Name: 곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis Hood) 사육 시스템 구축 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-18T15:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: 배우세요 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis) 대량 사육을 위한 분리엽 생물검정법을 활용한 방법입니다. 높은 생존률과 동기화된 발달을 통해 곤충병원성 진균의 독성을 효과적으로 선별할 수 있습니다.

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<ol><li>Kumar, V., Kakkar, G., McKenzie, C. L., Seal, D. R., Osborne, L. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKumar%2C+V+%22Weed+and+pest+control-conventional+and+new+challenges%22">Weed and pest control-conventional and new challenges</a>. , 53-77 (2013).</li>
<li>Hoddle, M. Scirtothrips dorsalis (chilli thrips). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoddle%2C+M+%22CABI+Compendium%22">CABI Compendium</a>. , Wallingford, CT, USA. (2022).</li>
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<li>Gopal, K., Krishna Reddy, M., Reddy, M., Muniyappa, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+peanut+yellow+spot+virus+%28PYSV%29+by+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis+Hood+in+groundnut%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Phytopathol+Plant+Prot%22%5BJournal%5D)">Transmission of peanut yellow spot virus (PYSV) by thrips, Scirtothrips dorsalis Hood in groundnut.</a> Arch Phytopathol Plant Prot. 43 (5), 421-429 (2010).</li>
<li>Prasada Rao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+range+of+tobacco+streak+virus+in+India+and+transmission+by+thrips%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Appl+Biol%22%5BJournal%5D)">The host range of tobacco streak virus in India and transmission by thrips.</a> Ann Appl Biol. 142 (3), 365-368 (2003).</li>
<li>Chang, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+selection+of+an+entomopathogenic+fungal+library+from+soil+samples+for+controlling+Spodoptera+litura%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Sustain+Food+Syst%22%5BJournal%5D)">Construction and selection of an entomopathogenic fungal library from soil samples for controlling Spodoptera litura.</a> Front Sustain Food Syst. 5, 596316(2021).</li>
<li>Yang, C. J., Nai, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+aphidicidal+effect+of+entomopathogenic+fungi+against+mustard+aphid%2C+Lipaphis+erysimi+%28Kalt.%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Assessment of aphidicidal effect of entomopathogenic fungi against mustard aphid, Lipaphis erysimi (Kalt.).</a> J Vis Exp. (197), e65312(2023).</li>
<li>Liu, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+selection+of+entomopathogenic+fungi+from+soil+samples+and+evaluation+of+fungal+virulence+against+insect+pests%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and selection of entomopathogenic fungi from soil samples and evaluation of fungal virulence against insect pests.</a> J Vis Exp. (175), e62882(2021).</li>
<li>Aristizábal, L., Chen, Y., Cherry, R., Cave, R., Arthurs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+biorational+insecticides+against+chilli+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29%2C+infesting+roses+under+nursery+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Entomol%22%5BJournal%5D)">Efficacy of biorational insecticides against chilli thrips, Scirtothrips dorsalis (Thysanoptera: Thripidae), infesting roses under nursery conditions.</a> J Appl Entomol. 141 (4), 274-284 (2017).</li>
<li>Francis, J. R., Manchegowda, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+phylogenetic+identification+of+Metarhizium+and+Beauveria+and+their+bio-efficacy+against+chilli+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Trop+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Molecular phylogenetic identification of Metarhizium and Beauveria and their bio-efficacy against chilli thrips, Scirtothrips dorsalis.</a> Int J Trop Insect Sci. 43 (3), 909-918 (2023).</li>
