Name: Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-27T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: 배우세요 Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양을 생성하는 방법입니다. 균일한 세포 집단에서 Wolbachia 표현형을 연구하고 실험 변이성을 최소화하여 재현성 있는 결과를 얻을 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; M 주사기 플리터&NBSP; &nbsp;</td><td>TPP</td><td>99722</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>10x 인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>70011044</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>12 또는 18mm 원형 커버 유리&nbsp;</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon 튜브</td><td>제노플라스트</td><td>601052</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>사이토원</td><td>CC7682-7524</td><td>조직 배양 처리</td></tr><tr><td>5 & 마이크로; M 주사기 필터</td><td>왓맨</td><td>10462000</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>6-웰 플레이트</td><td>사이토원</td><td>CC7682-7506</td><td>조직 배양 처리</td></tr><tr><td>96웰 플레이트</td><td>사이토원</td><td>CC7682-7596</td><td>조직 배양 처리</td></tr><tr><td>아가로스</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>제66501.30</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크, 25cm2</td><td>그라이너 바이오 원</td><td>391-3103</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>셀 스크레이퍼&nbsp;</td><td>그라이너 바이오 원</td><td>391-3010</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>투명 매니큐어&nbsp;</td><td>모든 브랜드</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CryoPure 바이알</td><td>사르슈테트</td><td>72.379</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>DMSO, 세포 배양 등급</td><td>머 크</td><td>D2650-100ML</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>DreamTaq PCR 마스터 믹스</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>K1081</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>머 크</td><td>324503-100GM</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>전기영동 전원 공급 장치</td><td>머 크</td><td>추신 251-2</td><td></td></tr><tr><td>에펜도르프&nbsp; 집중 장치 플러스</td><td>머 크</td><td>EP5305000509</td><td>모든 브랜드의 진공 농축기를 대신 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>머 크</td><td>1009861000</td><td></td></tr><tr><td>EVOS M5000 이미징 시스템</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>AMF5000</td><td>모든 브랜드의 도립 현미경을 사용하여 클론 진행을 모니터링할 수 있습니다. FISH를 시각화하려면 형광 현미경이 필요합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>태아 소 세럼</td><td>머 크</td><td>F9665</td><td>열 비활성화</td></tr><tr><td>포름알데히드&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>047377.9엘</td><td></td></tr><tr><td>포름아미드&nbsp;</td><td>머 크</td><td>F7503-100ML</td><td></td></tr><tr><td>겔 전기영동 탱크</td><td>클리버 사이언티픽</td><td>엠스미디</td><td></td></tr><tr><td>겔 이미저</td><td>바이오래드</td><td>12009077</td><td>GelDoc Go 겔 이미징 시스템</td></tr><tr><td>GeneRuler 100 bp DNA 사다리</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>SM0243</td><td></td></tr><tr><td>가열 블록</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>88870005</td><td></td></tr><tr><td>Herasafe 2025 클래스 II 생물학적 안전 캐비닛</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>51033314</td><td>모든 브랜드의 생물학적 안전 캐비닛은 내부의 멸균 환경을 유지하는 한 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 용액 (20 mM) 5 mL</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>62249</td><td>어둠 속에 보관하십시오.