Name: 전립선암 관련 섬유아세포의 분리, 배양 및 특성화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 배우세요 전립선암 관련 섬유아세포(CAF)의 분리, 배양 및 특성화 방법을. 3D 오가노이드와 기능적 상호작용 분석을 통해 종양 미세환경에서 CAF의 역할을 연구하고 새로운 치료 전략을 개발하는 데 활용할 수 있습니다.

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<table><tbody><tr><td>12웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96웰 플레이트</td><td>사르슈테트</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>항-GAPDH 마우스 mAb (6C5)</td><td>시그마 알드리치</td><td>CB1001 시리즈</td><td>출처: 마우스; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>aSMA</td><td>시그마 알드리치</td><td>A5228&nbsp;</td><td>출처: 마우스; WB 희석: 1:3000</td></tr><tr><td>카베올린</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>CST3267</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>CD31-비오블루</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130-119-980</td><td>유세포 분석 Ab, 내피 세포 마커</td></tr><tr><td>CD326-PE(EpCAM)</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130113-826</td><td>Flow Cytometry Ab, 상피세포 마커</td></tr><tr><td>CD45-FITC</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130-110769</td><td>유세포 분석 Ab, 판 백혈구 마커</td></tr><tr><td>CD90-APC</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130-114-903</td><td>유세포 분석 Ab, 섬유아세포 마커</td></tr><tr><td>콜라겐 VI(COL6A1)</td><td>아브캠</td><td>AB182744</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>원뿔형 튜브 15mL</td><td>사르슈테트</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>원뿔형 튜브 50mL</td><td>사르슈테트</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mL 마이크로튜브</td><td>사르슈테트</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>배양판 직경 100mm&nbsp;</td><td>코 닝</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>배양판 직경 100mm&nbsp;</td><td>코 닝</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>배양 플레이트 직경 60mm&nbsp;</td><td>코 닝</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드(DMSO)</td><td>시그마 알디르치</td><td>D8418</td><td>생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>덜베코' s 수정된 독수리' s 중간(DMEM)</td><td>깁코</td><td>11965092</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>팍</td><td>아브캠</td><td>AB53066</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:500</td></tr><tr><td>FcR 차단 시약, 인간</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130-059-901</td><td>Fc 차단기</td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS)</td><td>깁코</td><td>16000044</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>필터링된 팁 10 & 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 100 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 1000 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 20 및 마이크로; L</td><td>사르슈테트</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>필터링된 팁 200 & micro; L</td><td>사르슈테트</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>필트로푸르 S 플러스 0,20 & 마이크로; m&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>집게(Forcep)</td><td>2바이오</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>세포 신호 전달 기술</td><td>D9F9D (13018)</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>Abclonal 기술</td><td>A0286</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>이미지J</td><td>국립 보건 연구소</td><td>버전 1.53c</td><td>이미지 분석용 소프트웨어</td></tr><tr><td>Incucyte ImageLock 96-웰 플레이트</td><td>사토리어스</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg; SX5</td><td>사토리어스</td><td>SX5</td><td>살아있는 세포 분석 기기&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 형질감염 시약</td><td>써모피셔 사이언티픽</td><td>11668019</td><td>양이온 지질 매개 형질감염 시약</td></tr><tr><td>맥스&reg; 티슈 스토리지 솔루션</td><td>밀테니 바이오텍</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트 리더(600nm 흡광도)</td><td>프로메가</td><td>GM3500 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브 1.5mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>엔카드</td><td>아브캠</td><td>AB18203</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>니트로 블루 테트라졸륨&nbsp;</td><td>시그마 알디르치</td><td>엔5514</td><td></td></tr><tr><td>파라필름&nbsp;</td><td>시그마 알디르치</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>p베이브-푸로-hTERT</td><td>아드진</td><td>1771</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>pCL-암포</td><td>노부스 바이오로지컬&nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>-20 > C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>PDGFRB</td><td>산타크루즈</td><td>SC-432</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신(PS, 10,000 & g/mL)&nbsp;</td><td>깁코</td><td>15140122</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>위상차 현미경&nbsp;</td><td>올림푸스&nbsp;</td><td>BX42 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수&nbsp; (PBS)</td><td>만든</td><td></td><td>NaCl, 137mM; KCl, 2.7mM; Na2HPO4, 10mM, KH2PO4, 1.8mM. 오토클레이브 및 RT에 보관</td></tr><tr><td>폴리-L-라이신 용액</td><td>시그마 알디르치</td><td>P8920</td><td>4 &deg에서 보관하십시오. C, 생물학적 후드에서 사용</td></tr><tr><td>퓨로마이신 이염산염</td><td>시그마 알디르치</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>Secura 세미 마이크로 저울</td><td>사토리우스</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 10mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 2mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 25 mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫 5 mL&nbsp;</td><td>사르슈테트</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>능력치3</td><td>중부 표준시</td><td>9139</td><td>출처: 마우스; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>통계3 Y705</td><td>중부 표준시</td><td>9131</td><td>출처: 토끼; WB 희석: 1:1000</td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>라이카</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>주사기 10mL</td><td>펜타페르테</td><td>00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>테르모믹서</td><td>에펜도르프</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA(0.5%), 페놀 레드 없음</td><td>깁코</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>빔</td><td>산타크루즈</td><td>SC-6260 시리즈</td><td>출처: 마우스; WB 희석: 1:2000</td></tr><tr><td>Vivaspin 20 원심 농축기&nbsp;</td><td>시그마 알디르치</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10,000 Da&nbsp;</td></tr><tr><td>바그너 가위</td><td>2바이오</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

