Name: 소 난소에서 과립-테카 세포 상호작용을 이해하기 위한 수정된 공동 배양 시스템 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: 배우세요 소 난소 과립세포와 테카세포의 수정된 공동 배양 시스템을 통해 난포 내 파라크린 신호전달과 기질 수송을 분석하는 방법을. 이 모델은 생리학적 환경을 재현하여 생식 생물학 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li>
<li>Forde, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oestrous+cycles+in+Bos+taurus+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Oestrous cycles in Bos taurus cattle.</a> Anim Reprod Sci. 124 (3-4), 163-169 (2011).</li>
<li>Hennet, M. L., Combelles, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antral+follicle%3A+A+microenvironment+for+oocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The antral follicle: A microenvironment for oocyte differentiation.</a> Int J Dev Biol. 56 (10-12), 819-831 (2012).</li>
<li>Christenson, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Preovulatory+LH+surge+effects+on+follicular+theca+and+granulosa+transcriptomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Preovulatory LH surge effects on follicular theca and granulosa transcriptomes.</a> Mol Endocrinol. 27 (7), 1153-1171 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+cell+plating+density+mimics+an+early+post-LH+stage+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells.</a> Cell Tissue Res. 354, 869-880 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tissue+culture+model+of+estrogen-producing+primary+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Tissue culture model of estrogen-producing primary bovine granulosa cells.</a> J Vis Exp. (139), e58208(2018).</li>
<li>Gutierrez, C. G., Campbell, B. K., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+long-term+bovine+granulosa+cell+culture+system%3A+Induction+and+maintenance+of+estradiol+production%2C+response+to+follicle-+stimulating+hormone%2C+and+morphological+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: Induction and maintenance of estradiol production, response to follicle- stimulating hormone, and morphological characteristics.</a> Biol Reprod. 56 (3), 608-616 (1997).</li>
<li>Hamel, M., Vanselow, J., Nicola, E. S., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androstenedione+increases+cytochrome+P450+aromatase+messenger+ribonucleic+acid+transcripts+in+non-luteinizing+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Androstenedione increases cytochrome P450 aromatase messenger ribonucleic acid transcripts in non-luteinizing bovine granulosa cells.</a> Mol Reprod Dev. 70, 175-183 (2005).</li>
<li>Chandrasekher, Y. A., Fortune, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxytocin+on+steroidogenesis+by+bovine+theca+and+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxytocin on steroidogenesis by bovine theca and granulosa cells.</a> Endocrinology. 127 (2), 926-933 (1990).</li>
<li>Silva, J. M., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+follicle-stimulating+hormone+on+steroid+secretion+and+messenger+ribonucleic+acids+encoding+cytochromes+P450+aromatase+and+cholesterol+side-chain+cleavage+in+bovine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of follicle-stimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol side-chain cleavage in bovine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 62 (1), 186-191 (2000).</li>
<li>Gong, J. G., McBride, D., Bramley, T. A., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+recombinant+bovine+somatotrophin%2C+insulin-like+growth+factor-I+and+insulin+on+bovine+granulosa+cell+steroidogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of recombinant bovine somatotrophin, insulin-like growth factor-I and insulin on bovine granulosa cell steroidogenesis in vitro.</a> J Endocrinol. 143 (1), 157-164 (1994).</li>
