쥐 채혈을 위한 안면 정맥 정맥 천자

본 연구의 목표는 쥐 피험자에게 최적화된 채혈 방법을 제시하는 것이다. 이 방법은 생쥐의 소량 혈액 수집에 필요한 시간과 기술을 줄여주지만 여전히 윤리적이고 최소 침습적 관행을 우선시합니다. 채혈 방법은 종종 지나치게 복잡합니다.

우리는 모든 것을 단순화하고 최소한의 시간, 노력 및 재료로 명확한 용해를 달성할 수 있음을 보여주고 싶었습니다. 다른 기술에 비해 이 프로토콜의 주요 장점은 연구자에게 시간을 돌려주는 것입니다. 이 방법은 매우 빠르며 실행하는 데 재료나 전문 기술이 거의 필요하지 않습니다.

시작하려면 각 케이지 카드와 마우스에 수집 튜브의 해당 라벨과 일치하는 표현형 식별자로 라벨을 붙입니다. 튜브의 표시와 일치하도록 영구 마커로 쥐의 꼬리를 표시하십시오. 절차에 필요한 모든 란셋과 거즈 스펀지를 열고 라벨이 붙은 각 튜브에 1-2밀리리터의 용해 완충액을 추가합니다.

이제 주로 사용하는 손을 사용하여 마우스의 꼬리를 잡고 와이어 공급 선반이나 평평한 표면에 놓습니다. 주로 사용하지 않는 검지와 엄지손가락으로 꼬리에서 경추 부위를 향해 움직여 마우스의 목덜미를 잡습니다. 그런 다음 나머지 손가락을 사용하여 꼬리를 고정하여 마우스 움직임을 최소화합니다.

다음으로, 주로 사용하는 손을 사용하여 열린 3mm 란셋을 회수합니다. 입 바로 너머에 있는 작은 털이 없는 부분을 찾아 귀 쪽으로 직선을 그립니다. 선이 눈의 바깥쪽 모서리와 교차하는 곳에서 멈춥니다.

이제 이 교차점에 란셋을 삽입하여 충분한 혈액 공급을 보장하고 란셋의 평평한 측면 가장자리를 사용하여 혈액 한 방울을 수집합니다. 그런 다음 채취한 혈액이 담긴 전체 란셋을 적혈구 용해 완충액이 들어 있는 라벨 튜브에 넣고 튜브를 부드럽게 교반하여 혈액이 완충액과 완전히 혼합되도록 합니다. 거즈 스펀지를 사용하여 천자 부위에 5-10초 동안 부드럽게 압력을 가한 다음 마우스를 케이지로 되돌립니다.

각 샘플 튜브에 약 2밀리리터의 행크스 균형 염 용액과 0.5밀리몰 EDTA를 첨가합니다. 튜브를 원심분리기에 넣고 400G에서 5분 동안 회전시킵니다. 이 시간 동안 항체 칵테일을 준비하십시오.

원심분리 후 각 튜브에서 상청액을 버립니다. 그런 다음 집게를 사용하여 튜브에서 란셋을 제거하고 각 샘플에 30마이크로리터의 항체 칵테일을 추가합니다. 샘플을 2-3초 동안 소용돌이치게 하여 세포를 재현탁하고 샘플을 섭씨 4도에서 25-30분 동안 배양합니다.

그런 다음 유세포 분석기를 켜고 실험 요구 사항에 따라 유량 플롯을 구성합니다. 이송 피펫을 사용하여 150-250마이크로리터의 Hanks' balanced 염 용액 또는 기타 배지를 각 샘플에 추가합니다. 필요한 경우 100마이크로리터의 DAPI 함유 배지를 사용하여 밀리리터당 1마이크로그램의 최종 농도로 DAPI를 첨가합니다.

획득 직전에 각 샘플을 2-3초 동안 소용돌이치게 합니다. 마지막으로 데이터 수집을 위해 유세포 분석기의 시약과 실행 설정을 확인합니다. 야생형 마우스의 유세포 분석은 혈소판에서 tdTomato 신호를 나타내지 않은 반면, Pf4-Cre 리포터 마우스는 뚜렷한 tdTomato 양성 혈소판 집단과 더 큰 tdTomato 양성 혈소판 결합 세포를 나타냈습니다.

야생형 마우스와 Pf4-Cre 마우스 모두에서 측면 산란 대 전방 산란 플롯은 세포 파편, 림프구 및 과립구 사이의 명확한 분리를 보여주었으며, 이는 효과적인 적혈구 용해 및 보존된 샘플 구조를 나타냅니다. CD19 양성 IGMA 양성 B 세포는 MD4Ighel 마우스에서 검출된 반면, 야생형 마우스는 CD19 양성에도 불구하고 IGMA 신호가 부족했습니다.