토끼 모델에서 유방암 예방을 위한 관내 에탄올 기반 절제 주입의 X선 시각화

유방암은 암 관련 사망 원인 중 두 번째로 큰 수치입니다. 평균 위험 여성을 위한 사전 개입은 거의 없지만 예방적 유방 절제술과 호르몬 요법은 고위험 여성에게 사용할 수 있는 옵션입니다. 그러나 이러한 예방 옵션의 심각한 부정적인 부작용으로 인해 많은 고위험 여성이 복용하지 않기로 선택합니다.

따라서 고위험군을 위한 새로운 예방 전략이 필요합니다. 우리는 유방 절제술에 대한 국소적이고 덜 침습적인 대안으로 유방암이 발생하는 기억 상피 세포를 절제하기 위한 관내 전달 기술을 개발했습니다. 우리의 이전 연구는 공격적인 마우스 모델에서 유방암 형성을 예방하기 위한 70% 에탄올의 단일 관내 주입의 효과를 보여주었습니다.

우리는 이 절차를 쥐 모델로 확장하고 마이크로 CT로 주입의 성공을 확인할 수 있었습니다. 우리는 생쥐와 쥐 모델 모두에서 관 트리를 채우고 생체 내 X선 이미징을 시연했지만 이러한 모델에는 유선당 하나의 관 트리만 있습니다. 따라서 이 절차에서는 다중 덕트 트리 시스템을 사용하는 토끼 모델에서 이 기술의 확장성을 다룰 것입니다.

토끼는 이 ID 절제 절차를 인간에게 번역하기 위한 실용적이고 관련성 있는 중간 대형 동물 모델을 제공합니다. 간단히 말해서, 우리는 주입할 젖꼭지 주변의 털을 제거하여 시술을 위해 동물을 준비하는 것으로 시작한 다음 관내 주입을 수행하고 각 주입 후 X선 형광투시 이미지를 촬영하여 관 나무가 채워졌는지 확인합니다. 마지막으로 절제 용액의 성공률을 결정하기 위해 조직 분석이 수행됩니다.

이소플루란 투여 20분 전에 근육 주사하여 토끼를 진정시킵니다. 우리는 케타민과 자일라진을 사용했습니다. 진정제의 임상 징후가 나타난 후 진통제를 주입하십시오.

우리는 케토프로펜을 사용했습니다. 재순환 온수 담요가 늘어선 이미징 테이블에 토끼를 놓고 적절한 크기의 삽관 튜브를 사용하여 토끼를 삽관한 다음 이소플루란 기계에 부착합니다. 튜브의 크기는 토끼의 무게에 따라 다르지만 항상 정확한 것은 아니므로 여러 크기를 준비하는 것이 좋습니다.

적절한 밀봉을 얻을 수 없는 경우 삽관 튜브 대신 마스크를 사용할 수 있습니다. 응급 약물 투여를 위해 토끼의 귀에 25게이지 정맥 카테터를 삽입합니다. 토끼가 완전히 마취되면 두 번째와 세 번째 젖꼭지 주위의 꼬리 복부를 면도합니다.

무선 진공청소기는 주입 부위를 깨끗하게 유지하는 데 도움이 될 수 있습니다. 대부분의 털이 제거되면 젖꼭지 주위에 제모 크림을 바르고 15초 후 젖은 거즈로 제거합니다. 유두 부위에 대한 가시성과 접근성이 좋은지 확인하고 필요한 경우 반복합니다.

캐뉼라 삽입 전에 클로르헥시딘 거즈 패드로 해당 부위를 닦아 주사 부위를 청소하십시오. 토끼는 관 개구부에서 돌출된 플러그를 가질 수 있으며, 제거하지 않으면 유두의 성공적인 캐뉼라 삽입을 방해할 수 있습니다. 미세한 집게를 사용하여 덕트 개구부 위의 피부층을 부드럽게 제거합니다.

경사진 면이 위로 향하게 하는 28게이지 바늘을 젖꼭지 측면에 삽입하고 멸균 0.9% 식염수 0.2밀리리터를 천천히 주입합니다. 일부 식염수는 관 개구부 밖으로 분출될 수 있습니다. 이렇게 하면 캐뉼라 삽입 중에 관 개구부를 더 잘 시각화할 수 있습니다.