<li>Arthurs, S. P., Aristizábal, L. F., Avery, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+entomopathogenic+fungi+against+chilli+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of entomopathogenic fungi against chilli thrips, Scirtothrips dorsalis.</a> J Insect Sci. 13 (1), 31(2013).</li>
<li>Subramaniam, M. S. R., Babu, A., Deka, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lecanicillium+lecanii+%28Zimmermann%29+Zare+%26+Gams+as+an+efficient+biocontrol+agent+of+tea+thrips%2C+Scirtothrips+bispinosus+Bagnall+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Egypt+J+Biol+Pest+Control%22%5BJournal%5D)">Lecanicillium lecanii (Zimmermann) Zare & Gams as an efficient biocontrol agent of tea thrips, Scirtothrips bispinosus Bagnall (Thysanoptera: Thripidae).</a> Egypt J Biol Pest Control. 31, 1-14 (2021).</li>
<li>Panyasiri, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+efficacy+of+Purpureocillium+lilacinum+against+chilli+thrips+%28Scirtothrips+dorsalis%29+on+chili+plant%5BTitle%5D)+AND+%22Insects%22%5BJournal%5D)">Control efficacy of Purpureocillium lilacinum against chilli thrips (Scirtothrips dorsalis) on chili plant.</a> Insects. 13 (8), 684(2022).</li>
<li>Perera, M., Senanayake, N., Dissanayake, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Amblyseius+swirskii+%28predatory+mite%29+and+Orius+laevigatus+as+biological+control+agents+of+chilli+thrips+%28Scirtothrips+dorsalis%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ceylon+J+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Amblyseius swirskii (predatory mite) and Orius laevigatus as biological control agents of chilli thrips (Scirtothrips dorsalis).</a> Ceylon J Sci. 50 (4), 541(2021).</li>
<li>Han, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+pupation+environment+on+pupal+development+and+eclosion+of+chilli+thrips+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Entomol%22%5BJournal%5D)">Effect of pupation environment on pupal development and eclosion of chilli thrips (Thysanoptera: Thripidae).</a> Environ Entomol. 54 (1), 223-230 (2025).</li>
<li>Tatara, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+and+host+plant+on+the+development%2C+fertility+and+longevity+of+Scirtothrips+dorsalis+Hood+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Entomol+Zool%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature and host plant on the development, fertility and longevity of Scirtothrips dorsalis Hood (Thysanoptera: Thripidae).</a> Appl Entomol Zool. 29 (1), 31-37 (1994).</li>
<li>Kumar, V., Seal, D. R., Osborne, L. S., McKenzie, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+scanning+electron+microscopy+with+DNA+barcoding%3A+a+novel+approach+for+thrips+identification%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Entomol+Zool%22%5BJournal%5D)">Coupling scanning electron microscopy with DNA barcoding: a novel approach for thrips identification.</a> Appl Entomol Zool. 49, 403-409 (2014).</li>
<li>Silva, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+abundance+of+cotton+thrips+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29+across+crop+and+non-crop+vegetation+in+an+Australian+cotton-producing+region%5BTitle%5D)+AND+%22Agric+Ecosyst+Environ%22%5BJournal%5D)">Seasonal abundance of cotton thrips (Thysanoptera: Thripidae) across crop and non-crop vegetation in an Australian cotton-producing region.</a> Agric Ecosyst Environ. 256, 226-238 (2018).</li>
