Name: 유리체 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하기 위한 공초점 반사 현미경을 위한 돼지 눈 준비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 배우세요 공초점 반사 현미경을 사용하여 돼지 눈 유리체의 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하는 방법을. 최소 처리 기법으로 자연 구조를 보존하여 망막 박리의 근본 원인 연구에 활용할 수 있습니다.

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<ol><li>Sebag, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreous+and+vision+degrading+myodesopsia%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Vitreous and vision degrading myodesopsia.</a> Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).</li>
<li>Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+mechanics+of+the+vitreoretinal+interface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mech+Behav+Biomed+Mater%22%5BJournal%5D)">Structure and mechanics of the vitreoretinal interface.</a> J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).</li>
<li>Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+acute+posterior+vitreous+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Complications of acute posterior vitreous detachment.</a> Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).</li>
<li>Ketkar, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitreomacular+traction+-+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">Vitreomacular traction - a review.</a> Eye. 39 (4), 710-717 (2025).</li>
<li>Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+degradation+identifies+components+responsible+for+the+structural+properties+of+the+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).</li>
<li>Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiber+alignment+drives+changes+in+architectural+and+mechanical+features+in+collagen+matrices%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices.</a> PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).</li>
<li>Bishop, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+macromolecules+and+supramolecular+organisation+of+the+vitreous+gel%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel.</a> Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).</li>
<li>Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+of+the+rabbit+vitreous+body%3A+Lamellae%2C+Cloquet%27s+channel+and+a+novel+structure%2C+the+%27Alae+canalis+Cloqueti%27%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'.</a> Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).</li>
<li>Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestinal+submucosa%3A+A+tissue-derived+extracellular+matrix+that+promotes+tissue-specific+growth+and+differentiation+of+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro.</a> Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).</li>
<li>Bos, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collagen+fibril+organisation+in+mammalian+vitreous+by+freeze+etch%2Frotary+shadowing+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Micron%22%5BJournal%5D)">Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy.</a> Micron. 32 (3), 301-306 (2001).</li>
<li>Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phase-contrast+microscopy+of+the+animal+vitreous+body%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body.</a> Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).</li>
<li>Filas, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+enzymatic+vitreolysis-induced+fiber+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).</li>
<li>Los, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+rabbit+as+an+animal+model+for+post-natal+vitreous+matrix+differentiation+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eye%22%5BJournal%5D)">The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration.</a> Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).</li>
<li>Bredfeldt, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+segmentation+of+collagen+fibers+from+second-harmonic+generation+images+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer.</a> J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).</li>
<li>Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+quantifying+fibrillar+collagen+alignment%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Methods for quantifying fibrillar collagen alignment.</a> Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).</li>
<li>Wershof, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+FIJI+macro+for+quantifying+pattern+in+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix.</a> Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).</li>
<li>François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histochemical+structure+of+the+vitreous+fibers+studied+by+phase-contrast+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy.</a> Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).</li>
<li>Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+reflectance+microscopy+for+mapping+collagen+fiber+organization+in+the+vitreous+gel+of+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye.</a> Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).</li>
<li>Harris, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+in+vitro+type+I+collagen+fibrillogenesis+by+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy.</a> Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).</li>
<li>Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+rheology+of+type+I+collagen+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Size-dependent rheology of type I collagen networks.</a> Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).</li>
<li>Raub, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+assessment+of+collagen+gel+microstructure+and+mechanics+using+multiphoton+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy.</a> Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아가로즈 1세</td><td>VWR</td><td>0710-500G</td><td></td></tr><tr><td>다목적 실리콘 1 코킹, 투명</td><td>GE</td><td>2795576</td><td></td></tr><tr><td>셀룰로오스 스펀지 (Weck-Cel Eye Spear)</td><td>비버 - 비지텍</td><td>000865</td><td></td></tr><tr><td>커스텀 3프롱 받침대 &nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>대형 커버슬립 유리 장착용 맞춤 어댑터</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>대형 커버슬립 글라스, 1.42" x&nbsp; 2.36" 1위</td><td>테드 펠라</td><td>260460-100</td><td></td></tr><tr><td>레고 (클래식 베이스플레이트, 1 x 8 타일, 1 x 8 브릭, 1 x 6 플레이트)</td><td>레고</td><td>11023, 3008, 3666, 4162</td><td></td></tr><tr><td>미세토임 블레이드(고프로파일)&nbsp;</td><td>리에카 바이오시스템즈</td><td>14035838926</td><td></td></tr><tr><td>올림푸스 UPlanSApo 30x 실리콘 대물렌즈</td><td>올림푸스</td><td>UPLSAPO30XS</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 대형 얼음 트레이 (Samuelworld)</td><td>아마존</td><td>713243280060</td><td></td></tr><tr><td>티슈 (Kimwipes)와 nbsp;</td><td>킴벌리 클라크</td><td>34120</td><td></td></tr></tbody></table>

유리체 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하기 위한 공초점 반사 현미경을 위한 돼지 눈 준비

Preparing Porcine Eyes for Confocal Reflectance Microscopy to Visualize the Vitreous Collagen Fiber Network

