, 전체 마운트 및 혈관 네트워크의 침투성 절연의 immunohistochemical 시각화를 위한 3 개의 다른 조직 준비 기술을 설명합니다.

망막 Cryo-섹션, Microvascular Pericytes의 Immunohistochemical 시각화에 대 한 전체-마운트 및 소형 고립 된 맥 관 구조

이 보고는 면역성 화학을 위한 동결된 마우스 망막 단면도를 준비하기 위한 포괄적인 방법을 기술합니다 (IHC).  설명된 방법은 안구 후방 컵의 해부, 파라포름알데히드 고정, 최적 절삭 온도(OCT) 매체 및 조직 배향에 포함, 단면화 및 면역 염색을 포함한다.

면역 조직 화학을 위한 마우스 망막 극저온 단면도 단면도의 준비

생체 내 이미징은 건강 및 질병 생물학 연구를위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 표준 2 광자 현미경으로 마우스 망막의 경공 영상을 설명합니다. 또한 망막의 여러 세포 코호트를 형광으로 표지하는 다양한 생체 내 이미징 방법을 보여줍니다.

경동공 이광자 마우스 망막의 생체 내 이미징

이 프로토콜은 단백질 분석을 위해 뮤린 막대 광수용체의 세포 하부 구획을 분리하는 두 가지 기술을 제시합니다. 첫 번째 방법은 살아있는 망막과 셀룰로오스 여과지를 사용하여 막대 외부 세그먼트를 분리하는 반면, 두 번째 방법은 동결 건조 된 망막과 접착 테이프를 사용하여 막대 내부 및 외부 세그먼트 층을 제거합니다.

단백질 분석을 위한 마우스 망막에서 광수용체 세포 구획의 단리를 위한 두 가지 박리 방법

이 프로토콜은 망막의 시냅스 회로 및 단백질 국소화를 탐색하는 데 중점을 두고 면역전자 현미경을 사전 삽입하는 세부 단계를 간략하게 설명합니다.

Investigating retinal circuits and molecular localization by pre-embbedding immunoelectron microscopy (면역전자 현미경 사전 임베딩을 통한 망막 회로 및 분자 국소화 조사)

망막 혈관 구조의 주위 세포는 형광 토마토 렉틴의 역궤도 주사 후 혈소판 유래 성장 인자 수용체 β로 면역 형광 염색으로 검사했습니다. 표지된 망막은 조직 제거 방법으로 추가로 처리되었으며 컨포칼 현미경으로 망막 혈관 구조를 둘러싼 주위 세포의 3차원 보기를 시각화하기 위해 전체적으로 장착되었습니다.

Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화 

마우스 망막 동결절편을 준비하고 광수용체에서 면역염색을 수행하기 위한 프로토콜이 설명됩니다. 이 논문을 통해 연구자들은 잘 보존된 형태와 고품질 면역염색 결과를 가진 마우스 망막 동결 절편을 일관되게 생성할 수 있습니다.

마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색

배우세요 마우스 망막 동결 절편법을 통해 공간 전사체학으로 망막 신경절세포를 완전히 매핑하는 방법을. 이 기술은 신경회로 연구와 망막 질환 이해에 필수적인 고해상도 분자 분석을 가능하게 합니다.

En 얼굴 High-dimensional Spatial Molecular Analysis (고차원 공간 분자 분석을 위한 마우스 망막의 동결 절편)

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