<li>Venette, R., Davis, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVenette%2C+R+%22Chilli+thrips%2Fyellow+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis+Hood+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29+mini+pest+risk+assessment%22">Chilli thrips/yellow thrips, Scirtothrips dorsalis Hood (Thysanoptera: Thripidae) mini pest risk assessment</a>. , Univ Minnesota Tech Bull. (2004).</li>
<li>Mandi, N., Senapati, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+chemical%2C+botanical+and+microbial+insecticides+for+control+of+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis+Hood+infesting+chilli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Plant+Prot+Sci%22%5BJournal%5D)">Integration of chemical, botanical and microbial insecticides for control of thrips, Scirtothrips dorsalis Hood infesting chilli.</a> J Plant Prot Sci. 1 (1), 92-95 (2009).</li>
<li>Samota, R., Jat, B., Choudhary, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+newer+insecticides+and+biopesticides+against+thrips%2C+Scirtothrips+dorsalis+Hood+in+chilli%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacogn+Phytochem%22%5BJournal%5D)">Efficacy of newer insecticides and biopesticides against thrips, Scirtothrips dorsalis Hood in chilli.</a> J Pharmacogn Phytochem. 6 (4), 1458-1462 (2017).</li>
<li>Panthi, B. R., Renkema, J. M., Lahiri, S., Liburd, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+short-range+movement+of+Scirtothrips+dorsalis+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29+and+rate+of+spread+of+feeding+injury+among+strawberry+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Entomol%22%5BJournal%5D)">The short-range movement of Scirtothrips dorsalis (Thysanoptera: Thripidae) and rate of spread of feeding injury among strawberry plants.</a> Environ Entomol. 50 (1), 12-18 (2021).</li>
<li>Priyanka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+morphometrics+of+Thrips+parvispinus+%28Karny%29+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29+on+chilli%2C+Capsicum+annuum+L%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Hortic+Ecosyst%22%5BJournal%5D)">Biology and morphometrics of Thrips parvispinus (Karny) (Thysanoptera: Thripidae) on chilli, Capsicum annuum L.</a> Pest Manag Hortic Ecosyst. 30 (1), 85-92 (2024).</li>
<li>Hemalatha, S., Ramaraju, K., Jeyarani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+entomopathogenic+fungi+and+delivery+methods+for+management+of+thrips+in+chillies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Veg+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of entomopathogenic fungi and delivery methods for management of thrips in chillies.</a> Int J Veg Sci. 23 (3), 246-259 (2017).</li>
<li>Xu, X. M., Guerin, L., Robinson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+temperature+and+relative+humidity+on+conidial+germination+and+viability%2C+colonization+and+sporulation+of+Monilinia+fructigena%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effects of temperature and relative humidity on conidial germination and viability, colonization and sporulation of Monilinia fructigena.</a> Plant Pathol. 50 (5), 561-568 (2001).</li>
<li>Lee, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+response+of+bean+bug+%28Riptortus+pedestris%29+upon+infection+with+entomopathogenic+fungus%2C+Beauveria+bassiana+JEF-007%5BTitle%5D)+AND+%22Pest+Manag+Sci%22%5BJournal%5D)">Transcriptional response of bean bug (Riptortus pedestris) upon infection with entomopathogenic fungus, Beauveria bassiana JEF-007.</a> Pest Manag Sci. 75 (2), 333-345 (2019).</li>
