Name: ELISA(Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 사용한 고형 조직의 cGMP(Cyclic Guanosine Monophosphate) 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 배우세요 경쟁적 ELISA를 사용하여 고형 조직에서 cGMP 농도를 측정하는 방법을. 돼지 조직 샘플을 분쇄하고 균질화한 후 면역분석을 수행하여 산화질소 신호전달 경로를 연구합니다. 이 프로토콜은 다양한 조직 유형에 쉽게 적용할 수 있습니다.

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<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD 투명 경구 주사기</td><td>벡턴 디킨슨</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>14 mL 둥근 바닥 시험관</td><td>송골매</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>2.0ml 마이크로튜브, 모듬</td><td>올림푸스 플라스틱</td><td>24-283A</td><td></td></tr><tr><td>30-300 & 마이크로; L 다중 채널 피펫&nbsp;</td><td>에펜도르프</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>무수아세트산(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400031</td><td>98% 순수 Hazard: 가연성, 부식성: 심하게 피부 화상, 눈 손상, 급성 독소 안전한 취급: 발화원에서 멀리 보관하고, 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고, 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>cGMP 아세틸콜린에스테라아제 추적자(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>481020</td><td>인산이염기성 칼륨, 염화나트륨,&nbsp; 인산일염기성 칼륨, 소 알부민, 아지드화나트륨, EDTA, cGMP AChE 추적자 Hazard: 건강 위험: 반복 노출로 인한 장기 독성, 부식성: 눈 손상, 피부 및 호흡기 자극제 안전한 취급: 환기가 잘되는 곳에서 작업, 장갑 착용</td></tr><tr><td>cGMP ELISA 항혈청(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>481022</td><td>인산이염기성 칼륨, 염화나트륨,&nbsp; 인산칼륨 일염기성, 소 알부민,&nbsp; 아지드나트륨, EDTA, 토끼 항-cGMP 다클론 항혈청 Hazard: 건강 위험: 반복 노출로 인한 장기 독성, 부식성: 눈 손상, 피부 및 호흡기 자극제, 급성 독성 안전한 취급: 환기가 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>cGMP ELISA 표준물질(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>481024</td><td>인산이염기성 칼륨, 염화나트륨,&nbsp; 인산칼륨 일염기성, 소 알부민,&nbsp; 아지드나트륨, EDTA, cGMP 표준 Hazard: 건강 위험: 반복 노출로 인한 장기 독성, 부식성: 눈 손상, 피부 및 호흡기 자극제 안전한 취급: 환기가 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>순환 GMP ELISA 키트</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>ELISA 완충액 농축액 10X(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400060</td><td>1 M 인산염, 1% BSA, 4 M 염화나트륨, 10 mM EDTA, 0.1% 아지드화나트륨 Hazard: 건강 위험: 반복 노출로 인한 장기 독성, 부식성: 눈 손상, 피부 및 호흡기 자극제 안전한 취급: 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고 뚜껑을 닫을 수 있는 용기에 보관하고 장갑을 착용하십시오</td></tr><tr><td>ELISA 시약 저장소</td><td>피어스(현 써모피셔 사이언티픽)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>Ellman's Reagent(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400050</td><td>인산이염기성 칼륨, 염화나트륨, 인산일염기성 칼륨, 아세틸티오콜린(요오드화물), 5,5'-디티오비스-(2-니트로벤조산) Hazard: 급성 독성, 건강 유해성: 장기 독성, 부식성: 눈 손상, 피부 자극제, 회복성 자극제 안전한 취급: 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>염산</td><td>시그마-알드리치</td><td>320331</td><td><강함>유해성</강함>: 부식성: 금속을 부식시키고, 피부를 심하게 화상을 입히고, 눈 손상, 호흡기 자극성 <강함>강함안전한 취급</강함>: 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>액체 질소</td><td>로버트의 산소</td><td></td><td>질소 Hazard: 압축 가스: 극저온 화상, 동상, 질식 위험 안전한 취급: 환기가 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>마우스 Anti-Rabbit IgG 코팅 플레이트(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400006</td><td> 위험: 없음</td></tr><tr><td>새로운 클래식 MF 밸런스</td><td>메틀러 토레도</td><td></td><td></td></tr><tr><td>궤도 셰이커&nbsp;</td><td>Stovall Life Science Inc.(현 IBI Scientific)</td><td>15-453-211 (다양함)</td><td></td></tr><tr><td>파라필름</td><td>베미스 컴퍼니, Inc.</td><td>3023-4526 (다양함)</td><td></td></tr><tr><td>폴리소르베이트 20(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400035</td><td> 위험: 없음</td></tr><tr><td>수산화칼륨(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400029</td><td>85% 순수 Hazard: 부식성: 금속 및 피부 부식, 눈 손상, 급성 독성 안전한 취급: 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>Precellys Evolution 균질화기</td><td>베르틴 테크놀로지스</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>Precellys 용해 키트 경조직 균질화</td><td>베르틴 테크놀로지스</td><td>P000911-LYSK0-A</td><td></td></tr><tr><td>Sense 마이크로플레이트 리더</td><td>하이덱스</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 17R 원심분리기</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>조직 분쇄기</td><td>셀크러셔</td><td>셀크러셔 키트</td><td></td></tr><tr><td>소용돌이 지니 2</td><td>과학 산업&nbsp;</td><td>SI-0246</td><td></td></tr><tr><td>워시 병</td><td>시그마-알드리치</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>세척 완충액 농축액 400X(cGMP 키트 포함)</td><td>케이맨 화학 회사</td><td>400062</td><td>인산이염기성 칼륨, 인산일염기성 칼륨, 물 <강함>위험성</강함>: 부식성: 눈 손상, 급성 독성, 피부 자극성, 장기 독성 <강함>안전한 취급</강함>: 통풍이 잘되는 곳에서 작업하고 장갑을 착용하십시오.</td></tr></tbody></table>

