장기간의 일측성 요관 폐색의 역전 후 장기적인 구조적 및 기능적 결과를 평가하기 위한 마우스 모델

내 연구실은 신장 손상 후 장기적인 결과를 개선하기 위한 메커니즘과 치료법에 대해 연구하고 있으며, 이 프로토콜의 구체적인 초점은 요로 폐쇄 역전 후 장기적인 결과를 연구하기 위한 도구를 개발하는 것입니다. 우리는 편측성 가역적 요관 폐쇄의 마우스 모델을 개발하여 신장의 요로 폐쇄를 역전시키는 장기적인 기능적 및 구조적 결과를 평가할 수 있습니다. 다른 방법에는 여러 번의 수술이나 미세수술 전문 지식이 필요하지만 대부분의 실험실에서는 접근할 수 없습니다. 또한 이것은 일방적인 폐쇄이기 때문에 대부분의 다른 방법에서는 분할 신장 기능 검사를 수행하지 않고는 회복의 기능적 평가를 허용하지 않습니다. 실제로는 두 개뿐입니다. 첫 번째는 각 실험에서 근위 요관의 동일한 위치에 혈관 클램프를 일관되게 배치하는 것이고, 두 번째는 요관이나 신장에 손상을 주지 않고 며칠 후에 혈관 클램프를 제거하는 것입니다.

[레이첼] 시작하려면 마취된 마우스의 수술 쪽을 방부제로 준비합니다. 가위와 겸자를 사용하여 피부와 피하층을 통해 정중선을 따라 1.5cm 길이의 세로 등쪽 절개를 합니다. 왼쪽 옆구리 근육과 신장 위의 근막을 통해 작은 절개를 합니다. 그런 다음 한 쌍의 집게로 왼쪽 신장을 외부화합니다. 무딘 겸자 사용. 아래쪽 극의 지방과 요관 근처의 일부 결합 조직을 조심스럽게 해부합니다. 요관 부위를 찾습니다. 그런 다음 클램프에 신장 정맥과 동맥이 포함되지 않도록 결합 조직과 함께 요관을 신장 척추경에서 분리합니다. 클램프 어플라이어를 사용하여 혈관 클램프를 열고 요관의 신우 바로 아래에 위치시킵니다. 클램프의 표시를 사용하여 모든 마우스에 균일한 압력이 가해지도록 합니다. 이제 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 클램프로 신장을 후복막 공간으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 그런 다음 흡수성 봉합사를 사용하여 근육층을 봉합합니다. 스킨 클립을 사용하여 스킨 레이어를 닫습니다. 요관 클램프를 제거하려면 상처 클립을 제거한 다음 클램프에 접근하기 위해 원래 절개 부위를 사용하여 모양을 바꾸지 않고 수술 부위를 청소하십시오. 근육층을 다시 열고 후복막 공간을 노출시킵니다. 집게를 사용하여 신장을 외부화하지 않고 후복막 공간에서 클램프를 조심스럽게 찾습니다. 클램프 부착기를 사용하여 클램프를 부드럽게 열고 집게를 사용하여 주변 조직을 당겨 안전하게 제거합니다. 이제 신장을 외부화하여 신우의 폐색 여부를 검사합니다. 부어오른 신우는 수신증을 확인합니다. 식염수에 적신 멸균 면봉을 사용하여 신장을 후복막 공간으로 다시 밀어 넣고 그림과 같이 절개 부위를 봉합합니다. 반대쪽 신장 절제술을 시행하려면 원래 피부 절개를 사용하여 등쪽 부위를 다시 엽니다. 크기는 오른쪽 옆구리 근육과 신장 위의 근막입니다. 그런 다음 겸자를 사용하여 오른쪽 신장을 외부화합니다. 매끄럽고 구부러진 겸자로 오른쪽 신장을 잡고 주변 조직에서 제거된 상극과 하극을 해부합니다. 신장을 풀어준 후 이중 수술 매듭을 사용하여 신장 혈관과 요관 주위에 Foro 실크 봉합사를 묶습니다. 신장이 어두워질 때까지 약 30초 동안 기다리십시오. 그런 다음 매끄럽게 구부러진 집게로 잡고 곡선 가위를 사용하여 매듭 말단부로 잘라 제거합니다. 식염수에 적신 멸균 면봉을 사용하여 남은 신추경을 후복막 공간으로 부드럽게 밀어 넣은 다음 봉합사와 클립을 사용하여 근육과 피부층을 닫습니다. 전형적인 생존 및 신장 기능 측정은 가역적 편측 요관 폐쇄 후 84일 후에 수행되었습니다. 기능적 연구는 혈중 요소 질소, 경피 사구체 여과율 및 18시간 수분 결핍 후 소변 삼투압에 대해 가역적 편측 요관 폐쇄를 신장 절제술 단독과 비교했습니다. 소변 삼투압 값은 같은 시점에서 신장 절제술 대조군 마우스보다 현저히 낮았습니다.