Name: Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies(분자 및 컴퓨터 연구를 위한 도구로서의 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 배우세요 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포를 이용한 분자 및 컴퓨터 분석 방법을. 전사체 분석과 종양 오가노이드를 활용하여 STAT3 전사인자의 역할과 치료 표적을 규명합니다.

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<table><tbody><tr><td>1Kb 플러스 DNA 사다리</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>96웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>아세트산</td><td>시그마 알디르치</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>에이지I-HF</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>R3552</td><td>-20 > C</td></tr><tr><td>베타딘</td><td>메다 파마</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; rker 계수 챔버&nbsp;</td><td>VWR</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>소작 저온 FineTip Disp</td><td>킬러</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>원심 분리기</td><td>에펜도르프</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 튜브 15mL</td><td>사르슈테트</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 튜브 50mL</td><td>사르슈테트</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL 마이크로튜브</td><td>사르슈테트</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>크리스탈 바이올렛</td><td>시그마 알디르치</td><td>C0775</td><td>RT에 보관하고 Fume 후드에서 사용&nbsp;</td></tr><tr><td>배양판 직경 100mm&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>배양 플레이트 직경 60mm&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20</td><td>만든</td><td></td><td>RT에 보관하고 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스</td><td>프레시바</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>디지털 현미경</td><td>라이카</td><td>DM6B</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>시그마 알디르치</td><td>D8418</td><td>생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>덜베코' s 수정된 독수리' s 중간(DMEM)</td><td>깁코</td><td>11965092</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>에코리-HF</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>R3101</td><td>-20 > C</td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)</td><td>시그마 알디르치</td><td>E6758</td><td>RT에 보관하고 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS)</td><td>깁코</td><td>16000044</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>필터링된 팁 10 & 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 100 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 1000 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 20 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 200 & micro; L</td><td>사르슈테트</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>필트로푸르 S 플러스 0,20 & 마이크로; m&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>필트로푸르 S 플러스 0,45 & 마이크로; m&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>가는 가위</td><td>2바이오</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>집게(Forcep)</td><td>2바이오</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>유전적</td><td>깁코</td><td>10131035</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 형질감염 시약</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>11668019</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>8 & mu의 Matrigel 침입 챔버; m PET 멤브레인&nbsp;</td><td>코 닝</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더(600nm 흡광도)</td><td>프로메가</td><td>GM3500 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브 1.5mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>Optimem</td><td>깁코</td><td>31985047</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>시그마 알디르치</td><td>158127</td><td>RT에 보관하고 퓨마 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pBABE-neo 대형 TcDNA&nbsp;</td><td>아드진</td><td>1780</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pCL-암포</td><td>노부스 바이오로지컬&nbsp;</td><td>18746853</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>아드진</td><td>22036</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>아드진</td><td>8454</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(Pen Strepto, 10,000 & mu; g/mL)&nbsp;</td><td>깁코</td><td>15140122</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>위상차 현미경&nbsp;</td><td>올림푸스&nbsp;</td><td>BX42 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수&nbsp; (PBS)</td><td>만든</td><td></td><td>RT에 보관하고 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pLKO.1-퓨로&nbsp;</td><td>아드진</td><td>10878</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>폴리-L-라이신 용액</td><td>시그마 알디르치</td><td>P8920</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>푸로마이신 디하이드로클로라이드&nbsp; 스트렙토미세스 알보니거</td><td>시그마 알디르치</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart 버퍼&nbsp;</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>B6004</td><td>-20 > C</td></tr><tr><td>설치류 면도기</td><td>에스쿨랍</td><td>GT416</td><td></td></tr><tr><td>로스웰 파크 기념 연구소(RPMI)</td><td>깁코</td><td>61870010</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>둥근 팁 갈증 면봉</td><td>시그마 알디르치</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>메스</td><td>기마</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>Secura 세미 마이크로 저울</td><td>사토리우스</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 10mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 2mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 25 mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 5 mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>스티치 5-0</td><td>에티콘</td><td>1866년</td><td></td></tr><tr><td>주사기 10mL</td><td>펜타페르테</td><td>00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>주사기 5mL</td><td>펜타페르테</td><td>00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>주사기 옴니칸 인슐린 1mL</td><td>브라운</td><td>9151125S</td><td></td></tr><tr><td>티슈 아데시브</td><td>3M 베트본드</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Transwell 인서트 8 & 마이크로; m 기공&nbsp;</td><td>송골매</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Transwell Matrigel 인서트 8 & micro; m 기공&nbsp;</td><td>코 닝</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA(0.5%), 페놀 레드 없음</td><td>깁코</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20 원심 농축기 MWCO 10,000 Da&nbsp;</td><td>시그마 알디르치</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

cancer-associated fibroblasts from mouse mammary tumors as tools for molecular and computational studies(분자 및 컴퓨터 연구를 위한 도구로서의 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포)

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

CAF의 활동에 대한 체외 평가 유방암(BC)의 공격적인 특징에 대한 유선종양 유래 암 관련 섬유아세포(CAF)의 기여도는 3단계에 따라 생성된 불멸 CAF(iCAF)를 사용하여 연구되었습니다. iCAF는 6단계에서 설명한 대로 초활성화한 다음 sDMEM에서 굶주려 CM을 수집하여 48시간 동안 4T1 세포를 처리하는 데 사용되었습니다(7.1단계 참조). 이 치료 후에는 시험관 내 기능 분석이 이어졌습니다. 그림 1 은 대조군 기아 배지(CTR)에 비해 s.a. iCAFs CM을 사용한 치료로 4T1 세포의 증식이 크게 향상되었음을 보여줍니다. 이러한 증식 증가는 일반적으로 24시간 이내에 시작되어 다음 며칠 동안 계속 증가합니다. 이러한 실험의 경우, CM으로 치료하기 전에 도금된 세포의 수와 배지의 혈청 비율을 모두 최적화하는 것이 중요합니다. s.a. iCAFs CM은 또...