elisa(competitive enzyme-linked immunosorbent assay)를 사용한 고형 조직의 cgmp(cyclic guanosine monophosphate) 측정

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

식이 염화나트륨(0.15mmol/kg) 또는 15N-표지 질산염(0.15mmol/kg)으로 처리된 요크셔 국내 돼지를 차우의 볼루스로 5일 연속 하루에 한 번 투여하고 조직 채취 전에 헤파린 나트륨(0.9% 염화나트륨) 용액을 관류했습니다. 컬렉션에 대한 모든 세부 사항은 이전에 발표되었습니다19. 요크셔 사육 돼지 4마리의 둔근 및 간에서의 cGMP 농도는 설명된 ELISA 프로토콜에 따라 측정되었습니다. 간 조직은 1:5 희석 비율로, 둔근은 1:10 희석 비율로 0.1N 염산(HCl)을 첨가하여 단백질을 침전시켰다. HCl-희석된 균질산염을 아세틸화한 다음 간 및 둔근 샘플 모두에 대해 1:2 및 1:3 희석 비율로 ELISA 완충액으로 희석했습니다. cGMP 농도는 상기와 같이 측정하였다. 흡광도는 상기 프로토콜에 명시된 바와 같이 준비된 샘플의 밀리리터당 cGMP의 피코몰로 전환된 다음 조직 그램당 cGMP의 나노몰(nmol/g)로 전환되었습니다.
간 조직에서 측정된 cGMP 농도는 위의 조건에서 최적의 실험 결과를 도출했습니다. 돼지 간에서 질산염 처리된 대조군과 대조군의 cGMP 농도는 각각 0.0202 nmol/g ± 0.003 nmol/g 및 0.0364 nmol/g ± 0.011 nmol/g의 조직입니다(그림 3). 몇 가지 값은 결과의 신뢰성을 확인합니다. 0.466 - 0.475 범위의 블랭크를 뺀B0 웰의 흡광도는 0.3 AU - 1.0 AU 범위에 속하며, 이는 Ellman의 시약으로 충분한 마이크로플레이트 개발을 검증합니다. 표준 곡선의 높은 품질은 표준 1에서 표준 8까지 흡광도의 점진적 증가와 0.99의 결정 계수로 검증된 표준 곡선의 선형성에 의해 나타납니다. 측정된 모든 유정(31.5%-71.2%)의 백분율 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> 은 20%에서 80% 사이이며, 이는 모든 샘플이 표준 곡선에 속한다는 것을 입증합니다. 명시된 특성을 가진 샘플은 해석에 적합합니다.
둔근 조직에서 측정된 cGMP 농도는 차선의 실험 결과를 산출했습니다. 둔근 웰의 백분율 <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> 값(3.69%-27.3%)이 대부분 20% 미만으로 떨어졌기 때문에 최적이 아닌 레이블이 대둔근 결과에 할당되며, 이는 흡광도가 표준 곡선에 떨어지기 위해 더 많은 희석 샘플이 필요함을 나타냅니다. 돼지 둔근에서 대조군과 질산염 처리된 그룹의 cGMP 농도는 각각 조직 1.22 nmol/g ± 0.49 nmol/g 및 조직 0.732 nmol/g ± 0.18 nmol/g입니다(그래프는 표시되지 않음). 둔근 샘플은 간 샘플의 B0 웰 및 표준물질의 흡광도를 공유합니다. 이러한 차선의 표본을 사용하면 잘못된 결론을 내릴 수 있습니다. 따라서 더 많은 희석 샘플을 준비하고 cGMP 농도를 재측정해야 합니다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
그림 3: 간 조직의 cGMP 농도. 조직의 nmol/g에서 염화나트륨(0.15mmol/kg) 또는 15N 표지 질산염(0.15mmol/kg)으로 처리된 돼지 간의 평균 cGMP 농도. n = 4; 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. 데이터는 Welch의 t-test에 의해 분석되었습니다. ns는 무의미(no significance)를 의미합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

