혈액 오염이 없는 Murine Nasal Lavage Fluid Collection

우리의 연구는 쥐로부터 비강 세척액을 대량으로 수집하는 방법을 개발하여 높은 수율 달성과 혈액 오염 방지라는 두 가지 주요 과제를 해결하는 데 중점을 두고 있습니다.

비강 세척액을 수집하는 방법에는 더 많은 양을 생성하는 인두 경로와 혈액 오염을 줄이는 기관 경로의 두 가지 접근 방식이 있습니다.

우리의 방법을 사용하면 인두에서 많은 양의 비강 세척액을 수집할 수 있으며, 설치류의 입에 면봉을 넣으면 혈액 오염을 최소화하는 데 도움이 됩니다. 이 접근 방식은 간단하고 비용 효율적입니다.

샘플의 혈액 오염을 감지하기 위해 루미놀 반응으로 알려진 법의학 방법을 사용합니다. 루미놀 반응은 다른 방법보다 간단하고 민감합니다.

혈액 내 IgG 농도는 비강 세척액의 IgG 농도보다 훨씬 높습니다. 혈액 오염을 피하는 우리의 방법은 면역학 연구에서 매우 중요합니다. 또한 혈액 오염으로 인해 정확도가 저하될 수 있는 마이크로바이옴과 같은 다른 분자를 분석하는 데에도 적합합니다.

[해설자] 시작하려면 안락사된 쥐를 수술용 플레이트에 등을 대고 핀을 사용하여 네 팔다리를 모두 고정합니다. 1밀리리터 주사기를 사용하여 심장에서 혈액을 채취합니다. 가위를 사용하여 복강을 열어 내장 기관과 횡격막을 노출시킵니다. 횡격막과 갈비뼈를 절개하여 오른쪽 심방을 드러냅니다. 그런 다음 가위로 우심방에 구멍을 뚫어 남은 혈액을 배출합니다. 혀를 앞으로 당기면서 세 개의 면봉을 동물의 입에 넣습니다. 그런 다음 머리를 코를 위로 올리고 가위를 사용하여 아래턱을 분리하여 비강 세척액의 혈액 오염을 방지합니다. 혈액 오염을 방지하기 위해 면봉을 새 것으로 교체하십시오. 출혈이 멈춘 후 200마이크로리터의 멸균 PBS를 choana에 주입하고 콧구멍에서 분출된 비강 세척액을 1.5밀리리터 튜브에 모으십시오. 화학발광 검출을 위한 원액을 준비하려면 1.5밀리리터 튜브 내부의 멸균수 1밀리리터에 루미놀 1밀리그램과 과산화나트륨 5밀리그램을 녹입니다. 튜브를 알루미늄 호일로 덮고 사용할 때까지 섭씨 4도에서 보관하십시오. 다음으로, 원액을 탈이온수로 10배 희석하여 작업 용액을 준비합니다. 2마이크로리터의 비강 세척액 샘플을 96웰 플레이트의 웰에 피펫팅합니다. 희석된 루미놀 용액 100마이크로리터를 각 웰에 넣고 96웰 플레이트를 짧게 흔들어 내용물을 혼합합니다. 어둠 속에서 화학발광 반응을 직접 관찰하십시오. 이 그림은 다양한 샘플 유형에 대한 면역글로불린 A 농도를 비교한 것입니다. 비강 세척액에서 면역글로불린 A의 농도는 기존 방법에 비해 새로운 방법을 사용하여 수집한 샘플에서 더 낮은 반면, 혈청 및 기관지폐포 세척액 샘플은 두 방법 간에 실질적인 차이를 나타내지 않습니다. 이 데이터는 새로운 방법이 비강 샘플의 오염을 줄여 보다 정확한 면역글로불린 A 측정으로 이어진다는 것을 시사합니다. 면역글로불린 G에서도 유사한 패턴이 관찰되며, 기존 방법에 비해 새로운 방법을 사용하여 수집된 비강 세척액의 농도가 현저히 낮습니다. 대조적으로, 혈청 및 기관지폐포 세척액 샘플은 두 방법 간에 의미 있는 차이를 다시 나타내지 않으며, 이는 새로운 접근법이 비강 샘플의 오염을 일관되게 줄이고 면역글로불린 G 측정의 신뢰성을 향상시킨다는 것을 시사합니다.