Name: 포유류 유전자 발현을 제어하기 위한 광유도 시스템의 신속한 최적화 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: 학습하세요 광유도 유전자 발현 최적화 방법을 HEK293T 세포에서. 3D 프린팅 LED 어레이와 LACE 도구를 활용한 고효율 실험 기술로 포유류 세포에서 유전자 조절 연구를 향상시킵니다.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL 마이크로 원심분리관</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 시약 저장소</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 혈청학적 피펫</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mu; L 필터 팁</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL &nbsp; 고성능 원심분리관, 평평한 캡</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>1931-C 광출력 계</td><td>뉴포트</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>2mL 혈청학적 피펫</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 & mu; L 필터 팁</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 & mu; L 필터 팁</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 고성능 원심분리기 튜브, 평평한 캡</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>96웰 V-바텀 플레이트</td><td>브랜드 플레이트</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, LED 빨간 전구</td><td>블루스 전구</td><td>해당 없음</td><td>적색광원</td></tr><tr><td>아두이노 IDE 소프트웨어</td><td>아두이노</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>생명안전 캐비닛, 클래스 II</td><td>누에어</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>브라이트-라인 혈구계</td><td>하우서 사이언티브</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>세포 카운팅 슬라이드</td><td>바이오래드</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플레이트 96-웰, #1.5H 유리 바닥판</td><td>셀비스</td><td>P96-1.5 H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert 소프트웨어</td><td>벡먼 쿨터</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX 일일 QC 형광구 사용 준비 완료</td><td>벡먼 쿨터</td><td>C65719</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>CytoFLEX-S 플로우 사이토미터 (보라색 4개, 파란색 2개, 노란 그린 4개, 빨간색 3개 채널)</td><td>벡먼 쿨터</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>둘벡코의 인산염 완충 식염수 분말, 칼리컴, 마그네슘 없음</td><td>피셔 사이언티브</td><td>21600069</td><td>실내 온도</td></tr><tr><td>에펜도르프 원심분리기 5804</td><td>에펜도르프</td><td>그리고 nbsp; 022622501</td><td>V-바닥판 원심분리기 단계</td></tr><tr><td>에펜도르프 원심분리기 5810R</td><td>에펜도르프</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>에펜도르프 리서치 플러스, 8채널, 가변 볼륨, 30 - 300 & 뮤; L</td><td>에펜도르프</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>에펜도르프 리서치 플러스, 단일 채널, 가변 볼륨, 100 - 1000 & mu; L</td><td>에펜도르프</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>에펜도르프 리서치 플러스, 싱글 채널, 가변 볼륨, 2 - 20 & 뮤; L</td><td>에펜도르프</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, 단일 채널, 가변 볼륨, 20 - 200 & mu; L</td><td>에펜도르프</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>범용 실험실 라벨링 테이프</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM, 분말, 고혈당</td><td>피셔 사이언티브</td><td>12100061</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>깁코 트리판 블루 용액, 0.4%</td><td>피셔 사이언티브</td><td>15-250-061</td><td>실내 온도</td></tr><tr><td>Gibco Value Heat 비활성화 FBS</td><td>피셔 사이언티브</td><td>A5256901</td><td>-20 & 도; C</td></tr><tr><td>Gibco, 트립신-EDTA (0.05%), 동물성 EDTA, 1X, 페놀 레드, 500 mL</td><td>깁코</td><td>25300062</td><td>-20 & 도; C</td></tr><tr><td>HEK293T 셀</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 & 도; C, 액체 질소</td></tr><tr><td>실험실 마커, 마이크로노바</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>금속 데스크 램프</td><td>단순한 설계</td><td>해당 없음</td><td>빨간 불을 위한 램프</td></tr><tr><td>옵토플레이트-96</td><td>LAB메이커</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>피펫 보조 XP</td><td>드럼몬드</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>플라스미드: CIBN-gRNA</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>-20 & 도; C</td></tr><tr><td>플라스미드: CMV-eGFP</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>-20 & 도; C</td></tr><tr><td>플라스미드: CRY2-eGFP</td><td>해당 없음</td><td>해당 없음</td><td>-20 & 도; C</td></tr><tr><td>폴리젯 DNA 시험관 형질전환 시약</td><td>피셔 사이언티브</td><td>NC1536117</td><td>4 & deg; C</td></tr><tr><td>T-75 세포 배양 플라스크</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>워터 재킷 CO2 인큐베이터</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

포유류 유전자 발현을 제어하기 위한 광유도 시스템의 신속한 최적화

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

이 비디오는 마우스 모델의 테트라사이클린 또는 Tet-On 유전자 발현 시스템을 보여줍니다. 테트라사이클린 유도체인 독시사이클린(doxycycline)이 존재할 때, 역테트라사이클린(reverse tetracycline)으로 제어되는 트랜스액티베이터(transactivator) 단백질로 구성된 Tet-On 시스템이 활성화되고 관심 유전자를 발현합니다.

