Name: 마우스의 연수막 전이 연구를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: 학습하세요 마우스 연수막 전이 유도를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입법. 피하 경화를 통해 종양 세포를 주입하여 외두골 종양 부담을 줄이고 동물 복지를 향상시키는 이 방법은 암 전이 연구에 유용한 모델을 제공합니다.

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<ol><li>Wilcox, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+metastases+from+solid+tumors%3A+A+Society+for+Neuro-Oncology+and+American+Society+of+Clinical+Oncology+consensus+review+on+clinical+management+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal metastases from solid tumors: A Society for Neuro-Oncology and American Society of Clinical Oncology consensus review on clinical management and future directions.</a> Neuro Oncol. 26 (10), 1781-1804 (2024).</li>
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<li>Kokkoris, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+carcinomatosis.+How+does+cancer+reach+the+pia-arachnoid%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal carcinomatosis. How does cancer reach the pia-arachnoid.</a> Cancer. 51 (1), 154-160 (1983).</li>
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<li>Yin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+graded+prognostic+assessment+%28molGPA%29+model+specific+for+estimating+survival+in+lung+cancer+patients+with+leptomeningeal+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Cancer%22%5BJournal%5D)">A molecular graded prognostic assessment (molGPA) model specific for estimating survival in lung cancer patients with leptomeningeal metastases.</a> Lung Cancer. 131, 134-138 (2019).</li>
<li>Li, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+Metastases+in+Patients+with+NSCLC+with+EGFR+Mutations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Oncol%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal Metastases in Patients with NSCLC with EGFR Mutations.</a> J Thorac Oncol. 11 (11), 1962-1969 (2016).</li>
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<li>Posner, J. B., Chernik, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+metastases+from+systemic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Neurol%22%5BJournal%5D)">Intracranial metastases from systemic cancer.</a> Adv Neurol. 19, 579-592 (1978).</li>
<li>Kuiper, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+survival+of+patients+with+EGFR-mutated+non-small+cell+lung+cancer+and+leptomeningeal+metastasis%3A+A+retrospective+cohort+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Lung+Cancer%22%5BJournal%5D)">Treatment and survival of patients with EGFR-mutated non-small cell lung cancer and leptomeningeal metastasis: A retrospective cohort analysis.</a> Lung Cancer. 89 (3), 255-261 (2015).</li>
<li>Tsukada, Y., Fouad, A., Pickren, J. W., Lane, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+metastasis+from+breast+carcinoma.+Autopsy+study%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Central nervous system metastasis from breast carcinoma. Autopsy study.</a> Cancer. 52 (12), 2349-2354 (1983).</li>
<li>Singh, M., Bakhshinyan, D., Venugopal, C., Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Modeling+and+Therapeutic+Avenues+for+Cancer+Metastasis+to+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Preclinical Modeling and Therapeutic Avenues for Cancer Metastasis to the Central Nervous System.</a> Front Oncol. 7, 220(2017).</li>
<li>Shi, M. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PROTAC+EZH2+degrader-1+overcomes+the+resistance+of+podophyllotoxin+derivatives+in+refractory+small+cell+lung+cancer+with+leptomeningeal+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">PROTAC EZH2 degrader-1 overcomes the resistance of podophyllotoxin derivatives in refractory small cell lung cancer with leptomeningeal metastasis.</a> BMC Cancer. 24 (1), 504(2024).</li>
<li>Choi, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+for+leptomeningeal+dissemination+of+medulloblastoma+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging for leptomeningeal dissemination of medulloblastoma in mouse models.</a> BMC Cancer. 16 (1), 723(2016).</li>
<li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dura+immunity+configures+leptomeningeal+metastasis+immunosuppression+for+cerebrospinal+fluid+barrier+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dura immunity configures leptomeningeal metastasis immunosuppression for cerebrospinal fluid barrier invasion.</a> Nat Cancer. 5 (12), 1940-1961 (2024).</li>