ELISA(Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 사용한 고형 조직의 cGMP(Cyclic Guanosine Monophosphate) 측정

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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복잡한 생물학적 시료의 측정 생체 점점 의사 결정 임상 지침입니다. 우리는 동시에 심장 미오신 결합 단백 C, 크레아틴 키나제 MB, 심근 경색 및 건강한 대조군과 과목에서 혈청 샘플에서 심장 트로포 닌 I를 측정하는 매우 민감한 방법을 설명합니다.

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S1P는 S1P 수용체(S1PRs) 서브패밀리를 통해 다양한 생리적 효과를 발휘한다. 여기에서는 S1PR의 구조와 기능에 대해 설명하기 위해 파이프 라인에 대해 설명합니다.

스핑고신 1-인산염 수용체의 구조와 신호전달 경로를 조사하는 파이프라인

인간 혈장 내 칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(CGRP) 농도와 관련된 발표된 데이터는 일관성이 없습니다. 이러한 불일치는 이 신경펩티드를 정량화하기 위한 표준화되고 검증된 방법론이 없기 때문일 수 있습니다. 여기에서는 인간 혈장에서 CGRP를 정제하고 정량화하기 위한 검증된 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 프로토콜을 설명합니다.

변형된 효소 결합 면역흡착 분석을 사용한 인간 혈장 내 칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(CGRP)의 검출 및 정량화

이 연구에서 제시된 프로토콜은 두 가지 방법을 통해 cAMP를 측정하는 데 있어 cAMP Difference Detector In Situ  의 효과를 보여줍니다. 한 가지 방법은 HEK-293 셀이 있는 96웰 플레이트 판독 분광 광도계를 사용하는 것입니다. 다른 방법은 형광 현미경으로 개별 HASM 세포를 보여줍니다.

In Situ Fluorescent cAMP Difference Detector를 사용한 살아있는 세포의 실시간 cAMP 역학

새로운 anti-HER2 단클론 항체를 사용하여 검증된 샌드위치 ELISA 분석을 제시합니다. 이 분석을 통해 체외 배양 세포 및 혈액 및 조직을 포함한 기타 샘플에서 세포 결합 및 방출 HER2 단백질을 정밀하게 정량화할 수 있습니다.

세포에서 방출되고 세포에 결합하는 인간 표피 성장 인자 수용체 2의 포괄적인 측정을 위한 검증된 면역화학 분석

그것은 널리 본문에 기계적 세력 세포 분화와 증식에 영향을 미칠 수 있음을 이해합니다. 여기 유연한 micropatterned 기판에 교양 세포를 막기 위해 uniaxial 순환 인장 응력을 제공하는 맞춤식 생물 반응기의 사용을 보여주는 비디오 프로토콜을 제시한다.

순환 Uniaxial 스트레인을 사용하여 줄기 세포의 기계적 자극

배우세요 경쟁적 ELISA를 사용하여 고형 조직에서 cGMP 농도를 측정하는 방법을. 돼지 조직 샘플을 분쇄하고 균질화한 후 면역분석을 수행하여 산화질소 신호전달 경로를 연구합니다. 이 프로토콜은 다양한 조직 유형에 쉽게 적용할 수 있습니다.

ELISA(Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)를 사용한 고형 조직의 cGMP(Cyclic Guanosine Monophosphate) 측정

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