Name: 생체 내 마취되지 않은 초파리 성충의 신경 활동 이미징 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: 배우세요 마취 없는 생체 내 이미징 기법을 사용하여 Drosophila 성충의 신경 활동을 관찰하고 기억 형성 및 주도적 망각의 신경 상관관계를 규명하는 방법을 익히세요.

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<ol><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+Ca2%2B+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise Ca2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Chen, T. W., Wardill, T. J., Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Akerboom, J., Chen, T. W., Wardill, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> J Neurosci. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li>
<li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2%2B+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li>
<li>Sun, F., Zeng, J., Jing, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+sensor+enables+rapid+and+specific+detection+of+dopamine+in+flies%2C+fish%2C+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent sensor enables rapid and specific detection of dopamine in flies, fish, and mice.</a> Cell. 174 (2), 481-496 (2018).</li>
<li>Li, Y., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pHTomato%2C+a+red%2C+genetically+encoded+indicator+that+enables+multiplex+interrogation+of+synaptic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">pHTomato, a red, genetically encoded indicator that enables multiplex interrogation of synaptic activity.</a> Nat Neurosci. 15 (7), 1047-1053 (2012).</li>
<li>Wang, L., Wu, C., Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-performance+genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+in+vivo+cAMP+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-performance genetically encoded fluorescent indicator for in vivo cAMP imaging.</a> Nat Commun. 13 (1), 5363(2022).</li>
<li>Jing, M., Zhang, P., Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+acetylcholine+indicator+for+in+vitro+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent acetylcholine indicator for in vitro and in vivo studies.</a> Nat Biotechnol. 36 (8), 723-737 (2018).</li>
<li>Yu, D., Akalal, D. B. G. B., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+alpha%2Fbeta+mushroom+body+neurons+form+a+branch-specific%2C+long-term+cellular+memory+trace+after+spaced+olfactory+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila alpha/beta mushroom body neurons form a branch-specific, long-term cellular memory trace after spaced olfactory conditioning.</a> Neuron. 52 (5), 845-855 (2006).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Modi, M. N., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterosynaptic+plasticity+underlies+aversive+olfactory+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Heterosynaptic plasticity underlies aversive olfactory learning in Drosophila.</a> Neuron. 88 (5), 985-998 (2015).</li>
<li>Berry, J. A., Phan, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+neurons+mediate+learning+and+forgetting+through+bidirectional+modulation+of+a+memory+trace%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dopamine neurons mediate learning and forgetting through bidirectional modulation of a memory trace.</a> Cell Rep. 25 (3), 651-662 (2018).</li>
<li>Cervantes-Sandoval, I., Davis, R. L., Berry, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rac1+impairs+forgetting-induced+cellular+plasticity+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rac1 impairs forgetting-induced cellular plasticity in mushroom body output neurons.</a> Front Cell Neurosci. 14, 258(2020).</li>
<li>Martinez-Cervantes, J., Shah, P., Phan, A., Cervantes-Sandoval, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+order+unimodal+olfactory+sensory+preconditioning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">High order unimodal olfactory sensory preconditioning in Drosophila.</a> Elife. 11, 79107(2022).</li>
<li>Faber, T., Joerges, J., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+modifies+neural+representations+of+odors+in+the+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Associative learning modifies neural representations of odors in the insect brain.</a> Nat Neurosci. 2 (1), 74-78 (1999).</li>