<li>Boire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complement+Component+3+Adapts+the+Cerebrospinal+Fluid+for+Leptomeningeal+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Complement Component 3 Adapts the Cerebrospinal Fluid for Leptomeningeal Metastasis.</a> Cell. 168 (6), 1101-1113.e13 (2017).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis+Initiation+Is+Coupled+with+Bone+Remodeling+through+Osteogenic+Differentiation+of+NG2%2B+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Metastasis Initiation Is Coupled with Bone Remodeling through Osteogenic Differentiation of NG2+ Cells.</a> Cancer Discov. 13 (2), 474-495 (2023).</li>
<li>Louis, K. S., Siegel, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+viability+analysis+using+trypan+blue%3A+manual+and+automated+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods.</a> Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).</li>
<li>Green, T. R. F., Ortiz, J. B., Harrison, J. L., Lifshitz, J., Rowe, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Cryosectioning+of+Multiple+Rodent+Brains%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Cryosectioning of Multiple Rodent Brains.</a> J Vis Exp. (139), e58513(2018).</li>
<li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Processing+and+Hematoxylin+and+Eosin+Staining%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue Processing and Hematoxylin and Eosin Staining.</a> Methods Mol Biol. 1180, 31-43 (2014).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J Vis Exp. (61), e3742(2012).</li>
<li>Shih, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+as+a+tool+to+study+blood+flow+and+neurovascular+coupling+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).</li>
<li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat Methods. 7 (12), 981-984 (2010).</li>
<li>Wilcox, J. A., Li, M. J., Boire, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptomeningeal+Metastases%3A+New+Opportunities+in+the+Modern+Era%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Leptomeningeal Metastases: New Opportunities in the Modern Era.</a> Neurotherapeutics. 19 (6), 1782-1798 (2022).</li>
<li>Zhang, C., Lowery, F. J., Yu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+Cancer+Cell+Injection+to+Produce+Mouse+Models+of+Brain+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis.</a> J Vis Exp. (120), e55085(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5ml 에펜도르프 튜브</td><td>바이오샤프</td><td>BS-15-MS</td><td></td></tr><tr><td>15ml 원심분리기 튜브</td><td>랩셀렉트</td><td>CT-002-15A</td><td></td></tr><tr><td>31G x 8mm 인슐린 주사기(0.3ml)</td><td>약속된</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>연마 드릴</td><td>글로벌레비오</td><td>GEGZ-AM1</td><td></td></tr><tr><td>동물 열 매트</td><td>워기</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>크라이오몰드</td><td>수핀</td><td>SP-AB-7 x 7 x 5</td><td></td></tr><tr><td>제모 크림</td><td>나이르</td><td>1.00023E+11</td><td></td></tr><tr><td>D-루시페린</td><td>금 생물학</td><td>행운-1G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>깁코</td><td>C11995500CP</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>깁코</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>IVIS 스펙트럼</td><td>캘리퍼스</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>장쑤성 Hengrui 제약 유한 회사</td><td>H20193336</td><td></td></tr><tr><td>최적의 절단 온도</td><td>사쿠라</td><td>4583-1</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>SCR</td><td>80096618</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>서비스바이오</td><td>G4202-500ML</td><td></td></tr><tr><td>펜/연쇄상구균 암포테리신 B</td><td>깁코</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>면도기</td><td>히피독</td><td>2103CGMJ3373-GQ22N526</td><td></td></tr><tr><td>실체 형광 현미경</td><td>올림푸스</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>직선 집게</td><td>비요타임</td><td>FS019 시리즈</td><td>고압멸균이 필요합니다</td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>비요타임</td><td>FS001 시리즈</td><td>고압멸균이 필요합니다</td></tr><tr><td>삼각형 마우스 고정 헤드 피스</td><td>초월적인 생체경</td><td>TVS-FDM-027 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>TRITC-덱스트란, MW 70000</td><td>메드켐익스프레스</td><td>하이-158082C</td><td></td></tr><tr><td>트립신/EDTA 용액</td><td>깁코</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>2광자 레이저 주사 현미경</td><td>올림푸스</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond 티슈 접착제</td><td>3분</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>자일라진</td><td>시그마</td><td>엑스1126</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 연수막 전이 연구를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입 모델