<li>Yang, Y. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up-regulation+of+carbon+metabolism-related+glyoxylate+cycle+and+toxin+production+in+Beauveria+bassiana+JEF-007+during+infection+of+bean+bug%2C+Riptortus+pedestris+%28Hemiptera%3A+Alydidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Fungal+Biol%22%5BJournal%5D)">Up-regulation of carbon metabolism-related glyoxylate cycle and toxin production in Beauveria bassiana JEF-007 during infection of bean bug, Riptortus pedestris (Hemiptera: Alydidae).</a> Fungal Biol. 120 (10), 1236-1248 (2016).</li>
<li>Qayyum, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entomopathogenic+fungi%3A+prospects+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Entomopathogenic+Fungi%3A+Prospects+and+Challenges%22%5BJournal%5D)">Entomopathogenic fungi: prospects and challenges.</a> Entomopathogenic Fungi: Prospects and Challenges. , 57-79 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#00 곤충 핀</td><td>엔토스핑크스&nbsp;</td><td>DMM0220</td><td>영국산</td></tr><tr><td>1.5 mL 원심분리기 튜브</td><td>코닝 법인</td><td>MCT-175-C</td><td>미국에서 제조</td></tr><tr><td>10 & 뮤; L 접종 루프</td><td>NEST 사이언티픽</td><td>718201</td><td>미국에서 제조</td></tr><tr><td>100 bp DNA 사다리 III</td><td>제네에이드</td><td>엔씨007</td><td>대만에서 제조되었습니다.</td></tr><tr><td>2x SuperRed PCR 마스터 믹스</td><td>바이오툴</td><td>TE-SR01 시리즈</td><td>대만산</td></tr><tr><td>6cm 페트리 접시</td><td>알파 플러스 사이언티픽</td><td>16021</td><td>대만산</td></tr><tr><td>한천</td><td>바이오맨 사이언티픽</td><td>AGR001.1</td><td>미생물학 등급</td></tr><tr><td>아가로스</td><td>바이오맨 사이언티픽</td><td>PB1200 시리즈</td><td>대만산</td></tr><tr><td>BioGreen Safe DNA 젤 완충액</td><td>바이오맨 사이언티픽</td><td>SDB001T</td><td>대만산</td></tr><tr><td>Easy DNA 고속 추출 조직 키트</td><td>피셔 바이오텍</td><td>ET-100</td><td>https://www.fisherbiotec.com.au/wp-content/uploads/2021/11/FB-EDNA-DNA-Kits-flyer-11Nov21.pdf(호주제)</td></tr><tr><td>포워드 프라이머: LCO 1490</td><td>유전체학&nbsp;</td><td>PO-PR220919G6</td><td>시퀀스: 5'-GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G-3'</td></tr><tr><td>GenepHlow 젤/PCR 키트</td><td>제네에이드</td><td>DFH300</td><td>http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf</td></tr><tr><td>유리 사육 컨테이너&NBSP;</td><td>Sunshine Lab 장비 회사</td><td></td><td>크기: 높이 35mm, 내경 45mm. 플라스틱 또는 유리 컵의 모든 유사 크기로 repalce할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>혈구계</td><td>폴 마리엔펠트</td><td>640030</td><td>독일에서 만든</td></tr><tr><td>부 화기</td><td>하이포인트</td><td>F740</td><td>대만산</td></tr><tr><td>가죽 커터</td><td>실제 수제 워크숍</td><td></td><td><a href="https://shopee.tw/jj891004?categoryId=100636&amp; entryPoint=ShopByPDP& itemId=16023929406">https://shopee.tw/jj891004? categoryId=100636& entryPoint=ShopByPDP& itemId=16023929406</a></td></tr><tr><td>MiniAmp 열 순환기</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>A37834</td><td>미국에서 제조</td></tr><tr><td>광학 현미경&nbsp;</td><td>니콘</td><td>&nbsp; Ci-L</td><td>일본 업체</td></tr><tr><td>페인팅 브러쉬</td><td>Tian Cheng 브러시 회사</td><td>4716608400352</td><td>크기 0 또는 1 원형 브러시에 해당하는 끝이 가는 수채화 브러시로 교체할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>종이 타월</td><td>5월 꽃</td><td>BLS007-8</td><td>대만산</td></tr><tr><td>파라필름 M</td><td>베미스</td><td>PM-996</td><td>미국에서 제조</td></tr><tr><td>펠렛 유봉</td><td>바이오맨 사이언티픽</td><td>GT100R</td><td>대만산</td></tr><tr><td>리버스 프라이머: HCO 2198</td><td>유전체학&nbsp;</td><td>PO-PR220919G6</td><td>시퀀스: 5'-TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA-3'</td></tr><tr><td>Sabouraud 포도당 국물</td><td>하이미디어</td><td>MH033-500G</td><td>인도에서 만든</td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>솝탑</td><td>SZN71 시리즈</td><td>대만산</td></tr><tr><td>TAE 버퍼 50X</td><td>바이오맨 사이언티픽</td><td>TAE501000</td><td>대만산</td></tr><tr><td>트윈 80</td><td>PanReac AppliChem</td><td>142050.1661</td><td>대만산</td></tr><tr><td>지퍼 백</td><td>웬첸 플라스틱 회사</td><td>1809000061</td><td>크기: 너비 12cm, 길이 17cm. (대만제)</td></tr></tbody></table>

곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(scirtothrips dorsalis hood) 사육 시스템 구축

Establishment of a Chilli Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) Rearing System for Virulence Screening of Entomopathogenic Fungi

이 연구에서 제시된 실험적 흐름도는 현장 수집부터 EPF 분리물의 독성 스크리닝에 이르기까지 고추 총채벌레의 안정적인 사육 시스템이 확립될 수 있음을 보여주었습니다(그림 1). 형태학적 관찰을 통해 고추 총채벌레를 다른 꽃 총채벌레와 구별할 수 있지만, PCR 앰플리콘 크기 및 COI 염기서열 분석을 포함한 부분 COI 염기서열을 분자 마커로 사용하면 현장에서 채취한 총채벌레를 고추총채벌레로 식별하는 것을 추가로 확인할 수 있습니다(그림 3). 분리된 잎 사육 시스템은 총채벌레가 자손을 번식시킬 수 있는 더 나은 제어 환경(즉, 온도 및 습도)과 충분한 먹이 공급원을 제공합니다. 따라서 사육 용기에서 안정적인 고추 총채벌레 식민지를 보장합니다. 독성 스크리닝 생물 검정(그림 4)에서 대조군 처리에서 총채벌레의 생...

곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis Hood) 사육 시스템 구축

The chilli thrips (Scirtothrips dorsalis Hood) is an economically significant pest of ornamental and food crops in Taiwan. Entomopathogenic fungi (EPF) ...