무균 기술을 사용하여 캐뉼라 삽입을 위한 12인치 연장선을 준비합니다. 벤치 표면을 에탄올로 청소하고 멸균 장갑을 조심스럽게 착용하십시오. 연장선의 양쪽 끝에 있는 보호 캡을 제거합니다.

1밀리리터 Luer-Lok 주사기를 사용하여 준비된 절제 용액 1밀리리터를 흡인합니다. 주사기를 여성용 날개 끝에 조심스럽게 부착한 다음 반대쪽 끝에 27게이지 뭉툭한 바늘을 조심스럽게 부착합니다. 바늘에서 일정한 용액 흐름이 나올 때까지 라인을 통해 용액을 천천히 밀어 넣습니다.

주사기를 기울이면 기포가 생길 수 있으므로 주의하십시오. 엄지와 검지로 젖꼭지를 부드럽게 잡고 관내 주입을 위해 약간 들어 올립니다. 27게이지 뭉툼 바늘을 사용하여 관심 덕트를 조심스럽게 캐뉼라합니다.

10X 확대 램프는 덕트 개구부를 시각화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 덕트 내에서 빠르게 움직이는 유체로 인한 잠재적인 손상을 최소화하기 위해 용액을 천천히 주입하십시오. 일반적으로 한 명의 연구원이 캐뉼라를 삽입하고 바늘을 잡고 두 번째 연구원이 주사기를 잡고 플런저를 원하는 속도로 밀어 넣습니다.

Omnipaque는 FDA 승인을 받은 요오드 기반 조영제로, X선 형광투시 영상에서 관 나무를 볼 수 있습니다. 이를 통해 관 트리가 절제 용액으로 채워지는 것을 실시간으로 볼 수 있으며 용액이 관 트리 끝에 도달하면 전달이 중단됩니다. 형광투시 영상은 또한 주입 직후 전체 관 트리의 성공적인 충전을 빠르고 쉽게 확인할 수 있습니다.

세 번째 도관에 주입하는 이 라이브 세션에서 도덕트 1과 2가 이미 주입된 것을 볼 수 있습니다. 이 라이브 이미징은 덕트 트리의 채우기를 최대화하도록 안내합니다. 절차가 완료되면 역전제를 근육 주사하여 토끼를 회복하기 시작합니다.

우리의 경우 아티파메졸을 사용했습니다. 회복 징후로는 씹는 것과 코 경련이 있습니다. 토끼가 스스로 회복하도록 하기 전에 토끼가 스스로 똑바로 세울 수 있는지 확인하십시오.

염증을 줄이고 흉터를 최소화하기 위해 시술 후 최소 3일 동안 케토프로펜을 피하 투여하십시오. 헤마톡실린 및 에오신 염색 또는 더 일반적으로 H&E 염색으로 알려진 염색은 조직학에서 가장 많이 사용되는 염색입니다. 이를 통해 우리는 유선 내의 4개의 관 개구부와 관 경로를 볼 수 있습니다.

실험에서 우리는 10-70% 에탄올 농도의 다양한 용액을 테스트했습니다. 이 농도 범위를 기반으로 10% 미만의 에탄올을 함유한 절제 용액이 더 높은 비율의 에탄올에 비해 여전히 덕트 트리를 효율적으로 제거할 수 있음을 알 수 있습니다. 이러한 결과는 이 낮은 10% 에탄올 절제 용액이 추가 연구를 위해 우선순위를 두어야 함을 나타냅니다.

우리는 토끼 유선의 관 트리 시스템에 이미지 유도 주입 절차를 설명합니다. 우리는 형광투시 실시간 이미징을 통해 에탄올 기반 절제 용액을 함유한 X선 조영제를 모든 젖꼭지 개구부에 제어된 주입을 입증하고 조직학적 분석을 통해 상피 세포 절제 및 조직 손상 속도를 확인합니다. 이 절차는 예방적 유방 절제술의 대안으로 유방암의 일차 예방을 위한 덜 침습적인 방법의 확장성을 향한 단계를 제공합니다.

이 프로토콜은 관 나무의 시각화를 위한 현재 임상 실습과 호환되는 Omnipaque 함유 에탄올 기반 절제 용액의 형광 투시 유도 주입을 위한 기기, 시약 및 재료를 사용합니다. 따라서, 기술된 절차는 최초의 인간 내 임상 시험에서 쉽게 구현되고 평가될 수 있습니다.