Name: 대장균에서 독성 뉴클레아제를 과발현 및 정제 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: 학습하세요 대장균에서 독성 뉴클레아제 Nsp15를 과발현하고 친화성 및 크기 배제 크로마토그래피로 정제하는 방법을. 이 기법은 다른 바이러스성 뉴클레아제 연구와 치료 표적 개발에 활용됩니다.

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<ol><li>Francis, D. M., Page, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+to+optimize+protein+expression+in+E.+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Strategies to optimize protein expression in E. coli.</a> Curr Protoc Protein Sci. 61 (1), 5.24.1-5.24.29 (2010).</li>
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<li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronavirus+endoribonuclease+ensures+efficient+viral+replication+and+prevents+protein+kinase+R+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Coronavirus endoribonuclease ensures efficient viral replication and prevents protein kinase R activation.</a> J Virol. 95 (7), e02103-e02120 (2021).</li>
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<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diversity+for+endoribonuclease+nsp15-mediated+regulation+of+alpha-coronavirus+propagation+and+virulence%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Diversity for endoribonuclease nsp15-mediated regulation of alpha-coronavirus propagation and virulence.</a> Microbiol Spectr. 11 (6), e02209-e02223 (2023).</li>
<li>Guarino, L. A., Bhardwaj, K., Dong, W., Sun, J., Holzenburg, A., Kao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutational+analysis+of+the+SARS+virus+nsp15+endoribonuclease%3A+identification+of+residues+affecting+hexamer+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Mutational analysis of the SARS virus nsp15 endoribonuclease: identification of residues affecting hexamer formation.</a> J Mol Biol. 353 (5), 1106-1117 (2005).</li>
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<li>Pillon, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryo-EM+structures+of+the+SARS-CoV-2+endoribonuclease+nsp15+reveal+insight+into+nuclease+specificity+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cryo-EM structures of the SARS-CoV-2 endoribonuclease nsp15 reveal insight into nuclease specificity and dynamics.</a> Nat Commun. 12 (1), 636(2021).</li>
<li>Kim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+nsp15+endoribonuclease+NendoU+from+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of nsp15 endoribonuclease NendoU from SARS-CoV-2.</a> Protein Sci. 29 (7), 1596-1605 (2020).</li>
<li>Chaga, G., Hopp, J., Nelson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilized+metal+ion+affinity+chromatography+on+Co2%2B+carboxymethylaspartate-agarose+Superflow%2C+as+demonstrated+by+one-step+purification+of+lactate+dehydrogenase+from+chicken+breast+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Immobilized metal ion affinity chromatography on Co2+ carboxymethylaspartate-agarose Superflow, as demonstrated by one-step purification of lactate dehydrogenase from chicken breast muscle.</a> Biotechnol Appl Biochem. 29 (1), 19-24 (1999).</li>
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<li>Wang, X., Zhu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+nsp15+preferentially+degrades+AU-rich+dsRNA+via+its+dsRNA+nickase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 nsp15 preferentially degrades AU-rich dsRNA via its dsRNA nickase activity.</a> Nucleic Acids Res. 52 (9), 5257-5272 (2024).</li>
<li>Zheng, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insight+into+the+evolution+of+nidovirus+endoribonuclease+based+on+the+finding+that+nsp15+from+porcine+deltacoronavirus+functions+as+a+dimer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insight into the evolution of nidovirus endoribonuclease based on the finding that nsp15 from porcine deltacoronavirus functions as a dimer.</a> J Biol Chem. 293 (31), 12054-12067 (2018).</li>
<li>Huang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+analysis+of+RNA+cleavage+by+coronavirus+nsp15+endonuclease%3A+evidence+for+acid-base+catalysis+and+substrate-dependent+metal+ion+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetic analysis of RNA cleavage by coronavirus nsp15 endonuclease: evidence for acid-base catalysis and substrate-dependent metal ion activation.</a> J Biol Chem. 299 (6), 104787(2023).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+biochemical+characterization+of+endoribonuclease+nsp15+encoded+by+Middle+East+respiratory+syndrome+coronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Structural and biochemical characterization of endoribonuclease nsp15 encoded by Middle East respiratory syndrome coronavirus.</a> J Virol. 92 (22), e00893-e00918 (2018).</li>