</td></tr><tr><td>염산</td><td>머 크</td><td>258148-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>인테그라 바이오사이언스 코퍼레이션&nbsp; PIPETBOY acu 2 피펫 보조 장치</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>NC0085686</td><td>모든 브랜드의 혈청학적 피펫 제어기를 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>이소프로파놀</td><td>머 크</td><td>I9516-1L</td><td></td></tr><tr><td>실험실 냉동고</td><td>&nbsp; 립헤르&nbsp;</td><td>LGUex 1500 메디라인</td><td>일정한 온도를 유지할 수 있는 모든 냉동고가 적합합니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>액체 질소 탱크</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>CY50985</td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>머 크</td><td>CLS294875X25-72개</td><td></td></tr><tr><td>분자 등급 물</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>다중 채널 피펫</td><td>에펜도르프</td><td>3125000036</td><td></td></tr><tr><td>나노드롭</td><td>페클랩</td><td>ND-1000 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>노이바우어 혈구측정기</td><td>머 크</td><td>BR717810-1개</td><td></td></tr><tr><td>파라필름&nbsp; M 씰링 필름</td><td>머 크</td><td>HS234526B-1개</td><td></td></tr><tr><td>펠티에 냉각 인큐베이터</td><td>멤머트</td><td>IPP55플러스</td><td>일정한 25를 유지할 수 있는 인큐베이터가 있습니까? C가 적합합니다. JW18 세포주 또는 그 클론에는 CO2 대조군이 필요하지 않습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>페놀/클로로포름/이소아밀 알코올(25:24:1)</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>327115000</td><td></td></tr><tr><td>피펫 세트</td><td>에펜도르프</td><td>EP2231300008</td><td></td></tr><tr><td>아세트산칼륨</td><td>머 크</td><td>P1190-500G</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>퀘이사&nbsp; 670 태그 16s rRNA FISH 프로브&nbsp; 집합</td><td>바이오서치 기술</td><td></td><td>맞춤 제작된 프로브 시퀀스는 표 1에서 찾을 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>냉장 마이크로 원심분리기</td><td>랩넷</td><td>C2500-R</td><td></td></tr><tr><td>RPL32 프라이머 포워드 5'-CCGCTTCAAGGGACAGTATC-3'</td><td>유로핀스 유전체학</td><td></td><td>논문에 인용된 참고 문헌을 기반으로 맞춤 제작</td></tr><tr><td>RPL32 프라이머 리버스 5'-CAATCTCCTTGCGCTTCTTG-3'</td><td>유로핀스 유전체학</td><td></td><td>논문에 인용된 참고 문헌을 기반으로 맞춤 제작</td></tr><tr><td>SDS</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>AM9823</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>혈청학적 피펫</td><td>코 닝</td><td>357771</td><td></td></tr><tr><td>Shields and Sang M3 곤충 미디엄</td><td>머 크</td><td>S8398</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH 혼성화 완충액&nbsp; &nbsp;</td><td>바이오서치 기술</td><td>에스엠에이프-HB1-10</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH 세척 완충액 A&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>바이오서치 기술</td><td>SMF-WA1-60</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>Stellaris RNA FISH 세척 완충액 B&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>바이오서치 기술</td><td>에스엠에이프-WB1-20</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>멸균 시약 저장소&nbsp;</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>8094</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>TAE 버퍼</td><td>머 크</td><td>1061741000</td><td>1x&nbsp;</td></tr><tr><td>TE 버퍼&nbsp;</td><td>머 크</td><td>93283</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>열 순환기</td><td>신젠바이오텍</td><td>써모블록 96</td><td>대신 모든 브랜드의 열 순환기를 사용할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>트리스 베이스</td><td>머 크</td><td>10708976001</td><td>메 마른</td></tr><tr><td>초저온 냉동고</td><td>PHC 법인&nbsp;</td><td>MDF-DU502VH-PE</td><td>-80을 유지할 수 있는 실험실 냉동고는 무엇입니까? C를 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Vectashield 마운팅 매체&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>벡터 연구소</td><td>H-1000-10</td><td></td></tr><tr><td>wsp 프라이머 포워드 5'-TGGTCCAATAAGTGATGAAGAAAC-3'</td><td>유로핀스 유전체학</td><td></td><td>논문에 인용된 참고 문헌을 기반으로 맞춤 제작</td></tr><tr><td>wsp 프라이머 리버스 5'-AAAAATTAAACGCTACTCCA-3'</td><td>유로핀스 유전체학</td><td></td><td>논문에 인용된 참고 문헌을 기반으로 맞춤 제작</td></tr></tbody></table>

