Name: 씹는 곤충에 A.의 thaliana의 저항을 테스트하기 위해 선택과 노 - 선택 Assays (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:15:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: 배우세요 Arabidopsis thaliana를 이용한 선택 및 비선택 실험으로 Pieris rapae 저항성을 평가하는 방법을. 식물 호르몬과 독성 화합물이 해충 방어에 미치는 영향을 연구합니다.

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선택의 여지가 실험도 : <ol><li> 조심스럽게 플라스틱 컵에 대한 관심의 Arabidopsis 공장을 묶으십시오. 이 경우 : 콜 - 0 (WT)와 JA의 생산에 장애인 돌연변이. 당신이 나뭇잎에 손상을 제한 있는지 확인하십시오. 그걸 위해서는이 페인트의 뒷면을 사용합니다. </li><li> 양배추에있는 식민지에서 갓 부화 유충을 위해 좋은 페인트를 사용하십시오. </li><li> Arabidopsis 식물에 유충을 조심스럽게 넣습니다. </li><li> 일 4, 7, 10 중량 유충. 팁 : 식물 성장 (1 유충 1 공장의 전체 생명주기를 수행 수) 증가 짧은 하루 조건 (8 시간 조명) 아래 식물을 성장. </li></ol> 선택 실험 : <ol><li> 두 식물은 각각의 유전자형 중 하나를 선택합니다. 베스트는 트레이 효과 같은 다른 요인 등을 제한 같은 냄비에 식물을 성장하는 것입니다 </li><li> 나비 케이지에있는 식물을 놓으십시오. </li><li> 비옥한 여성을 선택합니다. 난 보통 적극적으로 양육 식민지에서 알을 누워있는 여자를 잡으. </li><li> 24 시간을위한 두 식물의 선택은 새장에있는 여성을 풀어주고있다. </li></ol> 팁 1 : 학습의 영향을 제거하기 위해, 이후의 선택 시험에 대한 여자를 재사용하지 않습니다. 팁 2 : 하나는 비슷한 성장 표현형을 가지고 식물을 비교할 수 있습니다. 또는, 당신은 Erlenmeyer 플라스크 위에 각 유전자형에서 나뭇잎을 탑재하고 여성들의 매력을 비교해 볼 수있을 텐데. 방문하십시오 <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">식물 생물학의 연간 리뷰</a> 곤충 herbivory이 프로토콜과 식물 면역에 대한 자세한 내용은.

씹는 곤충에 a.의 thaliana의 저항을 테스트하기 위해 선택과 노 - 선택 assays

Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects

작은 흰 배추 나비의 유충은 농업 설정에서 해충입니다. 이 애벌레의 종류가 같은 양배추 많은 작물을 포함 양배추 가족 식물에서 피드, 곤충의 브로콜리, Val Thorens 호텔 콩나물 등 리어링은 온실의 양배추 식물에 이루어집니다. 최소한 두 케이지는 피에리스 rapae의 양육을 위해 필요합니다. 애벌레와 어른, 나비를 포함하는 다른 하나는. 식물 호르몬이 곤충 해충에 대한 저항의 유해 식물 화학 물질의 역할을 조사하기 위해 두 실험을 보여줍니다. 첫째, jasmonic 산성 (JA - 자주 곤충에 대한 저항에 표시된 식물 호르몬)의 역할 결정 씹는 곤충 피에리스 rapae에 저항 인치 캐타필러 성장 JA 생산에 장애인 야생 타입과 돌연변이 식물에 비교할 수 있습니다. 애벌레가 합성 또는 JA에서 결함있는 단일 공장에서 존속하도록 강요되기 때문에이 실험은, &quot;아무도 선택&quot;으로 간주되지 않습니다. 둘째, 우리는 산란 (달걀 부설) 신호로 사용됩니다 glucosinolates의 역할을 조사 실험을 보여줍니다. 여기서 우리는 여성의 나비가 두 유전자형의 식물에 자신의 알을 낳기 위해 선택할 수있는 &quot;선택&quot;실험에 glucosinolate 생산​​ 장애인 WT 및 돌연변이 Arabidopsis을 사용합니다. 이 비디오는 두 assays뿐만 아니라 대표적인 결과에 대한 실험 설정을 보여줍니다.