<li>Jernigan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Room-temperature+structural+studies+of+SARS-CoV-2+protein+NendoU+with+an+X-ray+free-electron+laser%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Room-temperature structural studies of SARS-CoV-2 protein NendoU with an X-ray free-electron laser.</a> Structure. 31 (2), 138-151.e5 (2023).</li>
<li>Ricagno, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystallization+and+preliminary+X-ray+diffraction+analysis+of+nsp15+from+SARS+coronavirus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Crystallogr+F+Struct+Biol+Cryst+Commun%22%5BJournal%5D)">Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of nsp15 from SARS coronavirus.</a> Acta Crystallogr F Struct Biol Cryst Commun. 62 (4), 409-411 (2006).</li>
<li>Canal, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+SARS-CoV-2+antiviral+compounds+by+screening+for+small+molecule+inhibitors+of+nsp15+endoribonuclease%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Identifying SARS-CoV-2 antiviral compounds by screening for small molecule inhibitors of nsp15 endoribonuclease.</a> Biochem J. 478 (13), 2465-2479 (2021).</li>
<li>Bhardwaj, K., Guarino, L., Kao, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+nsp15+protein+is+an+endoribonuclease+that+prefers+manganese+as+a+cofactor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">The severe acute respiratory syndrome coronavirus nsp15 protein is an endoribonuclease that prefers manganese as a cofactor.</a> J Virol. 78 (22), 12218-12224 (2004).</li>
<li>De Marco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+successful+recombinant+expression+of+disulfide+bond-dependent+proteins+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Cell+Fact%22%5BJournal%5D)">Strategies for successful recombinant expression of disulfide bond-dependent proteins in Escherichia coli.</a> Microb Cell Fact. 8 (1), 26(2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 & 마이크로; m PES, 살균, 저단백 결합, 필터 시스템, 1 L</td><td>코 닝</td><td>431098</td><td></td></tr><tr><td>AEBSF 세린 프로테아제 억제제</td><td>골드바이오</td><td>30827-99-7</td><td></td></tr><tr><td>한천, 세균학</td><td>암레스코</td><td>제이637</td><td></td></tr><tr><td>&Auml; KTA GO 정화 시스템</td><td>사이티바</td><td>29383015</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra 15 mL, 30 kDa MWCO 농축기</td><td>밀리포어</td><td>UFC903024</td><td></td></tr><tr><td>암피실린 나트륨</td><td>골드바이오</td><td>A-301-25</td><td></td></tr><tr><td>당혹감 쉐이크 플라스크</td><td>날진&nbsp;</td><td>F0527</td><td></td></tr><tr><td>벤치탑 원심분리기</td><td>에펜도르프&nbsp;</td><td>5920 R</td><td></td></tr><tr><td>바이오 광도계 플러스</td><td>에펜도르프</td><td>E-BP6132 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>소 트롬빈</td><td>바이오팜</td><td>91-030</td><td></td></tr><tr><td>브래드포드 염료 시약</td><td>보스턴 바이오 프로덕츠</td><td>BPA-200</td><td></td></tr><tr><td>브로모페놀 블루</td><td>시그마-알드리치</td><td>114931</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>디지털 건식 목욕</td><td>바이오 래드</td><td>1660562</td><td></td></tr><tr><td>일회용 스프레더, L자형</td><td>MedSupply 파트너</td><td>62-1014-1</td><td></td></tr><tr><td>디티오스레이톨</td><td>골드바이오</td><td>27565-41-9</td><td></td></tr><tr><td>소 췌장에서 추출한 DNaseI</td><td>시그마-알드리치</td><td>D4527</td><td></td></tr><tr><td>Douce 티슈 그라인더, 40 mL</td><td>휘튼</td><td>357546</td><td></td></tr><tr><td>Econo-column 크로마그토그래피 컬럼</td><td>바이오 래드</td><td>737-1532</td><td></td></tr><tr><td>엔듀로 미니믹스 장동 믹서</td><td>랩넷</td><td>S0600</td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>시그마-알드리치</td><td>459844</td><td></td></tr><tr><td>Excella E25R Inc/Ref 셰이커</td><td>에펜도르프</td><td>NB-E25R</td><td></td></tr><tr><td>패스트펫 V2</td><td>랩넷</td><td>2000 피</td><td></td></tr><tr><td>Fiberlite F10-4x1000 LEX 고정각 로터</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>096-041075</td><td></td></tr><tr><td>Fiberlite F21-8x50y 고정각 로터</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>096-084275</td><td></td></tr><tr><td>젤 독 EZ 이미저</td><td>바이오 래드</td><td>1708270</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마-알리히</td><td>지5516</td><td></td></tr><tr><td>글리신</td><td>바이오 