Minimally Invasive Cisterna Magna Injection Model for Leptomeningeal Metastasis Studies in Mice

그림 1은 주사를 위한 마우스의 배치와 측면 및 정면에서 본 천공 부위를 보여줍니다. 그림 2 는 다양한 접근 방식을 통해 LM을 생성하도록 테스트된 동물의 대표적인 생체 내 생물 발광 이미지를 보여줍니다. GFP-루시페라아제 표지된 LLC1 세포를 다양한 경로를 통해 동물에 주입한 후 생물 발광 이미징을 수행했습니다. 그림 2A에서 볼 수 있듯이, 수조 내 마그나 주입 10일 후, 생물 발광 신호는 마우스의 뇌에 존재하고 척수를 따라 분포되어 연수막 공간에서 종양 세포의 성공적인 생착을 나타냅니다. 대조적으로, 종양 세포의 경동맥 내 주사는 주사 후 21일 동안 연감절에 큰 관여 없이 주로 뇌 실질 전이를 생성했습니다(그림 2B). 심장 내 주사 방법의 경우, 누운 자...

Leptomeningeal metastasis (LM), the spread of cancer cells into the cerebrospinal fluid (CSF)-filled leptomeninges, is a rare yet devastating complication ...

연수막 전이는 매우 심각하고 치명적인 형태의 전이성 질환입니다. 그 환경은 종양 세포와 고유한 조직 미세 환경 사이의 상호 작용에 따라 달라질 수 있습니다. 동물 모델에서는 기본 메커니즘을 연구하는 것이 매우 중요합니다.생체 내에서 연수막 전이를 연구하기 위해 연구자들은 일반적으로 심장내, 경동맥 내 또는 암세포를 대수조 또는 뇌실에 직접 주사하는 등의 기술을 사용합니다. 이러한 접근 방식은 LM 연구를 위한 신뢰할 수 있는 마우스 모델을 생성하는 데 도움이 됩니다. 현재의 시도에는 눈에 띄는 한계가 있습니다. 예를 들어, 심장 내 주사는 종종 연수막 공간 외부에 종양을 생성하며 LM과 관련 없는 사망으로 이어질 수 있습니다. 경동맥 접근법은 매우 침습적이고 시간이 많이 걸립니다. 이 프로토콜은 LM 모델을 빠르게 생성할 수 있습니다. 혈액뇌장벽을 우회하여 종양 세포를 연수막 공간으로 정확하게 전달하며 수술 외상과 귀중한 시간을 모두 줄여줍니다.[강사] 시작하려면 DMEM에 100만 개의 루이스 폐암 또는 LLC1 세포를 채취하고 10% 소태아 혈청과 1밀리리터당 0.1밀리그램의 페니실린-스트렙토마이신을 보충하고 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 배양합니다. 세포가 70%에서 90% 컨플루션에 도달하면 0.25% 트립신 EDTA 용액 2밀리리터를 사용하여 1분 동안 트립신화합니다. 세포를 300G에서 3분 동안 원심분리하고 얼음처럼 차가운 PBS로 두 번 세척합니다. 다시 세포를 원심분리하고 PBS 1밀리리터에 재현탁합니다. 혈구계와 트리판 블루 용액을 사용하여 생존 세포의 농도를 평가합니다. 그런 다음 얼음처럼 차가운 PBS에서 밀리리터당 200만 세포로 농도를 조정합니다. 조정된 세포 현탁액 50마이크로리터를 별도의 미세 원심분리기 튜브에 분취하여 반복적인 피펫팅을 최소화하고 주입 준비가 될 때까지 세포 현탁액을 얼음 위에 보관합니다. 쥐의 후두부 후두부 털을 면도한 후 제모 크림을 발라 같은 부위에 남아 있는 털을 완전히 제거합니다. 마우스를 엎드린 자세로 놓고 목을 15밀리리터 원심분리기 튜브 위에 올려 놓습니다. 머리와 허리를 테이프로 고정하고 검지로 후두부와 C1 척추 사이의 공간을 촉진합니다. 75% 에탄올에 적신 멸균 면봉을 사용하여 후두부 부위를 3회 닦은 후 Betadine 수술용 스크럽으로 청소합니다. 멸균 드레이프를 사용하여 동물의 비멸균 부분을 덮습니다. 세포 현탁액을 부드럽

minimally-invasive-cisterna-magna-injection-model-for-leptomeningeal

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

출처: Joshi, K., et al. 생쥐의 Cisterna magna를 통해 꼬리 뇌간과 상부 경추 척수에 미세 주입하기 위한 정위 수술 접근법. J. Vis. 경험. (2022년)이 비디오는 뇌간과 상부 척수로의 표적 전달을 위한 수조 마그나 정위 접근법을 보여줍니다. 뇌척수액으로 채워진 수조 마그나에 접근함으로써 이 접근법은 표준 정위 고정 방법을 사용하여 도달하기 어려운 부위에 정밀하게 주사할 수 있습니다.