<li>Yu, D., Baird, G. S., Tsien, R. Y., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+calcium+transients+in+Drosophila+mushroom+body+neurons+with+camgaroo+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Detection of calcium transients in Drosophila mushroom body neurons with camgaroo reporters.</a> J Neurosci. 23 (1), 64-72 (2003).</li>
<li>Yu, D., Keene, A. C., Srivatsan, A., Waddell, S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DPM+neurons+form+a+delayed+and+branch-specific+memory+trace+after+olfactory+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila DPM neurons form a delayed and branch-specific memory trace after olfactory classical conditioning.</a> Cell. 123 (5), 945-957 (2005).</li>
<li>Yu, D., Ponomarev, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+representation+of+the+spatial+code+for+odors+after+olfactory+classical+conditioning%3A+Memory+trace+formation+by+synaptic+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Altered representation of the spatial code for odors after olfactory classical conditioning: Memory trace formation by synaptic recruitment.</a> Neuron. 42 (3), 437-449 (2004).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophilamelanogaster.</a> J Comp Physiol A. 157 (2), 263-277 (1985).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophilamelanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 71 (3), 708-712 (1974).</li>
<li>Quinn, W. G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+phases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Memory phases in Drosophila.</a> Nature. 262 (5569), 576-577 (1976).</li>
<li>Tempel, B. L., Bonini, N., Dawson, D. R., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reward+learning+in+normal+and+mutant+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reward learning in normal and mutant Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (5), 1482-1486 (1983).</li>
<li>Turner, G. C., Bazhenov, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+representations+by+Drosophila+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Olfactory representations by Drosophila mushroom body neurons.</a> J Neurophysiol. 99 (2), 734-746 (2008).</li>
<li>de Belle, J. S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+odor+learning+in+Drosophila+abolished+by+chemical+ablation+of+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Associative odor learning in Drosophila abolished by chemical ablation of mushroom bodies.</a> Science. 263 (5147), 692-695 (1979).</li>
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<li>Kim, Y. C., Lee, H. G., Han, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+dopamine+receptor+dDA1+is+required+in+the+mushroom+body+neurons+for+aversive+and+appetitive+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">D1 dopamine receptor dDA1 is required in the mushroom body neurons for aversive and appetitive learning in Drosophila.</a> J Neurosci. 27 (29), 7640-7647 (2007).</li>
<li>Riemensperger, T., Völler, T., Stock, P., Buchner, E., Fiala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Punishment+prediction+by+dopaminergic+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Punishment prediction by dopaminergic neurons in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (21), 1953-1960 (2005).</li>
<li>Mao, Z., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eight+different+types+of+dopaminergic+neurons+innervate+the+Drosophila+mushroom+body+neuropil%3A+Anatomical+and+physiological+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: Anatomical and physiological heterogeneity.</a> Front Neural Circuits. 3 (5), 1-17 (2009).</li>
<li>Liu, C., Plaçais, P. Y., Yamagata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+dopamine+neurons+signals+reward+for+odour+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A subset of dopamine neurons signals reward for odour memory in Drosophila.</a> Nature. 488 (7412), 512-516 (2012).</li>