고추 총채벌레는 여러 작물에서 잘 연구된 해충입니다. 우리의 연구는 고추 총채벌레 사육 시스템의 개선에 초점을 맞추고 있으며 향후 실험을 위해 곤충 병원성 곰팡이 스크리닝에 대한 적용을 확장합니다. 최근 연구는 우리에 있는 전체 식물에서 고추 총채벌레를 대량 사육하는 데 중점을 두었습니다. 일부는 분리된 잎과 같은 대안을 모색하고 있지만 명확하고 상세한 방법은 아직 잘 설명되지 않았습니다.본 연구는 분리된 잎을 기반으로 한 새로운 총채벌레 대량 사육 방법을 확립하여 안정적인 고추총채벌레 군집을 보장할 수 있습니다. 또한, 곤충병원성 진균 독성 스크리닝을 위해 안정적이고 재현 가능한 생물 분석 시스템이 개발되었습니다. 이 프로토콜은 리프 디스크를 사용하여 총채벌레를 마스터하기 위한 명확하고 표준화된 방법의 부족을 해결하여 단계 관리를 개선하고 자원 사용을 줄이는 데 중점을 둡니다.이 프로토콜은 발달 단계 제어를 단순화하고 공간과 노동력 수요를 줄이며 대규모의 신뢰할 수 있는 생물 분석에 적합한 일관된 총채벌레 공급을 제공합니다. 우리 연구실은 대량 사육 방법을 최적화하고 이 프로토콜을 다양한 총채벌레 종에 적용하여 환경 및 취급 조건을 개선하여 생물학적 분석을 위한 일관되고 건강한 개체군을 보장하는 데 중점을 둘 것입니다. 또한 대량 사육 시스템을 확장하여 온실 시험을 사용할 수 있습니다.시작하려면 고추 총채벌채가 들끓는 잎과 꽃을 자릅니다. 플라스틱 지퍼백에 옮기고 찢어진 부분을 유지하기 위해 내부에 약간의 공기가 있는 가방을 밀봉하십시오. 다음으로 높이 35mm, 내경 45mm의 유리 사육 용기를 얻습니다.용기 바닥에 직경 40mm의 원형 종이 타월 3겹을 놓습니다. 습도를 유지하기 위해 종이 타월에 여과된 물을 8-10방울 떨어뜨립니다. 이제 어린 망고 잎을 깨끗이 씻으십시오.광학현미경으로 검사하여 곤충 알이나 기타 곤충 오염이 있는지 확인하십시오. 가죽 커터를 사용하여 망고 잎을 직경 40mm의 원형 디스크로 자르고 유리 사육 용기 안의 젖은 종이 타월 위에 놓습니다. 광학 현미경으로 10배 배율로 고추 총채벌레를 관찰합니다.미세한 페인팅 브러시를 사용하여 수컷 5마리와 암컷 5마리로 구성된 성체 총채벌채벌레 10마리를 준비된 유리 사육 용기에 옮깁니다. 그런 다음 각 유리 사육 용기를 두 겹의 파라필름으로 밀봉합니다. 적절한 환기를 보장하기 위해 숫자 0-0 곤충 핀을 사용하여 파라필름에 약 40개의 작은 구멍을 만듭니다.밀봉된 유리 사육 용기를 인큐베이터에 48시간 동안 넣습니다. 난자 위치를 나타내는 알의 존재를 확인하기 위해 실체 현미경으로 잎 조직을 관찰합니다. 그런 다음 신선한 망고 잎 디스크를 계란과 함께 잎 위에 놓고 여과된 물을 종이 타월에 8-10방울 떨어뜨려 습도를 유지합니다.총채벌레의 유지를 위해 1령 유충이 들어 있는 잎을 새로운 유리 사육 용기에 직접 옮깁니다. 매일 고추 총채벌레를 관찰하십시오. 고추 총채벌레의 대량 사육을 위해서는 먼저 유지된 개체군에서 암컷 성인 총채벌레를 수집합니다.암컷 성체 총채벌레 10마리를 준비된 사육 용기에 옮겨 알을 얻습니다. 그런 다음 약 120마리의 1령 유충을 고운 붓을 사용하여 새 유리 사육 용기에 부드럽게 옮깁니다. 분자 식별을 위해 성체 고추 총채벌레 한 마리를 1.5밀리리터 원심분리기 튜브에 모으십시오.펠릿 유봉을 사용하여 고추 총채벌레를 균질화합니다. 그런 다음 제조업체의 프로토콜에 따라 상용 키트를 사용하여 게놈 DNA를 분리하고 PCR 마스터 믹스를 사용하여 증폭합니다. 증폭 결과를 확인하기 위해 1% 아가로스 겔에서 전기영동으로 PCR 앰플리콘을 확인합니다.젤에서 약 658 염기쌍 크기의 표적 밴드를 절제합니다. 기본 매개변수를 사용하여 NCBI 데이터베이스에서 폭발 검색을 수행하여 종 식별을 확인합니다. 곤충 병원성 진균의 제조를 위해, 1/4 강도의 Sabouraud's 포도당 한천에서 성장한 10-14일 된 진균 배양액의 표면에 0.03% 트윈 80의 2-3밀리리터를 첨가합니다.멸균 루프를 사용하여 분생자를 부드럽게 긁어냅니다. 진균 현탁액을 깨끗한 15밀리리터 원심분리기 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 최대 속도로 와류하여 서스펜션을 균질화합니다.여과지를 통해 현탁액을 여과하여 하이필 잔해물을 제거하고 순수한 분생자 현탁액을 얻습니다. 혈구계를 사용하여 광학 현미경으로 분생자의 수를 확인하십시오. 현탁액을 희석하여 밀리리터당 분생자 10의 8제곱을 달성합니다.그런 다음 후속 생물 분석 적용을 위해 분생자 현탁액을 자외선으로 멸균된 마이크로 분무기로 옮깁니다. 블루베리 농장에서 어린 블루베리 잎을 모아 씻습니다. 자연 건조 후 실체 현미경으로 표면을 검사하여 남아 있는 절지동물이나 알이 있는지 확인하고 있는 경우 제거합니다.이제 가죽 커터를 사용하여 직경 2.8cm의 리프 디스크를 자릅니다. 