Name: AAV2의 지주막하 주입에 의한 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 배우세요 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입을 위한 AAV2 지주막하 주입법을. 이 기법은 전통적 주입 대비 4배 넓은 감염 영역을 제공하며 제5층 피라미드 뉴런 선택적 발현을 가능하게 합니다.

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<table><tbody><tr><td>장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 & 마이크로; L 기밀 주사기 모델 1701 RN (5 uL 75 RN Hamilton 마이크로 주사기)</td><td>해밀턴 컴퍼니</td><td>부품/REF # 7634-01, 해밀턴 또는 고양이 번호. HAM7634-01, 머크</td><td></td></tr><tr><td>33G RN 바늘, 포인트 스타일 3</td><td>해밀턴 컴퍼니</td><td>부품/REF # 7803-05, 해밀턴</td><td></td></tr><tr><td>쌍안경 현미경</td><td>니콘 또는 마이크로메드</td><td>모델 MC-4 ZOOM</td><td></td></tr><tr><td>Cerna 기반 레이저 스캐닝 공초점 현미경</td><td>토르랩스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>차가운 광원</td><td>RWD</td><td>모델 76312</td><td></td></tr><tr><td>라이카 VT1000 S 진동 블레이드 마이크로톰</td><td>라이카 바이오시스템즈</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>저유량 마취 시스템(스타터 키트 포함)</td><td>켄트 사이언티픽 코퍼레이션</td><td>13-005-111 (모델 SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>기계식 피펫 0.1 &ndash; 2.5 및 마이크로; L Eppendorf Research plus</td><td>에펜도르프</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>기계식 피펫 10 &ndash; 100 & 마이크로; L Eppendorf Research plus</td><td>에펜도르프</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>마우스 면도기</td><td>RWD</td><td>모델 CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>드릴 비트가 있는 마이크로드릴(0.5mm, 원형)</td><td>RWD</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>또는 Desctop 디지털 정위 고정 기기, 마우스 마취 마스크, 마우스 이어바(60도)</td><td>RWD</td><td>모델 68027, 68665, 68306</td><td></td></tr><tr><td>공기 압축기</td><td>밤비</td><td>BB8</td><td></td></tr><tr><td>단일 채널 수동 피펫 0.5-10 및 마이크로; L</td><td>레인</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>작은 동물 정위 고정 장치</td><td>코프</td><td>모델 962</td><td></td></tr><tr><td>정위 인젝터</td><td>스톨팅</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td><강함>수술 기구(도구)</강함></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30G 치과용 바늘(Ni-pro)</td><td>바이오덴트 주식회사</td><td></td><td>경막을 자르기 위해</td></tr><tr><td>뼈 스크레이퍼</td><td>정밀 과학 도구</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>뼈 펜치</td><td>정밀 과학 도구</td><td>16025-14</td><td>두개골을 제거하려면</td></tr><tr><td>곡선 주걱</td><td>Mozhaisk 의료 용품 공장</td><td></td><td>두개골 천장에서 뇌를 제거하려면</td></tr><tr><td>치과용 버</td><td>드렌델 + 츠바일링</td><td></td><td>개두술의 경우; 모양: 배 모양/둥근 끝 실린더/원형; 팁 직경: 0.55-0.8mm 직경</td></tr><tr><td>바늘 홀더(Halsey Micro Needle Holder)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>폴리프로필렌 수술용 봉합사 또는 수술용 봉합사 Vicryl(5-0, 흡수성)</td><td>월터 제품(에티콘)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>메스 칼날이 있는 메스 손잡이(#3)(#11)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>가위 (Extra Narrow Scissors)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14088-10</td><td>피부를 자르기 위해</td></tr><tr><td>가위 (Fine Scissors)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14094-11</td><td>봉합사를 자르다</td></tr><tr><td>수술용 봉합사 PROLENE(폴리프로필렌)</td><td>Ethicon(Johnson & 존슨)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>핀셋(집게#5)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>핀셋(광택 Inox 집게)</td><td>정밀 과학 도구</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td>일회용품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1mL 인슐린 주사기</td><td>사이트메드</td><td></td><td>바셀린 오일을 마이크로 주사기에 넣거나 약물을 투여하기 위해</td></tr><tr><td>세포 배양 플레이트</td><td>SPL 생명과학</td><td></td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>커버 안경</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>인슐린 주사기 바늘 (27g)</td><td>사이트메드</td><td></td><td>구멍에서 파편을 제거하려면(개두술)</td></tr><tr><td>보푸라기 없는 물티슈 CLEANWIPER</td><td>넷링크</td><td></td><td></td></tr><tr><td>현미경 슬라이드</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>종이 타월</td><td>루스칸</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라필름</td><td>스탯랩</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>멸균 수술용 장갑</td><td>더마그립</td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기 필터(0.2 & m)</td><td>코 닝</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td><강함>의약품/화학물질(시약)</강함></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% 완충 포르말린 또는 4% 파라포름알데히드</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>J61899입니다. AK</td><td></td></tr><tr><td>요오드 알코올 용액(5%))</td><td>갱신</td><td></td><td></td></tr><tr><td>항생제 연고 바네오신(바시트라신 + 네오마이신)</td><td>산도스</td><td></td><td>외용 항균제</td></tr><tr><td>아쿠아 폴리마운트</td><td>폴리사이언스</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbomer Eye Gel Vidisic (안과용 젤)</td><td>바우쉬+LOMB(산텐)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>카르복실레이트 변형 FluoSphere 마이크로스피어(빨간색)</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>F-8801</td><td></td></tr><tr><td>덱사메타손(4mg/mL)</td><td>엘라라(KRKA)</td><td></td><td>합성 글루코코르티코이드</td></tr><tr><td>증류 H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>에탄올 (70%)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>플렉소프로펜 2.5%(케토프로펜)</td><td>빅</td><td></td><td>비스테로이드성 항염증제(NSAID)</td></tr><tr><td>포도당 용액 5%</td><td>솔로팜</td><td></td><td></td></tr><tr><td>염소 항토끼 IgG(H+L) 교차 흡착, Alexa Fluor 546</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>카리주</td><td></td><td></td></tr><tr><td>리도카인 용액(2% / 4%)</td><td>솔로팜</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일반 염소 혈청(NGS)</td><td>아브캠</td><td>AB7481</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>에코 서비스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>토끼 항-파르브알부민 항체</td><td>머크 밀리포어</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>토끼 재조합 단클론 항-칼빈딘 항체</td><td>아브캠</td><td>AB108404</td><td></td></tr><tr><td>식염수(H2O의 0.9% NaCl)</td><td>솔로팜</td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마-알드리치</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>바셀린 오일</td><td>제넬</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