<li>Burke, C. J., Huetteroth, W., Owald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layered+reward+signaling+through+octopamine+and+dopamine+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Layered reward signaling through octopamine and dopamine in Drosophila.</a> Nature. 492 (7429), 433-437 (2012).</li>
<li>Tomchik, S. M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+learning-related+cAMP+signaling+and+stimulus+integration+in+the+Drosophila+olfactory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dynamics of learning-related cAMP signaling and stimulus integration in the Drosophila olfactory pathway.</a> Neuron. 64 (4), 510-521 (2009).</li>
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<li>Séjourné, J., Plaçais, P. Y., Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+efferent+neurons+responsible+for+aversive+olfactory+memory+retrieval+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mushroom body efferent neurons responsible for aversive olfactory memory retrieval in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14 (7), 903-910 (2011).</li>
<li>Aso, Y., Sitaraman, D., Ichinose, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+output+neurons+encode+valence+and+guide+memory-based+action+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Mushroom body output neurons encode valence and guide memory-based action selection in Drosophila.</a> Elife. 3, 04580(2014).</li>
<li>Pai, T. P., Chen, C. C., Lin, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ORB+protein+in+two+mushroom+body+output+neurons+is+necessary+for+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila ORB protein in two mushroom body output neurons is necessary for long-term memory formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (19), 7898-7903 (2013).</li>
<li>Owald, D., Felsenberg, J., Talbot, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+defined+mushroom+body+output+neurons+underlies+learned+olfactory+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity of defined mushroom body output neurons underlies learned olfactory behavior in Drosophila.</a> Neuron. 86 (2), 417-427 (2015).</li>
<li>Perisse, E., Owald, D., Barnstedt, O., Talbot, C. B., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aversive+learning+and+appetitive+motivation+toggle+feed-forward+inhibition+in+the+Drosophila+mushroom+body%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Aversive learning and appetitive motivation toggle feed-forward inhibition in the Drosophila mushroom body.</a> Neuron. 90 (5), 1086-1099 (2016).</li>
<li>Aso, Y., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+write+and+update+memories+with+cell-type-specific+rules%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons write and update memories with cell-type-specific rules.</a> Elife. 5, 16135(2016).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity-driven+individualization+of+olfactory+coding+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plasticity-driven individualization of olfactory coding in mushroom body output neurons.</a> Nature. 526 (7572), 258-262 (2015).</li>
<li>MacMillan, H. A., Nørgård, M., MacLean, H. J., Overgaard, J., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+test+of+Drosophila+anaesthetics%3A+Isoflurane+and+sevoflurane+are+benign+alternatives+to+cold+and+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">A critical test of Drosophila anaesthetics: Isoflurane and sevoflurane are benign alternatives to cold and CO2.</a> J Insect Physiol. 101, 97-106 (2017).</li>
<li>Margulies, C., Tully, T., Dubnau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deconstructing+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Deconstructing memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (17), R700-R713 (2005).</li>
<li>Amiri, A., Karvandian, K., Ramezani, N., Amiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+memory+impairment+in+patients+undergoing+general+anesthesia+and+its+contributing+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Short-term memory impairment in patients undergoing general anesthesia and its contributing factors.</a> Saudi J Anaesth. 14 (4), 454-458 (2020).</li>