씹는 곤충 herbivores 식물의 저항은 여러 가지 방법으로 테스트할 수 있습니다. 여기, 우리는 선택과 해충 종 피에리스 rapae에 대한 저항을 식별하는 모델 식물 Arabidopsis thaliana의와 노 선택 실험을 셋업하는 방법을 보여줍니다.

씹는 곤충에 A.의 thaliana의 저항을 테스트하기 위해 선택과 노 - 선택 Assays

배추흰나비의 유충은 농업 환경에서 해충으로 분류됩니다. 이 나비목 유충 종은 배추과 식물을 먹이로 하며, 이는...

소배추흰나비(Pieris rapae)의 유충은 농업 환경에서 해충으로 분류됩니다. 이 나비의 애벌레는 배추, 브로콜리, 방울양배추 등 다양한 작물을 포함한 십자화과 식물을 섭식합니다. 흥미롭게도 식물은 초식 곤충에 대해 저항성을 진화시킬 수 있으며, 본 영상에서는 두 가지 방법을 통해 모델 식물 종인 애기장대(Arabidopsis thaliana)가 이 곤충에 대해 가지는 저항성을 테스트하겠습니다.안녕하세요, 저는 Bo Thompson 계획 연구소의 George Jander 실험실에서 박사후 연구원으로 재직 중인 Martin Navos입니다. 오늘은 해충 섭식에 대한 저항성을 연구하기 위해 모델 식물인 Arab Opsis Ana를 이용한 선택 및 비선택 실험을 설정하는 방법을 보여드리고자 합니다.애벌레 사육은 온실 내 양배추 식물에서 진행합니다. 사육을 위해 최소 두 개의 케이지가 필요합니다. 하나는 유충용으로 준비하고, 다른 하나에는 성충인 나비를 넣어 식물 호르몬과 독성 식물 화학 물질의 관여를 입증합니다.이 곤충 저항성 테스트와 관련하여, 두 가지 실험을 시연하고자 합니다. 첫 번째는 곤충 저항성에 자주 관여하는 것으로 알려진 식물 호르몬인 jasmonic acid의 역할을 규명하는 실험입니다.선택권이 없는 실험(no choice experiment)에서, 야생형 식물과 모노산(mon acid) 생성 능력이 저하된 돌연변이 식물에서의 애벌레 성장을 비교할 수 있습니다. 돌연변이 식물에서 유충의 체중이 더 많이 증가할 것이라는 가설을 세울 수 있습니다. 그럼 첫 번째 실험을 시작하겠습니다.이제 *Raphidephora elliana* 식물을 이용해 *Purpureocoris rapha* 유충의 체중 증가량을 측정하기 위한 무선택 실험(no choice experiment)을 진행하겠습니다. 가장 먼저 해야 할 일은 식물을 조심스럽게 밀폐하는 것입니다. 이를 위해 플라스틱 컵의 바닥 부분을 잘라낸 컵을 준비합니다.따라서 밀폐를 위해 이 가는 페인트 붓의 뒷부분을 사용하겠습니다. 잎에 손상을 주지 않으면서 이 식물들을 밀폐하겠습니다. 여기서는 rabbit opss, 야생형, 그리고 돌연변이 식물 간의 선택권 없는 실험(no choice experiment)을 진행합니다.해당 돌연변이체는 자스몬산 결핍 돌연변이체이며, 아마도 섭식에 더 취약할 것입니다. 유충이 한 가지 유전자형의 식물만 선택할 수 있으므로 이는 무선택 실험입니다. 따라서 각 컵에 유충 한 마리를 추가하겠습니다.갓 부화한 유충으로 시작하는 것이 중요합니다. 이러한 유충을 L1 유충이라고 합니다. 여기 막 부화한 유충 한 마리가 있습니다.이제 유충을 테스트 밴드 위에 조심스럽게 올려놓겠습니다. 다음 단계는 이 식물들을 각각 하나의 유충과 함께 밀폐하는 것입니다. 유충이 기어 나오지 못하도록 미세 망과 올레익 밴드를 사용하여 밀폐합니다. 그 후, 보통 7일 정도 기다린 다음 유충의 체중 증가량을 측정합니다.7일간의 급여 후, 유충을 꺼내 이 저울로 무게를 잽니다. 유연한 핀셋을 사용하여 유충을 조심스럽게 집어 무게를 기록합니다. 