aav2의 지주막하 주입에 의한 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

일련의 파일럿 실험에서 우리는 CaMKII 프로모터 아래에서 EGFP 형광 단백질과 융합된 빠른 채널로돕신(oChIEF) 유전자를 운반하는 AAV2에 의해 마우스 신피질의 5층 피라미드 뉴런을 형질전환하기 위해 전통적인 피질내 주입 방법을 사용했습니다. AAV212의 특징과 일치하게, 우리는 너비가 1mm를 초과하지 않는 비교적 작은 감염 영역을 얻었습니다(그림 1A). 그러나 일부 실험에서는 AAV2가 비정상적으로 크게 퍼지는 것을 관찰했으며, 일부 사례에서는 뇌 반구의 절반 이상의 신피질을 덮고 있었습니다(그림 1B). 우리는 바이러스가 지주막하 공간으로 들어가고 뇌척수액(CSF) 흐름이 바이러스 벡터를 뇌 표면 전체에 퍼뜨릴 때 이러한 광범위한 바이러스 분포가 발생할 수 있다는 가설을 세웠습니다. 우리는 주사 바늘 삽입 깊이가 작고(&lt;200μm) 경막 소...

AAV2의 지주막하 주입에 의한 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기서 우리는 시각 피질의 뉴런과 glia의 형광 라벨에 대한 AAV 벡터의 intracranial 주사를 제시한다.

Adeno - 관련 바이러스성 벡터의 Intracranial 분사

출처: Li, D., et al. 성인 마우스에서 재조합 아데노 관련 바이러스의 직접 척수강내 주사. J. Vis. 경험. (2019년)이 비디오는 깨어 있는 마우스의 뇌척수액(CSF)에 아데노 관련 바이러스(AAV)를 척수강내 주사하는 절차를 보여주며 주사기 준비, 척추 정렬 및 정확한 바늘 삽입을 다룹니다. 이 방법은 표적 유전자 전달을 검증하여 CNS 치료의 잠재력을 뒷받침합니다.

중추신경계 질환 치료를 위한 마우스 모델에서 바이러스의 척수강내 전달

바이러스 성 벡터는 타겟 유전자 조작을 위해 수 있습니다. 우리는 등쪽 뿔에 바이러스 벡터의 stereotaxic 주입, 기본 somatosensory afferents 및 중추 신경계의 뉴런 사이의 시냅스 접촉의 눈에 잘 띄는 사이트를 사용하여 조건부 유전자 발현 또는 마우스 척추 절제하는 방법을 보여줍니다.