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<li>Berry, J. A., Cervantes-Sandoval, I., Chakraborty, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+facilitates+memory+by+blocking+dopamine+neuron-mediated+forgetting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sleep facilitates memory by blocking dopamine neuron-mediated forgetting.</a> Cell. 161, 1656-1667 (2015).</li>
<li>Delestro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+large-scale+analysis+of+Drosophila+neuronal+calcium+traces+by+automated+tracking+of+single+somata%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo large-scale analysis of Drosophila neuronal calcium traces by automated tracking of single somata.</a> Sci Rep. 10, 1-15 (2020).</li>
<li>Moore, R. J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FicTrac%3A+A+visual+method+for+tracking+spherical+motion+and+generating+fictive+animal+paths%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">FicTrac: A visual method for tracking spherical motion and generating fictive animal paths.</a> J Neurosci Methods. 225, 106-119 (2014).</li>
<li>Seelig, J. D., Chiappe, M. E., Lott, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+calcium+imaging+from+head-fixed+Drosophila+during+optomotor+walking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon calcium imaging from head-fixed Drosophila during optomotor walking behavior.</a> Nat Methods. 7 (7), 535-540 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.102 mm 백금 와이어</td><td>Surepure Chemetals</td><td>2690</td><td></td></tr><tr><td>0.25 OD, 0.125 ID, 백금 경화 실리콘 튜브</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td></td></tr><tr><td>0.3 mm ID 실리콘 튜브&nbsp;</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>11-189-14</td><td></td></tr><tr><td>바나나 플러그</td><td>아마존</td><td></td><td></td></tr><tr><td>블랙 아크릴 시트 챔버 0.0125 정밀</td><td>브랜드</td><td>44250</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>구리 충격 그리드</td><td></td> 백금 저항기용 맞춤형 <td></td><td></td></tr><tr><td>DC 전원 공급 장치</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>S35740</td><td></td></tr><tr><td>드레멜 도구 3000-1</td><td>드레멜</td><td>3000-N/18</td><td></td></tr><tr><td>초파리 멜라노가스터 / ;; uas-tdtom</td><td>BDSC</td><td>36328</td><td></td></tr><tr><td>초파리 멜라노가스터 / ; UAS-GCp6F;</td><td>BDSC</td><td>42747</td><td>이 uas 라인은 ;; uas-td-tom은 두 삽입물을 모두 포함하는 스톡을 생성합니다.</td></tr> 초<tr><td>파리 멜라노가스터/ ;; MB077C-gal4</td><td>BDSC</td><td>68287</td><td></td></tr><tr><td>에폭시 접착제&nbsp;</td><td>Gorilla</td><td>4200102</td><td></td></tr><tr><td>가스 유량계 1.5 LPM</td><td>Amazon</td><td>B01N0UWZ2T</td><td></td></tr><tr><td>유리 1 mL 혈청학적 피펫&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-232-9516</td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>시그마-알드리치</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시그마-알드리치</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>피하 12TW 게이지 튜브</td><td>마이크로 그룹</td><td>316H12TW</td><td></td></tr> 피<tr><td>하 22X 게이지 튜브</td><td>마이크로 그룹</td><td>304H22X</td><td></td></tr><tr><td>염화 마그네슘 육수화물</td> 시<td>그마 알드리치</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Myristic Acid</td><td>Acros Organics</td><td>156961000</td><td></td></tr><tr><td>네오디뮴 자석 3X2mm</td><td>Amazon</td><td>B0CXSQ387M</td><td></td></tr><tr><td>P1000 팁</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-165RL</td><td></td></tr><tr><td>P200 팁</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-150RL</td><td></td></tr><tr><td>공압 푸시 커넥터 6mm OD</td> 아<td>마존</td><td>B07ZHG8Y1Y</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>PTFE 튜브 6mm OD</td><td>아마존</td><td></td><td></td></tr><tr><td>면도날&nbsp;</td><td>아마존</td><td>B08LYD6645</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>S271-500</td><td></td></tr><tr><td>인산나트륨 이염기성</td><td>시그마-알드리치</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>자당</td><td>시그마-알드리치</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>트레할로스</td><td>시그마-알드리치</td><td>T0167</td><td></td></tr></tbody></table>