전립선암 관련 섬유아세포의 분리, 배양 및 특성화

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

7명의 고급 PCa 환자의 CAF 및 NF 쌍이 이 프로토콜로 성공적으로 분리되었습니다. 수술 시 환자의 연령과 글리슨 점수는 표 3에 요약되어 있습니다. 파생된 섬유아세포 집단의 순도를 평가하기 위해, 계대 2개의 1차 CAF 및 NF를 분리하고 표시된 형광 항체 또는 요오드화 프로피듐으로 염색하여 세포사멸을 평가했습니다. 후속 FACS 분석의 대표적인 결과는 그림 2A에 표시되어 게이팅 전략과 각 마커에 대해 양성인 세포의 백분율을 강조합니다. 분석에는 상피 세포(EpCAM), 내피 세포(CD31), 면역 세포(CD45) 및 활성화 섬유아세포(CD90)에 대한 마커가 포함되었습니다. 결과는 세포가 대부분 상피, 내피 또는 면역 세포 마커에 대해 음성이었고 CAF 활성화의 마커로 간주되는 CD90에 대해 다양한 양성을 보였기 때문에 순수 섬유아세포의 성공적인 분리를 확인했습니다<sup...

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

암 관련의 섬유 아세포 (CAFs)는 확산, 혈관 신생 및 염증을 조장하는 신호를 통해 종양 개시, 성장과 진행을 촉진한다. 여기 우리는 표면 마커로 PDGFRα를 사용하여 셀 정렬에 의해 신선한 마우스와 인간의 조직에서 정상 섬유 아세포와 CAFs의 순수한 인구를 분리하는 방법을 설명합니다.

형광 활성 세포 정렬 (FACS)에 의해 신선한 조직으로부터 정상 및 암 관련 섬유 아세포의 분리

직접 인체 조직에서 암 줄기 세포 (암줄 기세포)의 분리는 생물학적 특성 분석을위한 필수입니다. 또한 어려운 단계를 문제 해결에 대한 팁을 제공하면서이 원고는, 인간의 조직에서 전립선 암줄 기세포의 분리를위한 방법을 설명합니다.

인간의 전립선 암 샘플에서 암 줄기 세포의 분리

여기에서는 다세포 상호 작용 및 암세포 행동의 세포 외 기질 의존적 조절을 조사하는 데 유용한 3차원에서 공동 배양하는 프로토콜을 제시합니다. 이 실험 모델에서는 인간 암 관련 섬유아세포가 내장된 콜라겐 겔에서 암세포를 배양합니다.

종양 기질 상호 작용에 대한 세 가지 차원의 공동 문화 모델

섬유아세포 행동은 다양한 임상 개체의 기초가 되지만, 주로 내재된 이질성으로 인해 특성화가 제대로 이루어지지 않은 상태로 남아 있습니다. 전통적인 섬유아세포 연구는 체외 조작, 생체 내 섬유아세포 거동 마스킹에 의존합니다. 세포 배양이 필요하지 않은 마우스 피부 섬유아세포의 분리를 위한 FACS 기반 프로토콜에 대해 설명합니다.