<li>Baufeld, A., Koczan, D., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-lactate+induces+specific+genome-wide+alterations+of+gene+expression+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">L-lactate induces specific genome-wide alterations of gene expression in cultured bovine granulosa cells.</a> BMC Genomics. 20 (1), 273(2019).</li>
<li>Baddela, V. S., Sharma, A., Plinski, C., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitic+acid+protects+granulosa+cells+from+oleic+acid+induced+steatosis+and+rescues+progesterone+production+via+cAMP+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Biol+Lipids%22%5BJournal%5D)">Palmitic acid protects granulosa cells from oleic acid induced steatosis and rescues progesterone production via cAMP dependent mechanism.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1867 (8), 159159(2022).</li>
<li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+free+fatty+acids+affect+bovine+granulosa+cell+function%3A+a+molecular+cue+for+compromised+reproduction+during+negative+energy+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Elevated free fatty acids affect bovine granulosa cell function: a molecular cue for compromised reproduction during negative energy balance.</a> Endocr Connect. 8 (5), 493-505 (2019).</li>
<li>Hillier, S. G., Whitelaw, P. F., Smyth, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+oestrogen+synthesis+-+The+two-cell%2C+two-+gonadotrophin+model+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Follicular oestrogen synthesis - The two-cell, two- gonadotrophin model revisited.</a> Mol Cell Endocrinol. 100, 51-54 (1994).</li>
<li>Campen, K. A., Lavallee, M., Combelles, C. M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+bisphenol+S+on+bovine+granulosa+and+theca+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Domest+Anim%22%5BJournal%5D)">The impact of bisphenol S on bovine granulosa and theca cells.</a> Reprod Domest Anim. 53 (2), 450-457 (2018).</li>
<li>Glister, C., Richards, S. L., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+%28BMP%29+-4%2C+-6%2C+and+-7+potently+suppress+basal+and+luteinizing+hormone-induced+androgen+production+by+bovine+theca+interna+cells+in+primary+culture%3A+could+ovarian+hyperandrogenic+dysfunction+be+caused+by+a+defect+in+thecal+BMP+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins (BMP) -4, -6, and -7 potently suppress basal and luteinizing hormone-induced androgen production by bovine theca interna cells in primary culture: could ovarian hyperandrogenic dysfunction be caused by a defect in thecal BMP signaling.</a> Endocrinology. 146 (4), 1883-1892 (2005).</li>
<li>Wrathall, J. H., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inhibin-related+peptides+and+oestradiol+on+androstenedione+and+progesterone+secretion+by+bovine+theca+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of inhibin-related peptides and oestradiol on androstenedione and progesterone secretion by bovine theca cells in vitro.</a> J Endocrinol. 145 (3), 491-500 (1995).</li>
<li>Shores, E. M., Picton, H. M., Hunter, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+pig+theca+cell+steroidogenesis+by+LH%2C+insulin-like+growth+factor+I+and+granulosa+cells+in+serum-free+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of pig theca cell steroidogenesis by LH, insulin-like growth factor I and granulosa cells in serum-free culture.</a> J Reprod Fertil. 118 (2), 211-219 (2000).</li>
<li>Gregoraszczuk, E. L., Ptak, A., Karniewska, M., Ropstad, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+defined+mixtures+of+PCBs%2C+p%2Cp%27-DDT+and+its+metabolite+p%2Cp%27-DDE%2C+on+co-culture+of+porcine+theca+and+granulosa+cells%3A+steroid+secretion%2C+cell+proliferation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Action of defined mixtures of PCBs, p,p'-DDT and its metabolite p,p'-DDE, on co-culture of porcine theca and granulosa cells: steroid secretion, cell proliferation and apoptosis.</a> Reprod Toxicol. 26 (2), 170-174 (2008).</li>