생체 내 마취되지 않은 초파리 성충의 신경 활동 이미징

In Vivo Imaging of Neural Activity in Unanesthetized Drosophila Adult Flies

여기서, 마취 없이 성체 초파리의 생체 내 이미징을 활용하여 잘 특성화된 버섯체 출력 뉴런(MBON γ2α'1)12에서 가소성을 유발하는 혐오적 후각 조건화를 조사합니다. 칼슘 지시약 GCaMP6f2 는 적색 형광 단백질 TdTom과 함께 MB 출력 뉴런에서 발현되며, 수상돌기는 MB γ과 α 엽의 구획을 신경 분포시키고 분할 Gal4 라인 MB077C34 (그림 2A, B)를 사용하여 MBON γ2α'1을 유전적으로 표적으로 합니다.
혐오적 후각 조건화 후 가소성을 관찰하기 위해 파리를 컨포칼 현미경 아래에 놓고 복부와 다리를 충격 그리드의 중앙에 정렬하고 냄새 전달 피펫을 파리의 안테나를 향하게 합니다. 먼저, 칼슘 냄새 반응은 4-메틸 시클로헥산올(MCH)의 5초 펄스에 이어 3-옥탄올(OCT)의 5초 펄스에 기록되었으며, 30초의 자극 간 간격으로 구분되었습니다. 5분 후, 파리는 12, 90V 충격과 함께 1분 OCT(CS+) 펄스를 동시에 제시하여 훈련을 받았습니다. 이 연상 조건화 일정은 강력한 행동 혐오 기억을 생성합니다. 마지막으로, 컨디셔닝 5분 및 15분 후, MCH 및 OCT에 대한 칼슘 반응이 훈련 전과 같이 기록되었습니다. MBON γ2α'1은 컨디셔닝 전에 MCH와 OCT 모두에 대해 칼슘 과도 현상에 의해 강력하게 반응합니다(그림 2D-F). 그럼에도 불구하고, 이전 결과와 일치하는12, CS+(OCT)에 대한 5분 후 조건화 칼슘 반응은 완전히 저하되어 있습니다(그림 2D-F). 또한, CS-(MCH)에 대한 반응은 유의하게 강화되었다. 훈련 후 15분 후에는 CS+에 대한 칼슘 반응이 현저히 저하되고 CS-가 강화되었기 때문에 유사한 결과가 나타났습니다. 이러한 결과는 두 냄새에서 관찰된 기억 추적이 최소 15분 동안 지속됨을 나타냅니다(그림 2D-F). 이러한 반응은 5초 펄스 동안의 평균 냄새 반응을 사용하여 정량화되고 플라이 내에서 비교되었습니다. 이러한 냄새 반응의 변화는 GCaMP6 형광 전후 혐오 교육의 변화를 의사 색상으로 표현하여 시각화할 수도 있습니다(그림 2E). 대조적으로, 준비 중 파리를 마취하면 CS+와 CS- 모두에 대한 가소성이 감소하는 것으로 나타났습니다. CS+에 대한 부분적인 우울증만이 마취된 동물에서 관찰되는데, 이는 훈련 후 반응이 여전히 존재하기 때문입니다. 또한 CS- 반응은 훈련 후에도 크게 다르지 않습니다(그림 2G,H). 이를 더 잘 관찰하기 위해 유도 가소성을 CS+/CS-의 비율로 계산하고 마취되지 않은 파리가 마취된 동물에 비해 가소성이 유의하게 증가한 것으로 나타났습니다(그림 2I). 이러한 대표적인 결과는 이 프로토콜이 현미경으로 학습과 기억을 연구하는 데 적합하며 장기간 뉴런에서 이미징하는 동안 파리의 건강을 보장한다는 것을 나타냅니다. 이 프로토콜은 충분히 다재다능하며 다른 유형의 생체 내 이미징 및 기타 관심 뉴런에 적용할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig01.jpg"> 
그림 1: 마취제를 사용하지 않은 초파리의 생체 내 이미징 준비.(A) 상단 패널: 흡인기기 준비와 관련된 단계를 보여주는 다이어그램. 하단 패널: 플라이 포지셔닝 중 micromanipulator에 유지된 챔버를 보여주는 다이어그램. 파리의 주둥이는 흡인기(aspirator)를 사용하여 500mL/분의 속도로 진공에 연결된 금속 튜브의 입구에 놓습니다. 챔버는 이후에 플라이 위에 위치합니다. (B) 눈과 흉부의 측면은 맞춤형 백금 저항기를 사용하여 미리스틱 산으로 접착됩니다. (C) 금속 튜브에서 파리의 주둥이를 제거하고 주둥이를 제자리에 붙일 수 있도록 챔버를 뒤집어 녹음 중 움직임을 최소화합니다. (D) 챔버는 유리 슬라이드 베이스에 부착됩니다. 테이프는 챔버 상단에 적용되어 안테나를 덮고 뒷면에는 식염수가 누출되는 것을 방지합니다. (E) 겹눈 근처의 큐티클을 따라 두 개의 수직 절단이 이루어진 다음 흉부 근처의 큐티클을 가로질러 세 번째 절단하여 뇌에 대한 "창"을 만듭니다. (F) 100-200 μL 사이의 식염수를 절단 부위의 파리 머리에 첨가합니다. (G) 뇌를 노출시키기 위해 날카롭고 가는 집게를 사용하여 큐티클 창을 들어 올리고, 당기고, 분리한다. (H) 지방과 기관 조직을 제거하여 현미경으로 뇌 세포를 명확하게 시각화할 수 있습니다. (I) 준비된 플라이를 현미경 아래에 놓고 몸체를 쇼크 그리드 상단에 정렬하도록 배치합니다. (J) MBON γ2α'1의 발현 패턴을 보여주는 의사 색상 이미지. 관심 영역은 수지상 아버를 둘러싼 점선으로 윤곽이 그려져 있습니다. 눈금 막대 : 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig02.jpg"> 