래드</td><td>161-0718</td><td></td></tr><tr><td>헴스</td><td>시그마-알드리치</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>핫 플레이트 교반기</td><td>VWR</td><td>12365-346</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>VWR</td><td>BDH3028</td><td></td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>골드바이오</td><td>902-25번</td><td></td></tr><tr><td>이소프로필-&szlig;-D-티오갈락티오사이드(IPTG)</td><td>골드바이오</td><td>12481C25</td><td></td></tr><tr><td>Lemo21(DE3) 유능한 대장균 세포</td><td>뉴잉글랜드 바이오랩스</td><td>C2528J</td><td></td></tr><tr><td>염화망간(II) 사수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>M3634</td><td></td></tr><tr><td>미세 원심분리기 튜브, 0.5 mL</td><td>VWR</td><td>87003-290</td><td></td></tr><tr><td>미세 원심분리기 튜브, 1.7 mL</td><td>MedSupply 파트너</td><td>15-1151</td><td></td></tr><tr><td>미세 원심분리기 튜브, 2 mL</td><td>액시젠</td><td>MCT-200-C</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN tetra 수직 전기영동 셀</td><td>바이오 래드</td><td>10025025</td><td></td></tr><tr><td>미니 프로테안 트리스-글리신 겔, 4-20%</td><td>바이오 래드</td><td>4568094</td><td></td></tr><tr><td>MyFuge 미니 원심분리기</td><td>MedSupply 파트너</td><td>C1008-B</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene 1 L 초고속 원심분리기 병</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>3141-1006</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene 오크 릿지 원심분리기 튜브</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>31139-0050</td><td></td></tr><tr><td>나노 광도계</td><td>임플렌</td><td>3769</td><td></td></tr><tr><td>흔들리지 않는 인큐베이터</td><td>랩넷</td><td>나 5110&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>C41(DE3) 화학적으로 유능한 세포를 과발현</td><td>바이오서치 기술</td><td>60442-1</td><td></td></tr><tr><td>C41(DE3) 화학적으로 유능한 세포를 과발현</td><td>시그마-알드리치</td><td>CMC0017</td><td>중단; Biosearch C41(DE3) 세포 또는 NEB Lemo21 세포가 대안입니다</td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>MedSupply 파트너</td><td>62-1077-3</td><td></td></tr><tr><td>플라스미드(pET-14b 백본)</td><td>젠스크립트</td><td>맞춤 주문</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 마이크로 큐벳</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>14955127</td><td></td></tr><tr><td>PowerPac범용 전원 공급 장치</td><td>바이오 래드</td><td>1645070</td><td></td></tr><tr><td>정밀 글라이드 바늘</td><td>벡톤 딕슨</td><td>305198</td><td></td></tr><tr><td>Precision plus 단백질 비염색 표준물질</td><td>바이오 래드</td><td>1610363</td><td></td></tr><tr><td>발현용 회수 배지&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>CMR0001K</td><td></td></tr><tr><td>S-4x1000 스윙 버킷 로터</td><td>에펜도르프</td><td>EP-S4X1 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫, 10mL</td><td>파클론</td><td>357551</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫, 25 mL</td><td>파클론</td><td>35725</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫, 5 mL</td><td>파클론</td><td>35743</td><td></td></tr><tr><td>혈청학적 피펫, 50mL</td><td>Pr1ma</td><td>PR-세로-50</td><td></td></tr><tr><td>소금</td><td>시그마-알드리치</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>도데실 황산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>L3771</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>567530</td><td></td></tr><tr><td>소닉 디스멤브레이터</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>FB505</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Lynx 4000 원심분리기</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>75006580</td><td></td></tr><tr><td>Spephadex G-25 M PD-10 컬럼</td><td>사이티바</td><td>17085101</td><td></td></tr><tr><td>&szlig;-메르캅토에탄올</td><td>밀리포어</td><td>444203</td><td></td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 그리핀 비커</td><td>폴라 웨어</td><td>13977-010-개</td><td></td></tr><tr><td>멸균 Falcon 튜브, 15mL</td><td>송골매</td><td>352097</td><td></td></tr><tr><td>멸균 Falcon 튜브, 50mL</td><td>송골매</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Superdex 200 10/300 GL 컬럼</td><td>사이티바</td><td>28990944</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 1mL</td><td>에어타이트&nbsp;</td><td>답1</td><td></td></tr><tr><td>주사기, 3mL</td><td>벡톤 딕슨</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>TALON 금속 친화성 수지</td><td>타카라</td><td>635503</td><td></td></tr><tr><td>이쑤시개</td><td>크리에이티브 스트리트</td><td>PAC3690-01</td><td></td></tr><tr><td>트리스 베이스</td><td>골드바이오</td><td>티-400-1</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>MP 바이오메디컬</td><td>807423</td><td></td></tr><tr><td>트립톤</td><td>연구 제품 국제</td><td>티60065</td><td></td></tr><tr><td>보르나도</td><td>벤치 마크</td><td>BV101-G</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>연구 제품 국제</td><td>Y20025</td><td></td></tr></tbody></table>