<li>Rak, A., Drwal, E., Wróbel, A., Gregoraszczuk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistin+is+a+survival+factor+for+porcine+ovarian+follicular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Resistin is a survival factor for porcine ovarian follicular cells.</a> Reproduction. 150 (4), 343-355 (2015).</li>
<li>Kotsuji, F., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">The role of granulosa and theca cell interactions in ovarian structure and function.</a> Microsc Res Tech. 27 (2), 97-107 (1994).</li>
<li>Orisaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+granulosa+cell+differentiation+during+gonadotropin-independent+follicular+growth+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on granulosa cell differentiation during gonadotropin-independent follicular growth in cattle.</a> Mol Reprod Dev. 73 (6), 737-744 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Role of granulosa and theca cell interactions in ovarian follicular maturation.</a> Microsc Res Tech. 69 (6), 450-458 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+apoptosis+and+proliferation+of+granulosa+cells%3A+changes+during+bovine+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on apoptosis and proliferation of granulosa cells: changes during bovine follicular maturation.</a> Biol Reprod. 66 (6), 1635-1639 (2002).</li>
<li>Allegrucci, C., Hunter, M. G., Webb, R., Luck, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bovine+granulosa+and+theca+cells+in+a+novel+serum-free+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Interaction of bovine granulosa and theca cells in a novel serum-free co-culture system.</a> Reproduction. 126 (4), 527-538 (2003).</li>
<li>Santaguida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+by+side+comparison+between+dynamic+versus+static+models+of+blood-brain+barrier+in+vitro%3A+A+permeability+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Side by side comparison between dynamic versus static models of blood-brain barrier in vitro: A permeability study.</a> Brain Res. 1109 (1), 1-13 (2006).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Isolated+Brain+Microvessel%3A+A+Versatile+Experimental+Model+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Isolated Brain Microvessel: A Versatile Experimental Model of the Blood-Brain Barrier.</a> Front Physiol. 11, 398(2020).</li>
<li>Schneider, F., Brüssow, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+preovulatory+administered+depot+gonadotrophin-releasing+hormone+agonist+on+reproductive+hormone+levels+and+pregnancy+outcome+in+gilts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Fertil+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of a preovulatory administered depot gonadotrophin-releasing hormone agonist on reproductive hormone levels and pregnancy outcome in gilts.</a> Reprod Fertil Dev. 18 (8), 857-866 (2006).</li>
<li>Nimz, M., Spitschak, M., Schneider, F., Fürbass, R., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+genes+encoding+steroidogenic+enzymes+and+hormone+receptors+in+late+preovulatory+follicles+of+the+cow+coincides+with+an+accumulation+of+intrafollicular+steroids%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of genes encoding steroidogenic enzymes and hormone receptors in late preovulatory follicles of the cow coincides with an accumulation of intrafollicular steroids.</a> Domest Anim Endocrinol. 37, 45-54 (2009).</li>
<li>Amsterdam, A., May, J. V., Schomberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+insulin+and+follicle-stimulating+hormone+on+biochemical+and+morphological+differentiation+of+porcine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of insulin and follicle-stimulating hormone on biochemical and morphological differentiation of porcine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 39 (2), 379-390 (1988).</li>