Inducible Tet-On 조절 가능한 시스템 기반 유전자 발현 In Vivo: 마우스 모델에서 표적 유전자 전사 활성화를 위한 테트라사이클린 유도 유전자 발현 시스템

이 프로토콜은 동족 GFP 기자 및 유동 세포 계측법을 통해 GFP 발현을 자극하는 ATFs 능력의 정량화 인공 전사 인자 (ATFs)의 신속한 건설을위한 실험 절차를 설명합니다.

빠른 합성 및 GFP 기반 기자들과 화학적으로 활성화 된 전사 인자의 상영

여기에 설명된 방법은 anti-apoptotic bacterial effector 단백질의 활성을 해부하기 위해 정의된 단계에서 apoptotic signaling cascade를 유도하는 데 사용됩니다. 이 방법은 또한 pro-apoptotic 또는 독성 단백질의 유도성 발현 또는 다른 신호 경로와의 간섭을 해부하는 데 사용할 수 있습니다.

유도 발현 시스템을 적용하면 세포 내 신호와 세균 독성 요인의 간섭을 연구하기 위해

이 프로토콜은 세포 분화 및 Xenopus 배아 발달 동안 mitogen - 활성화 단백질 키니 아제 (MAPK) 활동을 조절하는 optogenetic 전략을 설명합니다. 이 방법은 포유류 세포 배양 및 높은 공간적 및 시간적 해상도를 갖는 Xenopus 태아와 같은 다세포 생균에서 MAPK 신호 전달 경로의 가역적 활성화를 허용한다.

세포 분화 동안 미토 겐 활성 단백질 키나아제 경로의 광 매개 가역적 변조<em&gt; Xenopus</em&gt; 배아 발달

여기, 우리 optogenetic 컨트롤의 진동 정보 셀 전송 분석 및 유전자 발현의 모니터링 라이브 프로토콜을 제시. 이 방법은 다세포 시스템에서 동적 유전자 식 프로그램의 기능적 중요성을 테스트 하려면 독특한 플랫폼을 제공 합니다.

제어 하 고 셀 상호 작용에서 유전자 표현 패턴을 분석 하는 Optogenetic 메서드

이 프로토콜은 살아있는 동물 또는 향상 된 락 진압 및 tet 활성 시스템을 사용 하 여 셀에 있는 관심사의 내 생 유전자의 녹음 방송을 통제 될 수 있다 조건에 따라 모델 시스템을 생성 하는 데 필요한 단계를 설명 합니다.

Vivo 내 인 성 유전자 발현의 조작에 대 한 원격 제어 시스템의 응용 프로그램에서

광-반응성 포유동물 세포를 안정적으로 제어하려면 광유전학적 방법의 표준화가 필요하다. 이러한 목표를 향하여, 본 연구는 유전자 회로 구축, 세포 공학, 광유전학 장비 운영 및 검증 분석의 파이프라인을 개괄하여 네거티브 피드백 광유전학 유전자 회로를 이용한 광유도 유전자 발현 연구를 사례 연구로 표준화한다.

포유류 세포에서 안정적인 광유전학적 유전자 회로를 안정적으로 엔지니어링하고 제어합니다.

광유전학은 광범위한 응용 프로그램을 가진 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 청색 광 반응 TAEL/C120 시스템을 사용하여 제브라피시 배아에서 빛을 유도할 수 없는 유전자 발현을 달성하는 방법을 보여줍니다.

광유전학 적 TAEL/C120 시스템을 사용하여 제브라피시 배아에서 빛 유발 GFP 발현

생체발광-루시퍼라제 효소에 의해 방출되는 광은 소분자 기질인 루시페린-광감각 단백질을 활성화시키기 위해 이용될 수 있고, 이로써 광 자극에 또 다른 차원을 추가하고 시간적 및 공간적 스케일에 걸쳐 세포에서 다수의 광-매개 기능의 조작을 가능하게 한다.

생체 발광 광유전학 2.0 : 생체 발광을 활용하여 체외 및 생체 내에서 광감각 단백질을 활성화 합니다.

미생물 대사의 광유전학적 조절은 발효 과정에 대한 유연한 동적 제어를 제공합니다. 여기의 프로토콜은 다양한 부피 규모에서 화학 및 단백질 생산을위한 청색광 조절 발효를 설정하는 방법을 보여줍니다.

미생물 화학 및 단백질 생산을 위한 광 조절 발효

이 프로토콜은 단백질 활성의 가역적 시공간 제어를 위해 엔지니어링된 청색광 활성화 알로스테릭 스위치(LightR) 도메인의 적용을 설명합니다. 이 연구는 Src 티로신 키나아제를 모델로 활용하여 광 조절 Src(LightR-Src)를 개발하고 특성화하기 위한 정교한 프로토콜을 제공합니다. 이는 효소 종류 전반에 걸쳐 이 접근법의 다양성을 보여줍니다.

Optogenetic Allosteric Regulation을 통한 단백질 활성의 시공간 제어

학습하세요 광유도 유전자 발현 최적화 방법을 HEK293T 세포에서. 3D 프린팅 LED 어레이와 LACE 도구를 활용한 고효율 실험 기술로 포유류 세포에서 유전자 조절 연구를 향상시킵니다.

포유류 유전자 발현을 제어하기 위한 광유도 시스템의 신속한 최적화

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