그림 2: 혐오적 후각 조건화에 따른 MBON γ2α'1의 학습 유도 가소성. (A) GCaMP를 표현하는 MB077C-splitGal4 드라이버의 표현 패턴. 뇌를 해부하여 anti-GFP로 염색하고 anti-nc82로 대조염색했습니다. 눈금 막대 : 50 μm. (B) 세포체, 확장 과정 및 수지상 아버를 강조하는 MBON γ2α'1의 의사 색상 이미지. 수지상 영역은 칼슘 반응이 수집된 영역을 나타냅니다. 눈금 막대 : 50 μm. (C) 혐오적 훈련 프로토콜의 개략도. 파리는 MCH 및 OCT의 5초 펄스에 노출되었으며 그 사이에 30초의 깨끗한 공기가 노출되었습니다. 5분 간격 후, 파리는 OCT를 12개의 90V 전기 충격과 연관시키도록 훈련되었습니다. MCH 및 OCT에 대한 칼슘 반응의 기록은 훈련 후 5분 및 15분에 수행되었습니다. (D) MCH(상단 패널) 및 OCT(하단 패널)에 대한 냄새 반응 추적은 사전 교육과 교육 후 5분 및 15분에 표시됩니다. 두꺼운 검은색 막대는 냄새가 나는 시기를 나타냅니다. (E) MCH 및 OCT에 대한 반응으로 MBON γ2α'1 사전 훈련 및 5분 및 15분 훈련 후 수상돌기 아버의 유사 색상 이미지. 형광의 강화는 CS-(MCH)에 대해 관찰되는 반면 형광은 CS+(OCT)에 대해 폐지됩니다. 스케일 바: 20μm. (F) MCH에 대한 평균 냄새 반응은 훈련 후 5분 및 15분에 유의하게 강화되는 반면 OCT(CS+)에 대한 반응은 크게 억제됩니다. 비모수 Wilcoxon 쌍체 검정, N = 12. (G) MCH(상단 패널) 및 OCT(하단 패널)에 대한 냄새 반응 추적은 훈련 전 및 훈련 후 5분 동안 마취된 파리에 대해 표시됩니다. 두꺼운 검은색 막대는 냄새가 전달됨을 나타냅니다. (H) 마취된 동물에서 MCH에 대한 평균 냄새 반응은 훈련 후 상당한 강화를 나타내지 않으며 OCT에 대한 반응은 마취되지 않은 동물에 비해 부분적인 억제만 나타냅니다. (I) CS+/CS- 비율로 계산되는 훈련에 의한 가소성은 마취 없이 준비된 파리에 비해 마취된 파리에서 현저히 낮다. 비모수 Wilcoxon 쌍체 검정, N = 8-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 1: Grid_holder(STL). 전기 그리드를 유지하는 데 사용되는 맞춤형 설계 구성 요소의 STL 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_Holder.stl" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 2: Grid_holder (OBJ). 전기 그리드를 유지하는 데 사용되는 맞춤형 설계 구성 요소의 OBJ 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_holder.obj" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 3: Chamber_LaserCut. 어도비 일러스트 레이터 파일은 수컷과 암컷 파리 모두의 기록 챔버의 상단 구성 요소를 레이저로 절단하는 데 사용됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Chamber_laserCut.ai" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 4: Recording_chamber (STL). 맞춤형으로 설계된 녹음실의 STL 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.stl" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 5: Recording_chamber (OBJ). 맞춤형으로 설계된 녹음실의 OBJ 파일. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.obj" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
보충 파일 6: Recording_chamber_animation. 조립된 녹음실의 애니메이션을 보여주는 MP4 비디오. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recordig_chamber_animation.mp4" target="_blank">이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>