이 개체의 무게는 거의 250 mg입니다. 돌연변이 식물에서 자란 이 애벌레의 무게를 야생형 식물에서 자란 애벌레의 무게와 비교하겠습니다.즉시 확인하실 수 있듯이, 야생형 식물의 경우 남은 식물 조직이 훨씬 더 많습니다. 따라서 유충의 체중 증가량이 더 적었다고 가정할 수 있습니다. 야생형 식물에서 자란 유충의 무게는 약 100 mg에 불과합니다.따라서 섭식된 조직의 양과 유충의 체중 증가 모두에서 매우 큰 차이가 나타났습니다. 이것으로 무선택 실험을 마치겠습니다. 이제 선택 실험으로 넘어가 볼까요?전문화된 해충은 일반ist 해충에게는 독성이 있는 기주 신호를 식별하고 이에 이끌립니다. pi의 경우, 신속한 glucosinolates가 과잉 위치 신호로 사용됩니다. 여기서는 glucosinolate 생성이 결핍된 야생형 및 돌연변이 rabbit opsis를 사용하겠습니다.선택 실험을 시연하기 위해, 실험을 시작하기 전 나비의 암수를 구별할 수 있어야 합니다. 예를 들어, 암컷 배추흰나비는 각 날개에 두 개의 점이 있는 반면 수컷은 하나만 가지고 있습니다. 때로는 수컷에게 두 번째의 희미한 표시가 있어 암컷으로 오인될 수도 있습니다. 이제 선택 실험을 준비해 보겠습니다.본 사례에서는 야생형과 돌연변이 식물을 모두 사용합니다. 돌연변이 식물은 글루코시놀레이트(glucosinolate) 생성이 저해된 상태입니다. 다시 설명하자면, 글루코시놀레이트는 일반주의자 초식 곤충에게는 독성이 있지만, 우리가 연구 중인 이와 같은 전문주의자 곤충에게는 글루코시놀레이트가 유인 물질로 작용합니다.여기 있는 것들이 파피요나(Papilio) 나비의 5단계 유충 과정이며, 가장 작은 1령 유충부터 시작하여 5령 유충이 될 때까지 체중이 증가합니다. 그 후 번데기로 변태하여 완전한 변태 과정이 일어나며, 이 유충들은 성체 나비가 됩니다. 이번 선택 실험을 위해 저는 이 케이지 안에 야생형 식물과 돌연변이 식물을 모두 넣었으며, 이제 암컷 나비 한 마리를 추가하겠습니다.아사이(acai)를 평가하기 위해, 저는 보통 생식 능력이 있는 암컷을 포획합니다. 생식 능력이 있는지 확인하기 위해 활발하게 알을 낳고 있는 암컷을 포획하며, 손으로 조심스럽게 감싸 테스트 케이지로 옮깁니다. 나비를 24시간 동안 둔 후, 각 유전형에 산란된 알의 수를 측정합니다.이러한 유형의 실험을 수행할 때 유용한 몇 가지 팁을 드리자면, 우선 암컷 나비를 선택했을 때 학습 효과가 나타날 수 있으므로 이후의 실험에 다시 사용하지 마십시오. 둘째로, 성장 표현형이 유사한 식물들끼리만 비교해야 합니다. 따라서 성장 표현형이 유사하지 않은 식물들의 경우에는 비슷한 크기의 잎을 채취하여 LMI 플라스크 상단에 고정하여 사용하십시오.그 후, 24시간이 지나면 우선 식물을 꺼낼 수 있습니다. 보시는 바와 같이 야생형 식물에는 알이 많이 붙어 있으며, 글루코시놀레이트가 결핍된 돌연변이 식물은 그런 자극이나 유인 요인이 부족한 상태입니다.보시는 바와 같이, 돌연변이체에는 알이 거의 없거나 매우 적은 반면, 야생형 식물에는 알이 많이 있습니다. 지금까지 곤충에 대한 저항성을 결정하기 위한 실험 설정 방법을 보여드렸습니다.첫 번째 실험은 비선택 실험으로, 돌연변이 식물과 야생형 식물에서 유충의 체중 증가량을 비교하였습니다. 두 번째 실험은 선택 실험으로 진행하였습니다.우리는 암컷 나비를 이용하여 돌연변이 식물과 야생형 식물에서 acla를 비교했습니다. 대단히 감사합니다. 이상입니다.귀하의 실험에 유용하게 활용되기를 바랍니다.

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