<li>Monga, R., Sharma, I., Datta, T. K., Singh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+serum-free+buffalo+granulosa+cell+culture+and+analysis+of+genes+involved+in+terminal+differentiation+from+FSH-+to+LH-responsive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Characterization of serum-free buffalo granulosa cell culture and analysis of genes involved in terminal differentiation from FSH- to LH-responsive phenotype.</a> Domest Anim Endocrinol. 41 (4), 195-206 (2011).</li>
<li>Bao, B., Garverick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+steroidogenic+enzyme+and+gonadotropin+receptor+genes+in+bovine+follicles+during+ovarian+follicular+waves%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of steroidogenic enzyme and gonadotropin receptor genes in bovine follicles during ovarian follicular waves: A review.</a> J Anim Sci. 76 (7), 1903-1921 (1998).</li>
<li>Bao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+messenger+ribonucleic+acid+encoding+luteinizing+hormone+receptor%2C+cytochrome+P450+side+chain+cleavage%2C+and+aromatase+are+associated+with+recruitment+and+selection+of+bovine+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in messenger ribonucleic acid encoding luteinizing hormone receptor, cytochrome P450 side chain cleavage, and aromatase are associated with recruitment and selection of bovine ovarian follicles.</a> Biol Reprod. 56 (5), 1158-1168 (1997).</li>
<li>Orisaka, M., Tajima, K., Tsang, B. K., Kotsuji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa-theca+cell+interactions+during+preantral+follicular+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ovarian.+Res%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa-theca cell interactions during preantral follicular development.</a> J. Ovarian. Res. 2 (1), 9(2009).</li>
<li>Gilbert, I., Robert, C., Dieleman, S., Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+effect+of+the+LH+surge+in+bovine+granulosa+cells+during+the+peri-ovulation+period%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Transcriptional effect of the LH surge in bovine granulosa cells during the peri-ovulation period.</a> Reproduction. 141 (2), 193-205 (2011).</li>
<li>Kotsuji, F., Kamitani, N., Goto, K., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+theca+and+granulosa+cell+interactions+modulate+their+growth%2C+morphology%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Bovine theca and granulosa cell interactions modulate their growth, morphology, and function.</a> Biol Reprod. 43 (5), 726-732 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x 행크의 균형 소금 용액 HBSS(w Mg/Ca, 페놀 레드)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. L201-10</td><td>초순수에 용해; pH를 분해 용액(HBSS 및 HEPES)의 7.4로 조정하고 사용하기 전에 멸균 여과를 수행합니다.</td></tr><tr><td>18G 바늘, 40mm, 직경 1.2 mm</td><td>로스</td><td>281T.1</td><td>일회용 바늘, 단축키</td></tr><tr><td>3ml 주사기(Omnifix Luer)</td><td>로스</td><td>LY22.1</td><td></td></tr><tr><td>아큐타제</td><td>머 크</td><td>A6964</td><td>회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>암포테리신 B(250 및 마이크로 g/ml)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. AB17.01050</td><td></td></tr><tr><td>안드로스텐디온</td><td>머 크</td><td>46033</td><td>우리는 10% 에탄올에 희석된 100mM의 원액을 사용합니다. 