세 마리의 젊은 성인 돼지(생후 4개월 암컷, 5개월 생후 수컷, 6개월 생후 암컷)의 한쪽 눈은 하윤부를 통해 축면으로 눈을 절편한 후 영상화되었습니다. 6개의 이미징 위치를 X-Y 절편 평면에서 4mm 간격으로 획득했습니다. 각 이미징 위치에서 70μm x 70μm 이미지의 인접한 4 x 4 그리드를 얻었습니다(그림 8). 각 돼지에 대해 각 이미지를 여러 매개변수에 대해 개별적으로 분석했습니다(표 1).
섬유의 밀도는 두 가지 방법으로 측정되었습니다: 1) 선형 구조의 분할 후 섬유의 총 길이; 2) 임계값 후 신호가 차지하는 픽셀의 비율. 섬유의 총 길이는 세 마리의 돼지 모두에 대해 유사했지만(일원 분산 분석에 의해 p = 0.19)(그림 9A), 신호가 차지하는 픽셀의 비율은 세 마리의 돼지 간에 달랐습니다(p &lt; 0.0001)...

The vitreous is a clear gel that fills the space between the lens and retina. Its structure is supported by a network of collagen fibers, which likely ...

preparing-porcine-eyes-for-confocal-reflectance-microscopy-to

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오에서는 돼지 눈의 각막이 있는 앞쪽 부분을 해부하는 방법을 보여줍니다. 분리된 분절은 안과 질환의 병태생리학을 연구하기 위한 장기 배양에 사용할 수 있습니다.

전방 안구 절제술: 돼지의 눈에서 전방 분절이 있는 각막을 분리하는 방법

이 문서는 찬란 추가 수정 및 3D 세포 배양의 라이브 영상 모두에 사용할 수 있습니다 콜라겐 레이블을하는 방법을 제시한다. 우리는 또한 3D 환경에서 배양 세포의 내생 세포 골격 단백질을 시각화하기 위해 최적화 된 프로토콜을 제공합니다.

3D로 침윤성 암 세포의 세포 골격 조직을 공개

이 절차는 IR 형광 마우스에서 콜라겐 리모델링 활동의 영상뿐만 아니라 변성 콜라겐 가닥과 혼성화 사진 트리거 할 수 있습니다 갇힌 콜라겐 모방 펩타이드를 사용하여 조직 섹션에있는 콜라겐의 생체 염색 근처 생체 내에서 보여줍니다.

변성 콜라겐 물가 이미징<em&gt; 생체 내</em&gt;와<em&gt; 예 생체 내</em&gt; 리테이너 타입 콜라겐 미메시스 펩티드의 사진 트리거 하이브리드를 통해

이 프로토콜의 목표는 사후 적출된 돼지 눈에서 온전한 유리체핵과 피질을 전체적으로 분리하는 효과적인 기술을 보여주는 것입니다.

Vitreodynamic 분석을위한 항목의 유리체 유머 해부

쥐 망막 microvascular pericytes, 즉, cryo 섹션, 전체 마운트 및 혈관 네트워크의 침투성 절연의 immunohistochemical 시각화를 위한 3 개의 다른 조직 준비 기술을 설명합니다.

망막 Cryo-섹션, Microvascular Pericytes의 Immunohistochemical 시각화에 대 한 전체-마운트 및 소형 고립 된 맥 관 구조

이 프로토콜의 목표는 아급성 안구 고혈압을 유발하는 변연 혈관 신경총의 360° 열 소작을 기반으로 하는 녹내장 신경 퇴행의 새로운 모델을 특성화하는 것입니다.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

여기서, 시험 관 내에서 일차 돼지 망막 색소 상피세포를 배양하는 방법을 제시한다.

돼지 망막 색소 상피 세포의 1 차 배양

본 프로토콜은 in vivo 이미지에서 관찰된 망막 신경절 세포 축삭 다발 형태를 검증하기 위한 목적으로 in vivo 가시광선 광간섭 단층 촬영 fibergraphy(vis-OCTF) 이미지를 동일한 마우스 망막의 ex vivo 공초점 이미지와 정렬하는 단계를 설명합니다.

Align of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina(가시광선 광간섭 단층 촬영 파이버그램과 동일한 마우스 망막의 컨포칼 이미지 정렬)

이 프로토콜은 전체 토끼 눈의 고품질 냉동 절개를 얻기 위한 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다. 토끼 눈 절제술, 고정, 포매 및 절편 절차에 대해 자세히 설명하며, 이는 큰 눈에 면역조직화학을 활용하는 모든 연구에 쉽게 적용할 수 있습니다.

Whole Rabbit Eye의 고품질 냉동 절개 획득 

망막 혈관 구조의 주위 세포는 형광 토마토 렉틴의 역궤도 주사 후 혈소판 유래 성장 인자 수용체 β로 면역 형광 염색으로 검사했습니다. 표지된 망막은 조직 제거 방법으로 추가로 처리되었으며 컨포칼 현미경으로 망막 혈관 구조를 둘러싼 주위 세포의 3차원 보기를 시각화하기 위해 전체적으로 장착되었습니다.

Immunostaining을 통한 마우스의 망막 혈관 주위 세포의 3D 시각화 

배우세요 공초점 반사 현미경을 사용하여 돼지 눈 유리체의 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하는 방법을. 최소 처리 기법으로 자연 구조를 보존하여 망막 박리의 근본 원인 연구에 활용할 수 있습니다.

유리체 콜라겐 섬유 네트워크를 시각화하기 위한 공초점 반사 현미경을 위한 돼지 눈 준비

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