FACS에 의해 쥐 피부 섬유 아세포 격리

여기에서는 일차 전립선 상피 세포의 3차원 배양 및 후속 내강 분화를 지원하는 신속한 체외 시스템을 구축하는 방법을 제시합니다.

기본 전립선 세포 분화에 대한 신속한 필터 삽입 기반의 3D 문화 시스템

이 원고는 인간의 피부에서 유 두와 망상 섬유 아 세포를 분리 하기 위한 FACS 기반 프로토콜을 설명 합니다. 이는 시험관 문화를 우회 하 고,이는 일반적으로 사용 되는 격리 프로토콜을 통해 명시적으로 불가피 한 것 이었습니다. 발산 된 섬유 아 세포 서브 세트는 기능적으로 구별 되 고 진 피 내에서 차별적 유전자 발현 및 국 소화를 표시 한다.

형광 활성 세포 선별에의 한 인간의 피부에서 유 두 및 망상 섬유 아 세포의 분리

우리는 초보자 (예를 들어, 학생)에 의해 수행 할 수있는 쉽고 빠르고 신뢰할 수있는 방법으로 기본 성인 섬유 아아세포를 분리하는 프로토콜을 제시한다. 이 절차는 효소 조직 소화와 기계적 동요를 초음파와 결합하여 1 차 섬유 아아아를 얻습니다. 프로토콜은 특정 실험 요구 사항(예를 들어, 인간 조직)에 쉽게 적응될 수 있다.

초음파 증강 원발성 섬유아세포 분리

인간의 1차 전립선 상피 세포를 사용하여, 우리는 스페로이드 기반 의 라벨 보유 분석법에 의해 줄기 유사 세포의 기능적 특성화의 새로운 바이오마커 없는 방법을 보고합니다. BrdU, CFSE, 또는 파 레드 2D 셀 라벨링에 대해 단계별 프로토콜이 기재되어; 3 차원 스페로이드 형성; 면역 세포 화학에 의한 라벨-유지 줄기 유사 세포 식별; 및 FACS에 의해 격리.

3차원 스페로이드 배양에서 줄기와 같은 세포의 분리

섬유아세포의 순수한 인구를 얻는 것은 상처 수선 및 섬유증에 있는 그들의 역할을 공부하는 것이 중요합니다. 여기에 기재된 상세한 방법은 면역형광, RTPCR, 형광 보조 세포 선별에 의한 순도 및 기능성의 특성화에 이어 부상을 입지 않은 마우스 하트로부터 섬유아세포 및 근섬유아세포를 분리하는 상세한 방법이며, 콜라겐 젤 수축.

성인 심장 섬유 아세포 및 근섬유 아세포의 격리 및 특성화

이 논문은 삼중 음성 유방암의 합성 뮤린 모델과 종양 미세 환경을 대상으로 설계된 새로운 나노 입자의 전임상 연구를위한 응용 프로그램에서 1 차 암 관련 섬유 아세포의 격리 및 배양에 대한 프로토콜을 제공하는 것을 목표로합니다.

표적 나노 입자의 연구를 위한 유방암의 합성 Murine 모형에서 1 차적인 암 관련섬유세포의 격리

다세포 3D 종양 스페로이드는 폐 선암 세포, 섬유아세포 및 단핵구로 준비한 후 이러한 스페로이드에서 암 관련 섬유아세포(CAF)를 분리했습니다. 분리된 CAF를 정상 섬유아세포와 비교하여 미토콘드리아 막횡단 전위, 활성 산소 종 및 효소 활성을 연구하여 미토콘드리아 건강을 평가했습니다.

3D 다세포 폐 종양 스페로이드에서 분리된 암 관련 섬유아세포의 미토콘드리아 건강 평가

배우세요 전립선암 관련 섬유아세포(CAF)의 분리, 배양 및 특성화 방법을. 3D 오가노이드와 기능적 상호작용 분석을 통해 종양 미세환경에서 CAF의 역할을 연구하고 새로운 치료 전략을 개발하는 데 활용할 수 있습니다.

전립선암 관련 섬유아세포의 분리, 배양 및 특성화

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