특정 장과 관련된 림프 통신의 선택적 교란을 위한 쥐 장간막 림프절출술

저희 연구는 신항원과 말초 조직에 대한 T세포 반응에 초점을 맞추고 있으며, 이러한 반응은 프라이밍에 크게 영향을 받기 때문에 주로 프라이밍 이벤트가 발생하는 위치에 집중합니다. 현재 림프절과 조직 간 교통 수송을 차단하는 널리 사용되는 방법은 S1P 수용체 작용제와 인테그린 차단제와 같은 전신 치료법뿐입니다. 하지만 이러한 광범위한 억제 현상은 특정 국소 림프절의 기여도를 연구하는 것을 막고 있습니다.

저희 프로토콜은 네 개의 주요 장간막 림프절 지점 각각에서 매우 선택적인 림프절 절제술에 대해 심층 설명을 제공하며, 이 림프절들은 배액하는 장 구간에 특수화되어 있어 이 잘 견디는 생존 절차로 특정 림프 축을 교란시키고 나머지는 그대로 유지할 수 있습니다. 뒷발로 적절한 마취 깊이를 확인한 후, 멸균 수술용 가위를 사용해 마취된 쥐의 중간 피부 절개를 0.5에서 1센티미터 사이에 만듭니다. 멸균 겸자를 사용해 복벽에서 떨어진 피부를 해리하여 백선을 확인하세요.

그 후 백선을 통해 복강에 접근하기 위해 0.5에서 1센티미터 정도의 절개를 더 합니다. 둔한 끝 가비지 바늘을 사용해 복강에 체온에 맞는 멸균 식염수 1밀리리터를 주입하세요. 장 위치 측정을 위해 멸균된 커튼을 촉촉하게 하세요.

첫 림프절 지점을 절제하기 위해, 외부에 노출된 장을 습윤된 커튼 위에 위치시키고, 맹장은 아래쪽에, 근위 결장은 위쪽에, 말단 회장은 외과의사 쪽으로 위치시킵니다. 대장을 따라 세로로 뻗은 장간막 림프절 사슬을 확인하세요. 각도가 있는 미세 팁 겸자를 사용해, 닫힌 겸자를 회장혈관에서 멀리 떨어진 첫 번째 림프절 지점을 둔하게 해리하여 부드럽게 열어줍니다.

이론적으로 인근 림프절로의 측부 유입 위험을 줄이기 위해, 림프절 사슬을 따라 단일 중단 봉합사를 단일 중단 봉합사(원위1밀리미터, 근위부 1밀리미터)를 단섬유 나일론 봉합사와 미세 팁 겸자를 사용하여 선택적으로 시행합니다. 림프절 스테이션을 부드럽게 후퇴시키고, 미세 가위를 사용해 목표 림프절 스테이션을 두팔라드 방향에서 후리 방향으로 절제합니다. 회장결장혈관, 회장혈관, 공주혈관의 원위 가지를 관찰하여 혈액 공급이 온전한지 확인하라.

두 번째 림프절 지점을 절제하려면 소장을 부드럽게 내장하고, 장을 젖은 드레이프 위에 위치시키며, 맹장은 아래쪽, 근위 대장은 위쪽, 소장은 외과의사의 오른쪽 쪽에 위치시킵니다. 다음으로, 대장을 따라 종방향으로 뻗어 회장과 주공혈관이 만나는 지점에서 시작하는 두 번째 림프절 지점을 확인한다. 각진 미세 겸자를 사용해 두 번째 림프절 부위를 대장혈관에서 멀리 떨어진 곳을 무딘하게 박리합니다.

주변 림프절로의 측부 유입 위험을 이론적으로 줄이기 위해, 림프절 사슬을 따라 단일 중단 봉합사를 단일 중단 봉합사(단섬유 나일론 봉합사와 미세 팁 겸자를 사용)를 시행합니다. 림프절 부위를 부드럽게 후리로 젖힌 후, 가위를 사용해 두부에서 후쪽 방향으로 두 번째 림프절 부위를 절제합니다. 수술 부위를 점검하여 지혈을 확인하세요.

네 번째 림프절 관측을 절제하려면 후방 연결 지점까지 부드럽게 소장 전체를 내장을 적출합니다. 장을 젖은 커튼 위에 위치시키고, 맹장은 아래쪽에, 근위 대장은 위쪽에, 소장은 외과의사의 오른쪽 쪽으로 배치합니다. 네 번째 림프절 스테이션을 식별하는데, 이 위치는 원위 대장 바로 안쪽, 세 번째 림프절 외측에 위치합니다.

각진 미세 겸자나 초미세 가위를 사용해 네 번째 림프절 부위를 대장혈관과 주변 지방 조직에서 멀리 둔하게 절단합니다. 주변 림프절로의 측수혈 위험을 이론적으로 줄이기 위해, 각 림프절에서 단일 단단한 봉합사를 한 번 중단한 봉합술을 선택적으로 시행하며, 보통 림프절에서 1mm 떨어진 곳에서 단섬유 나일론 봉합과 미세 팁 겸자를 사용합니다. 그 다음 네 번째 림프절 부위인 두부를 부드럽게 당기세요.

미세하거나 초미세 가위를 사용해 후리에서 두부까지 림프절 부위를 절제합니다. 네 번째 림프절 스테이션의 두 번째 림프절에 대해서도 같은 절차를 반복합니다. 림프절을 조심스럽게 해리하고, 필요 시 봉합 결찰을 시행한 후 절제하세요.

수술 부위를 점검하여 지혈 여부를 확인하세요. 복부 내용물을 복강으로 되돌린 후, 증발성 체액 손실을 보상하기 위해 체온에 맞는 멸균 식염수 1밀리리터를 복강에 주입합니다. 복부를 두 겹으로 봉합하세요: 먼저 복벽, 그다음 6-0 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사를 사용해 피부를 달리듯 봉합합니다.

장간막림프절제술로 채취된 조직은 지방 함량이 낮은 샘플을 지속적으로 얻었으며, 이는 PBS가 즉시 침몰하는 것으로 입증되었습니다. 유세포검사 분석 결과, 장간막 림프절제술 유래 샘플의 95% 이상이 CD45 양성으로 확인된 반면, 내장 지방 조직 대조군에서는 7%에 불과했습니다.