회사 지점: Supelco</td></tr><tr><td>쌍안경 Carl Zeiss Technival2</td><td>칼 자이스 예나</td><td>해당 없음</td><td>입사등 Schott KL 1600 LED와 함께 사용</td></tr><tr><td>BSA (5%)</td><td>머 크</td><td>A3311</td><td>회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>셀 스트레이너(100 & micro; m 기공 크기)</td><td>사르슈테트</td><td>83.3945.100</td><td>50 ml 원심분리 튜브에 장착</td></tr><tr><td>콜라겐 R (0.2 %)</td><td>세르바</td><td>47254</td><td></td></tr><tr><td>콜라게나제 NB8 (10%)</td><td>노드마크</td><td>S1745601</td><td></td></tr><tr><td>CoolCell LX 세포 냉동 용기&nbsp;</td><td>머 크</td><td>CLS432002</td><td>코닝 제품</td></tr><tr><td>냉동 보존 바이알(2 ml)</td><td>TPP 파우스트</td><td>TPP89020</td><td></td></tr><tr><td>배양 접시, 12웰, 평평한 바닥</td><td>TPP 파우스트</td><td>TPP92112</td><td></td></tr><tr><td>배양 접시, 24웰, 평평한 바닥</td><td>TPP 파우스트</td><td>TPP92424</td><td></td></tr><tr><td>배양 접시, 6웰, 평평한 바닥</td><td>TPP 파우스트</td><td>TPP92006</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>로스</td><td>4720.1</td><td></td></tr><tr><td>DPBS w/o Ca2+, Mg2+</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. L182-10</td><td>사용하기 전에 초순수와 오토클레이브에 녹이십시오.</td></tr><tr><td>에스트라디올, 17b-[2,4,6,7-3H]</td><td>하트만 애널리틱</td><td>ART1555</td><td></td></tr><tr><td>송아지 태아 혈청(FBS Superior stabil)</td><td>바이오& 팔다</td><td>FBS. S0615</td><td></td></tr><tr><td>FSH(~7,000 IU/mg; 인간 뇌하수체에서 추출)</td><td>머 크</td><td>F4021</td><td>우리는 2 & micro의 원액을 사용하는 것을 선호합니다. g/ml, 0.9% NaCl로 희석; 회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>교수형 세포 배양 인서트(0.4 & micro; m 기공 크기)</td><td>셀QART</td><td>9320412</td><td>주문하는 동안 인서트의 다양한 속성에 유의하십시오. 위상차 현미경을 위해 투명한 PET 멤브레인을 선호합니다.</td></tr><tr><td>헤페스 (1M)</td><td>로스</td><td>9105.2</td><td>pH를 분해 용액(HBSS 및 HEPES)의 7.4로 조정하고 사용하기 전에 멸균 여과를 수행합니다.</td></tr><tr><td>홀로트랜스페린(소)</td><td>머 크</td><td>T1283</td><td>멸균수에 용해; 회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>innuPREP RNA 미니 키트 2.0</td><td>IST 이누스크린</td><td>845-KS-2040250</td><td></td></tr><tr><td>인슐린(10mg/ml, 소 췌장에서 추출)</td><td>머 크</td><td>I0516</td><td>1x PBS에 용해; 회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>L-글루타민(200mM)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. K0283</td><td></td></tr><tr><td>LR3-IGF-1</td><td>머 크</td><td>나1146</td><td>우리는 200 & micro의 원액을 사용합니다. g/ml, 10 mM HCl 및 1 mg/ml BSA와 함께 1x PBS에 용해; 회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 분광 광도계</td><td>열과학</td><td>해당 없음</td><td>RNA 농도 측정</td></tr><tr><td>NEA(100배)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. K0293</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신 (10,000 IU/10 mg/ml)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. A2213</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양에 적합한 정제수</td><td>머 크</td><td>W3500</td><td>회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>SensiFAST cDNA 합성 키트</td><td>바이오라인</td><td>바이오-65054</td><td>유통 파트너인 BioCat을 통해 공급</td></tr><tr><td>중탄산나트륨(7.5%)</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. 엘1713</td><td></td></tr><tr><td>아셀렌산나트륨</td><td>머 크</td><td>S9133</td><td>멸균수에 용해; 회사 지점: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>써모 셰이커 TS-100C</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>12357627</td><td>HC18 블록과 함께 사용(카탈로그 번호 12337627)</td></tr><tr><td>&알파;-MEM</td><td>바이오& 팔다</td><td>모텔. F0915</td><td></td></tr></tbody></table>

소 난소에서 과립-테카 세포 상호작용을 이해하기 위한 수정된 공동 배양 시스템

A Modified Co-Culture System for Understanding Granulosa-Theca Cell Interactions in the Bovine Ovary

TC와 GC는 난포 구획화에 기반한 잘 확립된 기계적 분리 기술을 사용하여 분리되었지만, 교차 오염의 위험을 제거하기 위해 세포 유형 특이적 유전자 CYP17A1 및 CYP19A1 의 발현을 평가했습니다. CYP17A1 는 새로 분리된 TC에서만 발현된 반면, CYP19A1 는 새로 분리된 GC에서 주로 발현되었습니다(그림 2).
공동 배양 시스템은 멤브레인 삽입물의 반대쪽에 있는 소 테카 세포와 과립막 세포의 구획화를 가능하게 하여 생체 내 공간 조직을 모방합니다. 배양 3일 후, TC는 콜라겐 코팅 삽입 멤브레인의 표면을 가로질러 퍼지면서 납작하고 길쭉한 형태를 나타내며 성공적인 부착을 나타냅니다(그림 3A). 전체 9일 기간 동안 단독으로 배양했을 때 TC는 계속 증식하여 9일까지 합류에 도달했습니다(그림 3B). 대조적으로, 콜라겐 코팅된 삽입 막에서 6일 동안 단독으로 배양된 GC는 시험관 내 GC의 특징인 섬유아세포 유사 표현형을 개발했습니다(그림 3C). 또한, 앞서 설명한 바와 같이, GC는 배양 5,7,31,32에서 이러한 세포의 전형적인 특징인 클러스터를 형성하는 경향이 있었다. 공동 배양 시스템에서, 각각의 시간 일치 단일 배양과 비교할 때 TC 또는 GC에서 명백한 형태학적 차이가 관찰되지 않았으며(그림 3D), 이는 삽입 기반 환경이 정상적인 세포 거동을 유지한다는 것을 나타냅니다. 그러나 기술적 한계로 인해 공동 배양의 현미경적 평가는 특히 다른 세포와 독립적으로 TC 형태를 구별하고 평가하는 데 여전히 어려운 과제로 남아 있습니다. 이러한 한계를 극복하기 위해 면역염색을 위한 세포 특이적 항체가 없는 경우 세포 식별을 위한 대체 전략을 탐색함에 따라 세포 고정을 위한 최적화된 프로토콜이 현재 다루어지고 있습니다.