wolbachia에 감염된 drosophila melanogaster jw18 세포주에서 단클론 배양 생성

Generation of Monoclonal Cultures from Wolbachia-infected Drosophila melanogaster JW18 Cell Line

단일 세포 현탁액 및 도금을 준비하는 날(0일차)부터 연속 세포주 확립(45일 또는 77일차, 그림 2)까지 광학 현미경으로 단클론 배양을 확립하는 과정을 시각화했습니다. 세포 분열의 첫 징후는 웰당 이미 4개의 세포가 있는 3일째(도금 후 4일, 도금은 0일에 수행됨)에 관찰되었습니다(그림 2). 14일째에 클론은 단층(JW18-B9, C7 및 E5) 또는 구(JW18-G4)로 성장했는데, 이는 통과 중에 중단되었습니다. 28일째에는 세포주 간 성장의 차이가 가장 뚜렷했습니다. JW18-C7 배양은 45일째에 합류한 반면, 나머지 클론 배양은 77일째에야 확립되었습니다. 또한 세포 형태의 차이를 포착하기 위해 확립 후 30개의 다른 배양을 시각화했습니다(그림 3).
단클론 배양의 Wolbachia 감염 상태를 확인하기 위해 PCR(그림 4) 및 FISH(그림 5)를 수행했습니다. 우리는 하나의 클론(JW18-C7)을 제외한 모든 클론이 wsp 유전자에 대한 띠를 생성하는 것을 관찰했으며, 이는 Wolbachia 감염을 나타냅니다. FISH는 PCR 결과를 확증했다: 클론 JW18-B9, JW18-E5 및 JW18-G4는 볼바키아 감염을 유지한 반면, 클론 JW18-C7은 볼바키아를 가지고 있지 않았다. 전반적으로, 혼합된 JW18 세포 집단에서 4개의 클론 배양을 확립할 수 있었으며, 그 중 3개는 원래의 Wolbachia 감염을 유지했습니다. 원시 데이터는 Figshare에서 액세스할 수 있습니다. https://figshare.com/s/15fde47ca7338f31dda9.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig1.jpg"> 
그림 1: 단클론 배양 생성을 위한 워크플로우. (A) 96웰 플레이트의 1차 및 2차 희석액. (B) 연속 희석 후 단일 세포. (씨-E) 세포의 증식 및 96웰에서 24웰 및 6웰 플레이트로의 이동의 진행. (F) 25cm2 세포 배양 플라스크에서 연속 배양. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig2.jpg"> 
그림 2: JW18 클론 세포주가 단세포에서 다세포 배양으로 진행됨. 0일(도금 당일)부터 77일째까지, 25cm2 세포 배양 플라스크에서 모든 라인이 성공적으로 확립된 클론 라인의 명시야 이미지. 눈금자 = 25μm(0일차), 50μm(3일차), 150μm(14일차), 300μm(28일, 45일, 77일). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig3.jpg"> 
그림 3: 개별 JW18 클론 계통의 형태. 확립 후 통로 30에서 세포 형태를 보여주는 클론 라인의 명시야 이미지. 스케일 바 = 50μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig4.jpg"> 
그림 4: PCR로 조사한 클론 배양의 Wolbachia 상태. JW18 모세포주 및 클론 라인 JW18-B9, JW18-C7, JW18-E5 및 JW18-G4에서 Wolbachia에 대한 PCR(통로 11 설립 후 발굴). Wolbachiawsp band는 Wolbachia의 존재를 확인하고 Drosophilarpl32 band는 DNA 품질 관리 PCR입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68207/68207fig5.jpg"> 
그림 5: FISH가 조사한 클론 배양의 Wolbachia 상태.JW18 모세포주 및 클론 JW18-B9, JW18-C7, JW18-E5, JW18-G4는 확립 후 통로 13에서 FISH 염색에 의해 시각화되었습니다. Wolbachia는 마젠타색으로 설정된 Quasar 670 태그가 지정된 16s rRNA Stellaris FISH 프로브로 염색되고 핵산은 청록색의 Hoechst 33342로 염색됩니다. 스케일 바 = 25μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/68207fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 표 S1: Wolbachia w Mel 16S rDNA에 대해 설계된 올리고뉴클레오티드 프로브 및 Schneider 등에 의해 발표된 프로브와의 비교.42. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68207/Table%20S1.%20Stellaris%20probe%20set%20_16052025.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성

Cell lines are widely used models in biological research. They are particularly useful in studies of intracellular bacteria that cannot be efficiently ...

generation-monoclonal-cultures-from-wolbachia-infected-drosophila

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Drosophila의 hemocytes은 개발 배아의 전체를 통해 분산. 이 프로토콜은 찬란 표시된 hemocytes와 배아를 사용하여 이러한 마이 그 레이션을 마운트 및 이미지하는 방법을 보여줍니다.