대장균에서 독성 뉴클레아제를 과발현 및 정제

Overexpressing and Purifying a Toxic Nuclease from Escherichia coli

뉴클레아제로서의 Nsp15의 독성으로 인해 스타터 배양이 0.8-1.0의 OD600 에 도달하는 데 일반적으로 총 ~7시간이 필요했습니다. 일단 접종되면 유도를 위해 0.8-1.0의 동일한 최적 OD600 에 대해 일반적으로 총 ~3-5시간이 필요했습니다. 이 경우 배가 시간은 ~1시간으로 나타났습니다. Nsp15의 촉매 사멸 돌연변이체가 발현되었을 때, 대장균 세포의 배가는 정상(~20분)으로 나타났으며, 이는 뉴클레아제 활성이 독성의 원인이 된다는 추가 증거입니다(그림 1A).
하룻밤 유도 후, 일반적으로 2L WT 성장당 6-9g의 습윤 중량 세포 펠릿을 수확했습니다. 다양한 Nsp15 돌연변이를 사용한 다양한 성장에서 우리는 더 작은 펠릿이 더 높은 뉴클레아제 활성과 상관관계가 있음을 관찰했습니다. 촉매 사멸 Nsp15의 경우, 2L 성장당 훨씬 더 큰 펠릿(~18...

Escherichia coli has been widely employed as an expression system to produce recombinant proteins. Yet some types of recombinant proteins, such as ...

overexpressing-and-purifying-a-toxic-nuclease-from-escherichia-coli

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

단백질 전달은 세포에 생물학적으로 활성화된 단백질의 직접 배달을 수 있습니다. 이러한 DNA의 transfection 또는 바이러스성 도입으로 종래의 방법과는 달리이 비침습 패러다임은 세포 독성 및 영구 유전자 조작에 의해 종양 발생 변화의 위험을 우회 titratable 방식으로 고효율 세포 조작이 가능합니다.

공학 세포 투과 단백질

체계적인 대규모 합성 유전자 (유전자 유전자 또는 epistasis) 상호 작용 화면은 유전 이중화 및 경로 간 대화를 탐험하는 데 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 높은 처리량 정량 합성 유전자 배열 검사 기술을 설명, eSGA 우리는 epistatic 관계를 elucidating과의 유전 적 상호 작용 네트워크를 탐험하기 위해 개발이...

에 박테리아 기능 네트워크 및 경로를 매핑<em&gt; 대장균</em&gt; 합성 유전자 배열을 사용하여

엑소뉴클레아제는 게놈 안정성을 보장하는 데 중요한 역할을 합니다. WRN 엑소뉴클레아제 기능의 손실은 조기 노화를 초래합니다. in vitro에서 뉴클레아제의 기질 및 기타 요구 사항을 연구하면 in vivo에서 뉴클레아제의 역할을 밝히는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에서는 뉴클레아제 활성을 측정하기 위한 빠르고 재현 가능한 형광 기반 분석을 시연합니다.

DmWRNexo를 특성화하기 위한 형광 기반 엑소뉴클레아제 분석, human progeroid WRN 엑소뉴클레아제의 orthologue 및 다른 뉴클레아제에 대한 응용

이 5 일간의 프로토콜은 모든 단계, 장비 및 기반의 효율적인 내생 대장균 처음부터 TX-TL의 무 세포 발현 시스템을 구축 및 실행에 필요한 추가 소프트웨어를 설명합니다. 시약, 프로토콜은 8 셋업 시간 이하의 반응, 수집, 및 프로세스 데이터를 걸린다.