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies(분자 및 컴퓨터 연구를 위한 도구로서의 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포)

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 보고서에서, 우리는 분리 시스템 및 마우스 유선에서 문화 기증자 세포를 증명하고, orthotopically stromal 분석받는 마우스에서 이러한 세포를 이식 : 내유 종양 개발하는 동안 상피 상호 작용합니다.

C57BL/6J 마우스의 Stromal 셀 및 암종 세포 이식 내유

암종 - 관련 섬유아 세포 (CAFs) 종양의 기질 내에 존재 myofibroblasts 풍부한은 종양의 진행을 운전에 중요한 역할을한다. 우리는 실험적으로 인간의 섬유아 세포에서 mammary CAFs 창출을위한 coimplantation 종양의 xengraft 모델을 개발했습니다. 프로토콜 tumourigenesis을 추진하는 능력을 습득 카페인 myofibroblasts을 수립하는 방법에 대해 설명합니다.

인간 Mammary 섬유아 세포에서 암종 - 관련 섬유아 세포의 실험 세대 (CAFs)

암 관련의 섬유 아세포 (CAFs)는 확산, 혈관 신생 및 염증을 조장하는 신호를 통해 종양 개시, 성장과 진행을 촉진한다. 여기 우리는 표면 마커로 PDGFRα를 사용하여 셀 정렬에 의해 신선한 마우스와 인간의 조직에서 정상 섬유 아세포와 CAFs의 순수한 인구를 분리하는 방법을 설명합니다.

형광 활성 세포 정렬 (FACS)에 의해 신선한 조직으로부터 정상 및 암 관련 섬유 아세포의 분리

여기에서는 암 전이에서 폐포 대식세포의 기능을 연구하기 위한 모델과 접근 방식을 설명합니다. 전이에서 이러한 세포의 역할을 입증하기 위해 클로드로네이트 리포좀을 사용한 폐포 대식세포의 고갈과 함께 유방암의 syngeneic(4T1) 모델을 사용했습니다.

유방암 전이에 폐포 대 식세포의 역할을 공부

암세포와 섬유아세포를 공동 주입하고 시간 경과에 따른 종양 성장을 모니터링하는 프로토콜이 제공됩니다. 이 프로토콜은 종양 성장의 조절자로서 섬유아세포의 역할에 대한 분자적 기초를 이해하는 데 사용할 수 있습니다.

종양 성장에서 암 관련 섬유아세포의 역할을 조사하기 위한 마우스 모델

이 논문은 삼중 음성 유방암의 합성 뮤린 모델과 종양 미세 환경을 대상으로 설계된 새로운 나노 입자의 전임상 연구를위한 응용 프로그램에서 1 차 암 관련 섬유 아세포의 격리 및 배양에 대한 프로토콜을 제공하는 것을 목표로합니다.

표적 나노 입자의 연구를 위한 유방암의 합성 Murine 모형에서 1 차적인 암 관련섬유세포의 격리

다세포 3D 종양 스페로이드는 폐 선암 세포, 섬유아세포 및 단핵구로 준비한 후 이러한 스페로이드에서 암 관련 섬유아세포(CAF)를 분리했습니다. 분리된 CAF를 정상 섬유아세포와 비교하여 미토콘드리아 막횡단 전위, 활성 산소 종 및 효소 활성을 연구하여 미토콘드리아 건강을 평가했습니다.

3D 다세포 폐 종양 스페로이드에서 분리된 암 관련 섬유아세포의 미토콘드리아 건강 평가

우리는 성공적으로 슬라이드를 전체 마운트로 고정시킨 유방 조직을 조직 병리학 적 평가를 위해 성공적으로 제거, 가공, 절단 및 착색하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 생식 및 발달 테스트 지침 연구에서 유선 전체 마운트의 수집 및 평가를 촉진 할 수 있습니다.

병변 식별을위한 유선 절개 전체 장착

이 프로토콜 주변 혈액 및 혈 청/플라즈마 다운스트림 분석 단일 염기 다형성 (SNP) 평가 및 ELISA 분석 결과 등을 저장 하는 간단 하 고 유용한 방법을 설명 합니다.

샘플 저장소 암 바이오 마커의 평가를 위한 유용한 툴으로 말린 혈액 및 혈 청 관광 명소

이 프로토콜의 목표는 면역 형광, 전사와 같은 다른 분석 시스템에서 해결 될 수있는 종양 벌크와 같은 환경에서 암 관련 섬유 아세포 (CAFs)의 분화를 연구하는 3D 체외 모델을 확립하는 것입니다. 분석 및 생명 세포 화상 진찰.

3D 스페로이드 모델은 시험관 내 암 관련 섬유아세포 분화 및 침입을 위한 보다 생리적 시스템으로

배우세요 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포를 이용한 분자 및 컴퓨터 분석 방법을. 전사체 분석과 종양 오가노이드를 활용하여 STAT3 전사인자의 역할과 치료 표적을 규명합니다.

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