In vivo imaging is crucial for studying neurobiology in Drosophila as it allows real-time visualization of neuronal activity, development, and plasticity ...

in-vivo-imaging-neural-activity-unanesthetized-drosophila-adult

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 프로토콜은 그대로의 anesthetization 및 이미징을위한 신뢰할 수있는 방법을...

서브 세포 해상도 손상 Drosophila의 애벌레의 생체내 이미징에서

이 비디오는 GCaMP를 사용하여 초파리 뉴런의 생체 내 칼슘 이미징을 설명합니다. 주요 프로토콜 클립은 후각 조절 실험 중 버섯체 뉴런에서 GCaMP 형광의 변화를 기록하는 방법을 보여줍니다.

초파리 In Vivo 칼슘 이미징: 뉴런 활동의 기능적 이미징 방법

이 비디오는 파리에서 시냅스적으로 국소화된 칼슘 센서를 사용하여 생체 내 칼슘 이미징 방법을 보여줍니다. 현미경 검사를 위해 파리를 준비하고, 후각 조절을 수행하고, 냄새로 인한 칼슘 유입을 시각화하는 단계를 간략하게 설명합니다.

생체 내 Drosophila melanogaster에서 Synaptically Localized Calcium Sensors를 사용한 칼슘 이미징

이 프로토콜은 그대로 애벌레 뇌의 맥락에서 라이브 세포 이미징을 수행하는 데 사용하는 효율적인 방법을 자세히 설명합니다. 라이브 세포 이미징 방식은 지속적으로 이전에 간과 된 메커니즘을 밝혀, 비대칭 신경 줄기 세포 분열의 연구뿐만 아니라 다른 신경 인성과 발달 과정에 대한 귀중한 있습니다.

의 라이브 영상<em&gt; 초파리</em&gt; 애벌레 Neuroblasts

여기서 우리는 발광 생물 기자를 사용하는 방법을 -imaging 소설 칼슘 2+ 제시한다. 이 방법은 칼슘 결합과 광 자극에 대한 필요성을 제거, 발광 구조물의 융합 GFP-쿼린을 이용한다. 중요한 것은이 방법은 깊은 뇌 구조와 높은 시간 해상도로 긴 연속 촬영, 접근을 허용한다.

발광 생물 칼슘 표시 GFP - 쿼린을 기반으로 생체 기능성 뇌 영상의 접근 방식

여기에 우리가 설명 단일 분자 사진 활성화 지역화 현미경 라이브 초파리 melanogaster 의 모터 신경 맨끝에 실시 될 수 있습니다 하는 방법 3 유 충 탈피.

Vivo에서 단일 분자 초파리 연 접 모터 신경 맨끝에 추적

이 종이 초파리 뇌의 칼슘 이미징 비보 전 프로토콜을 설명합니다. 이 방법에서는, 천연 또는 합성 화합물은 뇌의 특정 신경 세포를 활성화 하는 능력을 테스트 하는 버퍼에 적용할 수 있습니다.

전 비보 내 분 비 신호 초파리 에 두뇌 응답을 시각화 칼슘 이미징

여기에서 우리는 Drosophila 학습 및 기억의 맥락에서 pre-및/또는 후성 칼슘이 구상될 수 있는 프로토콜을 제시합니다. 합성 국소화 된 칼슘 센서를 사용하여 생체 내 칼슘 이미징은 이러한 유형의 연관 학습의 기초가되는 시냅스 가소성이 결정될 수 있도록 고전적인 후각 조절 패러다임과 결합됩니다.

초파리 멜라노가스터에서 학습 유발 시냅스 가소성의 생체 내 광학 칼슘 이미징

우리는 행동 도중 그리고 자극에 응하여 성인 Drosophila의 전체 두뇌를 이미지하기 위하여 특별히 조정된 방법을 제시합니다. 머리는 전체 뇌에 광학 액세스를 허용하기 위해 배치되며, 비행은 다리와 안테나, 프로보시스의 끝을 움직일 수 있으며 눈은 감각 자극을받을 수 있습니다.

행동과 자극 반응 도중 전체 두뇌 화상 진찰을 위한 성인 Drosophila melanogaster를 준비합니다

여기에서는 간질 활동을 모니터링하기 위해 GCaMP6 발현 성인 초파리의 생체 외 칼슘 이미징 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 생체 외 칼슘 이미징을 통해 성인 초파리의 ictal 사건을 조사하는 데 유용한 도구를 제공하여 세포 수준에서 간질의 잠재적 메커니즘을 탐구할 수 있도록 합니다.

Ex Vivo (체외 주행) 간질의 초파리 모델을 위한 칼슘 영상

우리는 고정을 위해 국소 조직 접착제를 사용하여 초파리 유충 후각 뉴런에 대한 칼슘 이미징 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 안정성을 향상시켜 신뢰할 수 있는 생체 내 및 생체 외 실험을 용이하게 합니다. 맞춤형 R 스크립트는 칼슘 신호를 분석하여 상세한 신경생리학적 연구를 위한 효율적인 플랫폼을 제공합니다.

3령 초파리 멜라노가스터 유충에서 후각 회로 뉴런의 생체 내 및 생체 외 칼슘 이미징

배우세요 마취 없는 생체 내 이미징 기법을 사용하여 Drosophila 성충의 신경 활동을 관찰하고 기억 형성 및 주도적 망각의 신경 상관관계를 규명하는 방법을 익히세요.

생체 내 마취되지 않은 초파리 성충의 신경 활동 이미징

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