그런 다음 1% 차아염소산나트륨 용액으로 잎 디스크를 소독합니다. 그리고 3개는 멸균수로 두 번 헹구어 표백제 잔여물을 제거합니다.다음으로, 2.5% 한천 3밀리리터를 층류 후드 내부의 작은 유리 용기에 붓습니다. 그런 다음 잎 디스크를 동향 쪽을 한천 위로 부드럽게 옮기고 작은 부분만 표면 위에 노출되도록 약간 삽입합니다. 한천이 완전히 응고되면 생물학적 분석을 위해 유리 용기를 준비한 것을 고려하십시오.적용하기 전에 분생자 현탁액을 완전히 소용돌이치십시오. 마이크로 분무기를 사용하여 유리 용기 내부에서 약 10cm 거리에서 각 잎 디스크 표면에 현탁액 0.1ml를 고르게 도포합니다. 이제 고운 페인트 브러시를 사용하여 10령 유충을 각 유리 용기에 옮깁니다.각 용기를 두 겹의 파라필름으로 밀봉합니다. 숫자 0-0 곤충 핀을 사용하여 파라필름에 환기를 위해 약 30개의 작은 구멍을 만듭니다. 그런 다음 용기를 인큐베이터에 7일 동안 넣습니다.7일 동안 매일 10배 배율의 실체 현미경으로 고추 총채벌레의 사망률을 관찰하고 기록합니다. 죽은 유충을 유리 용기 안에 보관하여 진균증 관찰을 통해 내내 병원성 진균 감염을 확인합니다. 선택된 곤충병원성 진균의 생물학적 분석을 위해 3가지 농도의 분생자 현탁액을 준비합니다.현탁액을 다른 사육 용기에 접종합니다. 치료 간의 유의미한 차이를 결정하기 위해 일원 분산 분석을 수행하기 전에 아크사인 변환을 사용하여 각 진균 균주의 사망률 데이터를 변환합니다. 그런 다음 검인 회귀 분석을 사용하여 치사 시간 중앙값과 치사 농도 중앙값 값을 계산합니다.초기 유충 단계, 후기 유충 단계, 성충 단계를 포함하여 다양한 생애 단계에서 고추 총채벌레의 형태학적 특징이 뚜렷하게 관찰되었습니다. 부분 COI 유전자를 표적으로 하는 중합효소 연쇄 반응 증폭은 현장에서 채취한 총채벌레가 고추 총채벌레라는 신원을 확인하는 밴드를 생성했습니다. 분리된 잎 사육 시스템은 7일의 관찰 기간 동안 대조군에서 관찰된 90%의 생존율로 고추 총채벌레 군집 확립을 성공적으로 지원했습니다.테스트된 곤충병원성 진균 분리주 중 동충하초 cateniannulata NCHU-213은 접종 후 7일 동안 고추 총채벌레 유충에서 가장 높은 사망률을 유발했으며 동충하초 cateniannulata NCHU-298이 그 뒤를 이었고 Beauveria bassiana는 더 낮은 독성을 보였습니다. 동충하초 cateniannulata NCHU-213 및 동충하초 cateniannulata NCHU-298의 밀리리터당 분생자 8의 거듭제곱의 LT50 값은 Beauveria bassiana보다 유사한 값을 보였고 더 짧은 날을 나타냈습니다. 균증은 동충하초 분리주에 감염된 총채벌레 시체에서 몸을 덮고 있는 곰팡이 증식에서 볼 수 있듯이 눈에 띄게 관찰되었습니다.접종 후 4일과 5일에 동충하초 cateniannulata NCHU-213으로 치료한 총채벌레에서 용량 의존적 사망률 증가가 분명했으며, 7일 후 71.4%로 가장 높은 사망률은 밀리리터당 분생자 10의 7제곱에서 관찰되었으며, 그 다음으로 10의 58.9%의 10분포자의 8제곱, 10의 44.4%가 밀리리터당 분생자의 6제곱으로 관찰되었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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Helicoverpa armigera에 대한 Phytochemicals의 살충 효과를 평가하기 위한 공급 분석 시스템 개발

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Isolation, Behavioral Identification, and Pathogenicity Assessment of Entomopathogenic Fungi from a Forest Wood Borer(포레스트 우드 보어의 곤충병원성 곰팡이의 격리, 행동 식별 및 병원성 평가)

이 동영상은 실험실에서 뒤쪽 아노 펠 레스 gambiae하는 데 사용되는 일반적인 기법을 보여줍니다. 실험실 모기를 돌보는위한 방법은 혈액 먹이 어른 pupae에 애벌레에서 유기체의 생명주기의 모든 단계를 통해 증명하고 있습니다.

모스키토 리어링 (A. gambiae)에 대한 프로토콜

배우세요 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis) 대량 사육을 위한 분리엽 생물검정법을 활용한 방법입니다. 높은 생존률과 동기화된 발달을 통해 곤충병원성 진균의 독성을 효과적으로 선별할 수 있습니다.

곤충병원성 진균의 독성 스크리닝을 위한 고추총채벌레(Scirtothrips dorsalis Hood) 사육 시스템 구축

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