구현을위한 프로토콜 대장균을 바탕으로 TX-TL의 무 세포 발현 시스템

단백질 동시 발현은 단백질 복합체의 in vitro 재구성에 대한 강력한 대안이며 in vivo에서 생화학 및 유전자 검사를 수행하는 데 도움이 됩니다. 여기에서 우리는 단백질 복합체를 얻고 세포의 돌연변이 빈도를 조정하기 위해 대장균에서 단백질 공동 발현을 사용하는 것에 대해 보고합니다.

단백질 공동 식의 다각적 인 장점에<em&gt; 대장균</em

재조합 헬리코박터의 원스텝 제외 정제 고 수율 방법에 대하여 설명한다 배치 모드에서 디 에틸 아미노 에틸 수지를 이용하여 대장균에서 과발현 호중구 - 활성화 단백질 (HP-NAP) 파이로리. 이 방법에 의해 정제 HP-NAP는 H. 백신, 약물, 또는 진단의 발전을 위해 도움이됩니다 파이로리는 질병을 -associated.

한 단계의 부정적인 크로마토 그래피 정제<em&gt; 헬리코박터 파이로리</em&gt; 호중구 - 활성화 단백질 과발현<em&gt; 대장균</em&gt; 배치 모드에서

에스 케리 치아 (Escherichia )로부터의 비 변성 조건 하에서 코돈 최적화 된 인간 시스 - 프레 닐 전이 효소의 과발현 및 정제를위한 간단한 프로토콜   콜라이 (coli )는 효소 활성 분석과 함께 기술된다. 이 프로토콜은 기계적 연구에 적합한 양 및 품질의 다른 시스 플 닐 트랜스퍼 라제 단백질의 생산을 위해 일반화 될 수 있습니다.

인간의 과발현과 정제 시스 - 프레 닐 트랜스퍼 라제 대장균

여기 선물이 다른 대장균 변종에 삭제 돌연변이 만들기 위한 기반으로 기존의 항생제 저항-카세트 삭제 구문을 사용 하는 프로토콜. 이러한 삭제 돌연변이 동원 고 P1 살 균 소 변환을 사용 하 여 받는 사람 긴장의 해당 장소에 삽입 될 수 있습니다.

Excisable 항 생 저항 카세트와 P1 변환 하 여 대장균 에서 생산 유전자 삭제

프로토카테츄아제 3,4-디옥시게나아제(PCD)는 기질 인 프로토카츄산(PCA)을 사용하여 수성 시스템에서 자유 분무기 산소를 효소적으로 제거할 수 있습니다. 이 프로토콜은 이러한 산소 제거 효소의 발현, 정제 및 활성 분석을 설명합니다.

뉴클레아제 없는 산소 제거제 프로토카테의 발현 및 정제 3,4-디옥시게나아제

새로운 서열 특이성을 가진 제한 endonucleases는 부분적으로 퇴화한 서열을 인식하는 효소로부터 개발될 수 있다. 여기에서 우리는 우리가 성공적으로 NlaIV 효소의 순서 특이성을 바꾸기 위하여 이용된 상세한 프로토콜을 제공합니다. 프로토콜의 주요 성분은 전사/번역 반응의 생체외 구획화 및 새로운 서열 특이성을 가진 변이체의 선택이다.

더 엄격한 특이성을 가진 제한 endonuclease의 시험관 진화

박테리아는 생리 활성 생물학적 분자를 운반하는 나노 미터 크기의 세포 외 소포 (EV)를 분비합니다. EV 연구는 생물 발생, 미생물-미생물 및 숙주-미생물 상호 작용 및 질병에서의 역할, 잠재적 인 치료 응용 프로그램을 이해하는 데 중점을 둡니다. EV 연구의 표준화를 촉진하기 위해 다양한 박테리아로부터 EV를 확장 가능한 분리를 위한 워크플로우가 제시됩니다.

대장균 및 다른 박테리아로부터의 세포외 소포의 확장 가능한 분리 및 정제

학습하세요 대장균에서 독성 뉴클레아제 Nsp15를 과발현하고 친화성 및 크기 배제 크로마토그래피로 정제하는 방법을. 이 기법은 다른 바이러스성 뉴클레아제 연구와 치료 표적 개발에 활용됩니다.

대장균에서 독성 뉴클레아제를 과발현 및 정제

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