마우스 모델에서 치료 전달을 위한 정위 수조 마그나 접근법

출처: Zamboni, M., et al., induction of leptomeningeal cells modification by cisternal injection. J. Vis. 경험. (2020년)이 비디오는 마취된 마우스의 수조에 유도 약물을 전달하는 절차를 보여줍니다. 주사는 형광 영상으로 확인된 뇌척수액을 통해 접근할 수 있는 뇌 표면 세포에서 형광 마커 발현을 선택적으로 유도합니다.

Cisterna Magna Injection을 통한 마우스 모델의 표적 약물 전달

이 비디오에서는 인간 유래 종양 세포를 쥐 뇌의 수조 마그나로 전달하는 절차를 설명합니다. 정소성 마우스 모델은 두개골 수막으로의 암의 전이성 확산을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

외과적 수조 마그나 주사: 쥐 모델의 중추 신경계에 종양 세포를 직접 투여하는 방법

여기는 시스테 마그나 cannulation (CMc), 뇌 척추 액체 (CSF)에 추적기, 기판 및 신호 분자를 제공 하는 최소 침 습 방법을 수행 하는 프로토콜에 설명 합니다. 다른 이미지 형식으로 결합, CMc glymphatic 시스템 및 CSF 역학 평가 뿐만 아니라 다양 한 화합물의 두뇌 전체 배달 수 있습니다.

설치류의 시스테 마그나에 정 맥 주입

우리는 두개골에 안정될 수 있는 끝에 바늘을 구부린, 따라서 근본적인 자렌치에 손상의 리스크를 제거하는 intracisternal 주입을 기술합니다. 이 접근법은 렙토메닝 세포의 유전적 운명 매핑 및 조작및 뇌척수액 이동 추적에 사용될 수 있습니다.

내분비주주입을 통한 렙토메닝 세포 변형 유도

두개 내 뇌 전이 모델링은 정확하고 시기 좋은 방법으로 치료에 종양 크기와 반응을 모니터링할 수 없다는 것에 의해 복잡합니다. 제시된 방법론은 자기 공명 화상 진찰 분석과 두개 내 종양 주입을 결합할 때, 정확하고 일관된 주사, 향상된 동물 감시 및 정확한 종양 부피 측정을 육성합니다.

두개 내 주입 및 자기 공명 이미징을 통해 뇌 전이를 모델링

여기에서, 우리는 기능적으로 환자에 있는 Ommaya 저수지를 닮은 murine xenograft 모형을 기술합니다. 우리는 보편적으로 치명적인 렙토멘닝에 대한 새로운 치료법을 연구하기 위해 뮤린 옴마야를 개발했습니다.

렙토메뇌질환의 직접 표적 치료를 연구하는 뮤린 옴마야 제노이식 모델

우리는 내인성 HER2 증폭 염증성 유방암 세포주의 꼬리 정맥 주사를 통해 생성된 유방암 뇌 전이의 이종이식 마우스 모델을 설명합니다.

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

본 프로토콜은 종양 세포를 추간 공간에 주입하여 척수 신경교종의 재현 가능한 쥐 모델을 개발하는 방법을 설명하며, 연구 및 치료 개발을 위한 보다 효과적이고 덜 침습적인 접근 방식을 제공합니다.

종양 세포를 마우스의 척수에 외과적 이식

여기서는 여러 신경학적 질환에서 중요한 역할을 하는 마우스 수막 림프관(MLVs)을 평가하는 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜의 목표는 추적자 배수의 기능적 평가와 등쪽 MLVs 네트워크의 상세한 형태학적 특성화를 모두 가능하게 하는 통합 방법을 제공하는 것입니다.

수막 림프관 평가를 위한 통합 프로토콜: 흉부 주사, 림프절 영상, 수막 박리, 전면 착색

학습하세요 마우스 연수막 전이 유도를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입법. 피하 경화를 통해 종양 세포를 주입하여 외두골 종양 부담을 줄이고 동물 복지를 향상시키는 이 방법은 암 전이 연구에 유용한 모델을 제공합니다.

마우스의 연수막 전이 연구를 위한 최소 침습적 수조 마그나 주입 모델

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