Name: Drosophila 유충에서 전기 충격에 의해 유도된 발작 활동 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T16:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: 학습하세요 Drosophila 유충을 이용한 전기 충격 유도 발작 활동 분석 방법을 통해 신경과학 및 약리학 연구에서 새로운 항경련 화합물을 식별하고 발작 조절 메커니즘을 이해하는 데 활용할 수 있습니다.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>전극 홀더</td><td>세계 정밀기기&nbsp;</td><td>M3301</td><td></td></tr><tr><td>유리 모세관</td><td>하버드 악기</td><td>GC100F-10 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>텅스텐 와이어 (99.95%)</td><td>굿펠로우 케임브리지, 영국</td><td></td><td>직경 0.1mm</td></tr><tr><td>전압 자극기</td><td>Digitimer Ltd, 영국</td><td>DS2A mkII&nbsp;</td><td>정전압 절연 자극기&nbsp;</td></tr></tbody></table>

drosophila 유충에서 전기 충격에 의해 유도된 발작 활동

Seizure Activity Induced by Electroshock in Drosophila Larvae

수많은 초파리 돌연변이가 향상된 발작과 유사한 행동을 보인다 7,20. 이러한 돌연변이의 유전적 기초는 다양하며, 이는 인간 간질의 유사하게 다양한 유전적 원인을 유리하게 모방합니다. 가장 많이 연구된 초파리 돌연변이 중 세 가지는 parabangsenseless(parabss), julius seizure(jus) 및 easily-shocked(eas)입니다. parabss 돌연변이는 마비성 전압 개폐 Na+ 채널의 기능 이득을 초래하고, eas는 에탄올아민 키나아제를 인코딩하며, jus는 아직 확인되지 않은 막 단백질입니다(jus는 최근까...

Drosophila 유충에서 전기 충격에 의해 유도된 발작 활동

Epilepsy presents a significant health burden that is exacerbated by high numbers of individuals who are drug-refractory. Whilst some drug-refractory ...

우리는 초파리 초파리의 유충을 사용하여 간질에 대한 새로운 치료법을 식별합니다. 인간과 마찬가지로 파리는 발작을 일으키기 쉬운 유전적 돌연변이를 가지고 있을 수 있으며, 임상적으로 사용되는 항경련제를 사용하면 파리의 발작 중증도를 줄일 수 있습니다. 주요 과제는 파리 신경계의 작동을 완전히 이해하여 영역을 인간 뇌의 동등한 영역에 매핑할 수 있도록 하는 것입니다.인구의 약 1%가 간질을 앓고 있으며, 그 중 약 1/3은 현재 사용되고 있는 항경련제에 잘 반응하지 않습니다. 우리는 간질을 치료하는 새로운 방법을 모색하고 있습니다. 성충 파리보다는 파리 유충을 사용하는 것은 유충이 먹는 음식에 살기 때문에 유리합니다. 이것은 실험 약물을 매우 간단하게 추가할 수 있습니다. 발작을 유발하는 데 사용하는 기술도 간단하지만 효과적입니다.우리는 강력한 항경련 활성을 가진 일부 후보 약물을 확인했습니다. 이제 우리는 이러한 약물이 어떻게 작용하는지 이해하고 포유류에서 사용하기에 안전한지 테스트하는 데 중점을 둘 것입니다.[강사] 시작하려면 절차를 위한 전기 충격 프로브를 구성하십시오. 야생형 대조군 균주와 발작 돌연변이 균주 모두에서 약 100마리의 방황하는 3령 유충의 줄기를 사용할 수 있는지 확인하십시오. 유리병 벽에서 방황하는 3령 유충 한 마리를 제거하고 작은 플라스틱 페트리 접시에 넣습니다. 작은 붓을 사용하여 유충을 이중 증류수로 부드럽게 씻어 음식물 찌꺼기를 제거합니다. 이제 씻은 유충을 빈 플라스틱 접시에 옮깁니다. 집게를 사용하여 종이 타월의 작은 조각을 잡고 유충을 부드럽게 말립니다. 유충이 접시에 달라붙지 않도록 완전히 말리지 않고 과도한 물을 제거하십시오. 프로브 배치 중에 쉽게 다룰 수 있도록 유충이 30초 동안 회복되도록 합니다. 다음으로, 해부 현미경으로 15배에서 20배의 배율로 유충을 관찰합니다. 유충이 정상적인 기어 다니기를 재개하면 전기 충격 탐침을 중추 신경계 위의 전방 등쪽 표면에 부드럽게 놓습니다. 유충을 깊이의 약 1/3에서 1/2로 압축하여 손상을 일으키지 않고 적절한 전도성을 보장할 수 있도록 충분한 압력을 가합니다. 절연된 전압 자극기를 사용하여 2초 동안 정전압 펄스를 적용하며, 그 강도는 이전에 적정 곡선을 통해 보정되었습니다. 충격이 전달되는 즉시 타이머를 시작하십시오. 일시적인 마비, 경련 또는 구르는 행동의 징후가 있는지 유충을 관찰하십시오. 유충이 원래 위치에서 분명히 멀어지면 타이머를 중지하여 전방 연동 운동을 통해 회복되었음을 나타냅니다. 그런 다음 먼저 프로브 와이어를 100% 에탄올로 헹구고 이중 증류수를 헹굽니다. 배율로 전선을 검사한 후 전선 간격을 변경하지 않고 집게를 사용하여 잔여물을 부드럽게 긁어냅니다. 프로브를 사용하여 각 유전자형에 대해 전압당 약 15마리의 유충에게 다양한 전압의 2초 펄스를 전달합니다. 각 유충에게 한 번만 충격을 가하십시오. 각 유충의 회복 시간을 측정하고 유전자형 전반에 걸쳐 각 전압의 평균 회복 시간을 계산합니다. 그래프에 평균 복구 시간을 표시하고 데이터에 직선을 맞추십시오. 야생형과 발작 돌연변이 유충 사이의 회복 시간에 뚜렷하고 유의미한 차이를 보여주는 전압을 선택하십시오. 선택한 볼륨이 있는지 확인하십시오.tage는 처리량을 방해하는 장기간의 복구를 유발하지 않습니다. 약물 제조의 경우 적절한 용매에 용해된 약물을 고체 플라이 푸드의 표면에 직접 첨가하고 스며들고 증발할 때까지 시간을 허용하십시오. 또는 바이알에서 음식을 퍼서 다시 녹입니다. 온도가 섭씨 40도까지 식으면 약액을 넣고 와류 혼합기를 사용하여 완전히 혼합합니다. 처리된 식품의 약 5밀리리터를 다시 바이알에 붓고 사용하기 전에 굳히십시오. 최적의 용량을 결정하기 위해 다양한 약물 농도를 테스트하여 농도 구배를 실행합니다. 시험 유전자형의 유충이나 약물에 노출된 유충에게 전기 충격을 가하고 발작 회복 시간을 측정합니다. 300초의 컷오프 시간을 적용하여 지나치게 긴 복구 시간을 제거합니다. 회복 시간이 30초를 초과하는 발작만 정량화 가능한 것으로 기록하십시오. 프로브는 보정되었고 라인 피팅에서 돌연변이가 야생형에 비해 모든 전압에서 증가된 발작 회복 시간을 보였음이 분명했습니다. 발작 회복 시간은 식도 유전자형에 따라 크게 달랐으며, 무감각한 파라뱅은 가장 긴 회복 시간을 보였고 줄리어스 발작은 돌연변이 중 가장 짧았습니다. 발프로산나트륨과 페니토인 치료는 비히클 대조군에 비해 파라뱅 무감각 돌연변이체의 발작 회복 시간을 유의하게 감소시켰습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기 Drosophila의 유충의 신경근육학 교차점에서 시냅스 전송을 측정 electrophysiological 방법을 설명합니다. Evoked 릴리스는 모터 신경의 axons을 자극하여 인공적으로 시작되며, NMJ을 통해 전송은 근육에 evoked postsynaptic 반응에 의해 측정할 수 있습니다.