공동 배양 시스템의 기능은 호르몬 생산과 TC 및 GC에 대한 주요 마커 유전자의 발현을 분석하여평가되었으며33,34, 세포 유형 특이적 스테로이드 생성 역할을 확인했습니다. GC 단일 배양과 공동 배양 모델을 비교한 결과 시험관 내에서 유사한 에스트라디올(E2) 수준이 생성되는 것으로 나타났습니다. 그러나 예상대로 TC 단일 배양은 테카 세포가 독립적으로 E2를 합성하는 능력이 부족하다는 2-세포-2-성선 자극 호르몬 가설(그림 4A)15과 일치하여 무시할 수 있는 양의 E2만 생성했습니다.
배양 조건의 생리학적 관련성을 추가로 평가하기 위해 핵심 마커 유전자(33)의 발현을 조사했습니다. 2-세포-2-성선 자극 호르몬 가설에 따르면, CYP19A1는 주로 GC에서 발현된 반면, CYP17A1는 주로 TC에서 검출되었으며, 이는 단일 배양 및 공동 배양 조건 모두에서 관찰되는 패턴입니다(그림 4B,C). 특히, 에스트라디올 농도의 차이가 관찰되지 않았음에도 불구하고 CYP19A1의 전사체 풍부도는 GC 단일 배양에 비해 공동 배양 시스템 내의 GC에서 더 높았습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig1.jpg"> 
그림 1: 세포 배양 설정의 개략도. (A) 초기 배양 기간 동안 배지 누출을 방지하기 위해 거꾸로 된 인서트에 잘린 튜브를 사용하는 맞춤형 접종 챔버를 보여주는 다이어그램. (B) 실험 절차의 타임라인: 부착을 허용하기 위해 TC를 거꾸로 된 삽입물에서 3일 동안 배양했습니다. 삽입물을 뒤집고 GC를 반대쪽에 시드한 후 추가로 6일 동안 배양했습니다. 이 연구는 TC와 GC를 TC-GC 공동 배양 시스템과 별도로 배양했습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig2.jpg"> 
그림 2: 새로 분리된 과립막 및 테카 세포에서 세포 유형 특이적 마커의 유전자 발현. (A) CYP17A1 는 TC에서만 독점적으로 발현된 반면, (B) CYP19A1 는 주로 GC에서 검출되어 배양 전에 분리된 세포 집단의 특이성과 초기 순도를 확인했습니다. 데이터는 참조 유전자 RPLP0 및 TBP의 기하 평균으로 정규화된 상대 발현으로 표시됩니다. 평균의 평균과 표준 오차가 표시되고, 데이터는 정규성과 분산에 대해 테스트되었으며, 별표는 유의미한 차이를 나타냅니다(n=3, t-검정). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig3.jpg"> 
그림 3: 배양 중인 테카 및 과립막 세포의 형태. (A) 3일 동안 배양된 TC를 콜라겐 코팅된 삽입 멤브레인에 부착했습니다. (B) TC는 단일 배양에서 전체 9일 기간 후에 합류할 정도로 성장했습니다. (C) GC는 배양 6일 후 전형적인 섬유아세포 유사 표현형을 나타냅니다. (D) TC와 GC의 공동 배양은 각각의 시간 일치 단일 배양에 비해 명백한 형태학적 차이를 나타내지 않습니다. 이 이미지는 GC 배양 6일과 TC 배양 9일 후(공동 배양 실험의 종점에서) 촬영되었습니다. 스케일 바 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig4.jpg"> 
그림 4: 공동 배양 시스템의 기능적 마커 분석. (A) 에스트라디올(E2)의 호르몬 농도는 세포 배양 시스템의 생리학적 기능을 확인합니다. (나, 씨) TC 마커 CYP17A1 와 GC 마커 CYP19A1 의 유전자 발현 분석은 두 세포 집단의 동일성과 기능 상태를 보여줍니다. 참조 유전자 RPLP0 및 TBP 의 기하 평균을 사용하여 상대 발현을 계산했습니다. 평균과 평균의 표준 오차가 표시되고, 데이터는 정규성과 분산에 대해 테스트되었으며, 별표는 유의미한 차이를 나타냅니다(n=3, 일원 분산 분석). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

A reliable co-culture of granulosa (GCs) and theca cells (TCs) has the potential to facilitate a more comprehensive understanding of the interactions, ...

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Research

연구

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