마우스 척추 조건부 유전자 조작을위한 바이러스 성 벡터의 Stereotaxic 주입

지난 15년 동안 개 아데노바이러스 2형(CAV2) 유래 벡터는 in vitro 및 in vivo 세포를 transduction하는 효율성이 입증되었으며 백신 접종 및 유전자 치료에 널리 사용됩니다. 여기에서는 CAV2 벡터를 생성, 생산 및 정제하여 high-titer 바이러스 현탁액을 생성하는 절차를 설명합니다.

Non Replicative Canine Adenovirus Type 2 유래 벡터의 생산 및 정제

여기서 우리는 신생아 마우스 뇌에 아데노 관련 바이러스를 뇌실 내 주입하여 광범위한 신경 세포 전달을 위한 기술을 보여줍니다.  이 방법은 바이러스로 전달된 transgenes의 평생 발현을 달성하는 빠르고 쉬운 방법을 제공합니다.

영구와 광범위한 신경 세포의 형질 도입에 대한 신생아 마우스 뇌의 뇌실 바이러스 감염

이 비디오는 Thy1-GFP 형질전환 라인에서 생체 내 2광자 현미경을 사용하여 마우스 후비장 피질의 뉴런을 만성적으로 이미징할 수 있는 개두술 절차를 보여줍니다. 이 접근법은 mCherry 발현 아데노 관련 바이러스를 배측 해마에 주입하는 것과 결합됩니다. 이러한 기술을 통해 RSC에서 경험 의존적 구조적 가소성을 장기간 모니터링할 수 있습니다.

동시에 두 광자<em&gt; 생체</em&gt; 마우스 Retrosplenial 코어 텍스에서 시냅틱 입력의 이미징 및 시냅스 대상

본 연구의 목적은 성인 생쥐에서 새로운 subpial 유전자 전달 기술을 사용하여 척수 adeno-associated virus 9 (AAV9) 매개 유전자 전달의 효능과 안전성을 개발하고 검증하는 것이었다.

성인 쥐의 Subpial Adeno-associated Virus 9 (AAV9) 벡터 전달

Intraspinal 주입 recombinase 종속 재조합 형 adeno 관련 바이러스 (rAAV)의 척수에서 모든 유전자 이라는 셀 형식을 조작 하 사용할 수 있습니다. 여기 우리가 transduce 요 추 척수의 등 쪽 뿔에 신경 하는 방법을 설명 합니다. 이 기술은 조작된 신경 하위의 기능 심문 수 있습니다.

척수의 유전으로 정의 된 신경에 있는 Adeno 관련 바이러스 중재 Transgene 식

여기에 우리가 작은 동물에 게 효율적인 adeno 관련 바이러스 전달 되도록 하 여 중앙에서 변환 효율 예측 점수 시스템 구축 바이러스 솔루션에서 1 %lidocaine 염 산 염을 사용 하 여 직접 intrathecal 사출 기법 제시 lidocaine에 의해 유도 된 과도 함의 정도 따라 신경 시스템.

성인 쥐에 있는 재조합 형 Adeno 관련 바이러스의 직접 Intrathecal 주입

이 프로토콜은 전방 화학 유전 변형제를 체성 운동 피질에 주입하고 역행 수송 가능한 Cre 재조합 효소를 자궁 경부 척수에 주입하여 출생 후 5-10 일에 신생아 쥐의 세포 하위 집단에 유전자 요법을 적용하는 새로운 방법을 보여줍니다.

뇌 및 척추 결합 수술을 사용하여 이중 바이러스 벡터로 신생아 쥐의 피질척수관 표적화

이 프로토콜은 피질 허혈성 뇌졸중 후 Neurod1의 바이러스 매개 이소성 발현을 설명합니다. Neurod1은 (1) 뇌졸중 후 아급성기(7일) 동안 야생형 마우스에서 Cre-Flex AAV 시스템을 사용하여 전달되고 (2) 뇌졸중 후 만성기(21일) 동안 조건부 리포터 마우스에서 단일 AAV 벡터를 사용하여 전달됩니다.

허혈성 뇌졸중 후 아급성 및 만성 시기에 형질도입된 세포에서 Neurod1의 이소성 발현을 조사하기 위한 AAV 시스템 및 마우스 모델

배우세요 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입을 위한 AAV2 지주막하 주입법을. 이 기법은 전통적 주입 대비 4배 넓은 감염 영역을 제공하며 제5층 피라미드 뉴런 선택적 발현을 가능하게 합니다.

AAV2의 지주막하 주입에 의한 마우스 신피질 뉴런의 광범위한 형질도입

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