Drosophila의 애벌레의 NMJ에서 시냅틱 후보를 녹음 Electrophysiological 방법

고주파 전기 자극 압수와 같은 활동을 사용하는 것은에서 유도된 수...

의 간질 발작의 돌연변이에 대한 Neurocircuit의 Assays Drosophila</em

이 절차에 신경근육학 교차로 (NMJ)에서 광 펄스로 신경 잠재력을 보여주고에 푸른 빛을 활성화 algal 채널 및 셀 - 특정 유전자 표현 도구를...

에서 시냅틱 후보의 Channelrhodopsin2 중재 ​​자극 Drosophila 신경근육학 분기점

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

이 비디오는 초파리 유충의 중추신경계(CNS)에서 신경 세포 활동을 세포 외로 기록하는 것을 보여줍니다. transection된 CNS는 기록 챔버에 배치되고 하행 신경의 전기 활동을 기록하여 기준선 발사 빈도를 설정합니다. 그런 다음 테스트 에이전트를 도입하고 발사 빈도의 변화를 기록하여 에이전트의 흥분 또는 억제 효과를 결정합니다.

초파리 중추신경계의 전기적 활동에 대한 세포외 기록

애벌레의 zebrafish forebrain에서 세포 필드 잠재력을 기록하는 간단한 방법이 설명되어 있습니다. 방법은 강력한를...

애벌레의 Zebrafish의 Forebrain Electrophysiological 기록

성인 초파리 연상 메모리를 측정하는 방법을 설명한다. 분석은 네거티브 강화제 (감전)되게 냄새를 연결하고 메모리가 측정 될 수 있도록 추후에이 정보를 기억하는 비행의 능력에 기초한다.

초파리 성인 후각 충격 학습

무료로 제공하고 저렴 소프트웨어 프로그램의 웹캠과 조합하여, 초파리 melanogaster의 기관차 패턴은 속도, 거리, 다양한 모터 활동의 시간의 차이를 검출하기 위해 분석 될 수있다.

발작과 같은 활동을 분석하고 운동을위한 저가의 방법<em&gt; 초파리</em

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

여기서, 우리는 DEPDC5 유전자의 일시적인 억제로 인한 간질의 제브라피시 모델의 개발 및 특성화를 위한 프로토콜을 제시한다.

간질의 제브라피시 모델의 행동 및 생리학적 분석

여기에서는 간질 활동을 모니터링하기 위해 GCaMP6 발현 성인 초파리의 생체 외 칼슘 이미징 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 생체 외 칼슘 이미징을 통해 성인 초파리의 ictal 사건을 조사하는 데 유용한 도구를 제공하여 세포 수준에서 간질의 잠재적 메커니즘을 탐구할 수 있도록 합니다.

Ex Vivo (체외 주행) 간질의 초파리 모델을 위한 칼슘 영상

학습하세요 Drosophila 유충을 이용한 전기 충격 유도 발작 활동 분석 방법을 통해 신경과학 및 약리학 연구에서 새로운 항경련 화합물을 식별하고 발작 조절 메커니즘을 이해하는 데 활용할 수 있습니다.

Drosophila 유충에서 전기 충격에 의해 유도된 발작 활동

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