라이브 영상 Drosophila melanogaster 배아 Hemocyte 마이 그 레이션

우리는에서 dissociated 기본 세포를 준비 상세한 프로토콜을...

에서 기본 셀 문화 Drosophila Gastrula의 태아

Drosophila melanogaster는 선천성 면역 체계와 감염 및 질병의 생리학적 결과를 연구하기 위한 뛰어난 모델 유기체입니다. 이 프로토콜은 강력하고 정량적으로 반복 가능한 박테리아 감염을 D. melanogaster에 전달하는 방법과 이후에 감염 중증도를 측정하고 숙주 면역 반응을 정량화하는 방법을 설명합니다.

전신 세균 감염 및 면역 방어 표현형에<em&gt; 초파리 melanogaster의</em

무균 및 무균 조건에서 초파리 melanogaster의를 양육하는 방법이 제공된다. 플라이 배아는, 차아 염소산 나트륨에 dechorionated 멸균 다이어트에 무균 적으로 전송하고, 밀폐 용기에 양육된다. 박테리아와식이 요법과 배아를 접종은 무균 협회에 이르게하고, 세균의 존재는 전신 초파리 균질 도금에 의해 확인된다.

과일 비행을 양육<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 무균 및 무균 조건에서

미토콘드리아 기능의 조절 메커니즘에 대한 철저한 이해를 위해서는 미토콘드리아 구조-기능 관계에 대한 분석이 필요합니다. 살아 있고 고정된 초파리 난소에서 미토콘드리아 구조와 기능을 연구하는 구체적인 방법이 이 논문에 설명되어 있고 시연됩니다.

에서 미토콘드리아의 구조와 기능을 연구 초파리 난소

이 메서드는 3 차원 (3D) 모델 곤충 세포로 병원 체 침입을 시각화 하는 방법을 보여 줍니다. 초파리 애벌레에서 hemocytes 바이러스 성 또는 세균성 병원 체, ex vivo 또는 vivo에서감염 되었습니다. 감염 된 hemocytes 다음 고정 되었고 confocal 현미경 및 후속 3D 셀룰러 재건 이미징 스테인드.

미생물 감염 및 분석에 대 한 초파리 melanogaster 애벌레에서 Hemocytes의 추출

이 프로토콜에는 vivo에서 바이러스 감염 초파리 melanogaster 나노 주입 방법 기본적인 기법을 사용 하 여 바이러스-호스트 상호 작용을 분석 하에 설정 하는 방법을 설명 합니다.

바이러스 성 감염 및 초파리 Melanogaster 상호 작용 호스트-바이러스의 분석의 설립

Drosophila 셀 라인은 기본 및 생물 의학 연구를 위한 중요 한 시 약. 이 문서는 녹고, subculturing, 및 그들의 연구에서이 약의 사용을 통합 연구원을 지원 하기 위해 일반적으로 사용 되 초파리 셀 라인의 cryopreservation 프로토콜을 제공 합니다.

녹고, 경작, 그리고 초파리 셀 라인 Cryopreserving

초파리 멜라노가스터 성인 파리는 숙주 항미생물 선천적 면역 반응 및 미생물 감염 전략의 기초가 되는 분자 메커니즘을 조사하기 위한 모델 유기체로서 광범위하게 활용되고 있다. D. melanogaster 유충 단계를 추가 또는 대안 모델 시스템으로서 촉진하기 위해, 애벌레 주입 기술이 기술된다.

초파리 멜라노가스터 유충 주입 프로토콜

여기에서는 초파리 난소 틈새 시장에서 생식세포 줄기세포(GSC)의 비대칭 분열에 대한 실시간 이미징을 수행하기 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 우리는 분광 단백질 Par-1의 녹색 형광 단백질(GFP) 융합을 유비쿼터스하게 발현하는 형질전환 라인을 사용합니다.

여성 Drosophila melanogaster 생식세포 줄기세포 틈새의 확장된 라이브 이미징

배우세요 Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양을 생성하는 방법입니다. 균일한 세포 집단에서 Wolbachia 표현형을 연구하고 실험 변이성을 최소화하여 재현성 있는 결과를 얻을 수 있습니다.

Wolbachia에 감염된 Drosophila melanogaster JW18 세포주에서 단클론 배양 생성

더 많은 동영상 탐색