Name: 재현 가능한 무세포 단백질 합성을 위한 OnePot PURE 및 조류 리보솜 생산 개선 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-22T13:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: 배우세요 OnePOT PURE 시스템과 조류 리보솜 준비 프로토콜을 개선하여 무세포 단백질 합성의 재현성과 접근성을 높이는 방법을. 균주 성장과 글리세롤 농도를 조절하여 배치 간 변동성을 최소화하고 다양한 연구실에서 합성생물학 연구를 수행할 수 있도록 지원합니다.

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<ol><li>Laohakunakorn, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bottom-up+construction+of+complex+biomolecular+systems+with+cell-free+synthetic+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Bottom-up construction of complex biomolecular systems with cell-free synthetic biology.</a> Front Bioeng Biotechnol. 8 (213), 1-26 (2020).</li>
<li>Silverman, A. D., Karim, A. S., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+gene+expression%3A+an+expanded+repertoire+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Cell-free gene expression: an expanded repertoire of applications.</a> Nat Rev Genet. 21 (3), 151-170 (2019).</li>
<li>Shimizu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+translation+reconstituted+with+purified+components%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Cell-free translation reconstituted with purified components.</a> Nat Biotechnol. 19 (8), 751-755 (2001).</li>
<li>Shimizu, Y., Ueda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pure+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Pure technology.</a> Methods Mol Biol. 607, 11-21 (2010).</li>
<li>Wang, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+in+vivo+His-tagging+of+enzyme+pathways+for+in+vitro+single-pot+multienzyme+catalysis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiplexed in vivo His-tagging of enzyme pathways for in vitro single-pot multienzyme catalysis.</a> ACS Synth Biol. 1 (2), 43-52 (2012).</li>
<li>Shepherd, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+and+synthesis+of+a+30-cistron+translation-factor+module%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">De novo design and synthesis of a 30-cistron translation-factor module.</a> Nucleic Acids Res. 45 (18), 10895-10905 (2017).</li>
<li>Villarreal, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+microbial+consortia+enable+rapid+assembly+of+pure+translation+machinery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Synthetic microbial consortia enable rapid assembly of pure translation machinery.</a> Nat Chem Biol. 14 (1), 29-35 (2018).</li>
<li>Lavickova, B., Maerkl, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+robust%2C+and+low-cost+method+to+produce+the+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">A simple, robust, and low-cost method to produce the PURE cell-free system.</a> ACS Synth Biol. 8 (2), 455-462 (2019).</li>
<li>Grasemann, L., Lavickova, B., Elizondo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OnePot+PURE+cell-free+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">OnePot PURE cell-free system.</a> J Vis Exp. (172), e62625(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+protein+expression+in+the+One-Pot+PURE+system%3A+insights+into+reaction+composition+and+translation+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimizing protein expression in the One-Pot PURE system: insights into reaction composition and translation efficiency.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1496-1508 (2025).</li>
<li>Yadav, S., Perkins, A. J. P., Liyanagedera, S. B. W., Bougas, A., Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATP+regeneration+from+pyruvate+in+the+PURE+system%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">ATP regeneration from pyruvate in the PURE system.</a> ACS Synth Biol. 14 (1), 247-256 (2025).</li>
<li>Doerr, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+cell-free+RNA+and+protein+synthesis+with+minimal+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Biol%22%5BJournal%5D)">Modelling cell-free RNA and protein synthesis with minimal systems.</a> Phys Biol. 16 (2), 025001(2019).</li>
<li>Christodoulou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heteronuclear+NMR+investigations+of+dynamic+regions+of+intact+Escherichia+coli+ribosomes%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Heteronuclear NMR investigations of dynamic regions of intact Escherichia coli ribosomes.</a> PNAS. 101 (30), 10949-10954 (2004).</li>
<li>Garenne, D., Thompson, S., Brisson, A., Khakimzhan, A., Noireaux, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+all-E+coli+TXTL+toolbox+3.0%3A+new+capabilities+of+a+cell-free+synthetic+biology+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">The all-E coli TXTL toolbox 3.0: new capabilities of a cell-free synthetic biology platform.</a> Synth Biol. 6 (1), 1-8 (2021).</li>
<li>Romantseva, E., Alperovich, N., Ross, D., Lund, S. P., Strychalski, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+DNA+template+preparation+on+variability+in+cell-free+protein+production%5BTitle%5D)+AND+%22Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Effects of DNA template preparation on variability in cell-free protein production.</a> Synth Biol. 7 (1), 1-17 (2022).</li>
<li>Thornton, E. L., Boyle, J. T., Laohakunakorn, N., Regan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis+as+a+method+to+rapidly+screen+machine+learning-generated+protease+variants%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis as a method to rapidly screen machine learning-generated protease variants.</a> ACS Synth Biol. 14 (5), 1710-1718 (2025).</li>
<li>Laohakunakorn, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLaohakunakorn%2C+N+%22Cell-free+3PGA+energy+solution%22">Cell-free 3PGA energy solution</a>. , Protocols.io. (2020).</li>
<li>Kalpaxis, D. L., Theocharis, D. A., Coutsogeorgopoulos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+studies+on+ribosomal+peptidyltransferase%3A+the+behaviour+of+the+inhibitor+blasticidin+S%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Biochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic studies on ribosomal peptidyltransferase: the behaviour of the inhibitor blasticidin S.</a> Eur J Biochem. 154 (2), 267-271 (1986).</li>
<li>Blaha, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+functional+ribosomal+complexes+and+effect+of+buffer+conditions+on+tRNA+positions+observed+by+cryoelectron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of functional ribosomal complexes and effect of buffer conditions on tRNA positions observed by cryoelectron microscopy.</a> Methods Enzymol. 317, 292-309 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>유튜브 2회</td><td>시그마</td><td>Y2377-250G</td><td></td></tr><tr><td>아미노산</td><td>시그마</td><td>LAA21-1KT</td><td></td></tr><tr><td>암모늄 아세테이트 RNAse 프리</td><td>써모 사이언티픽</td><td>AM9070G</td><td></td></tr><tr><td>염화암모늄</td><td>시그마</td><td>09718-1KG</td><td></td></tr><tr><td>암피실린</td><td>시그마</td><td>A8351-5G</td><td></td></tr><tr><td>BL21(DE3) 건강한 대장균</td><td>NEB</td><td>C2527H</td><td></td></tr><tr><td>병, 원심분리기 (날겐)</td><td>써모 사이언티픽</td><td>3120-9500</td><td>폴리프로필렌 공중합자 병</td></tr><tr><td>병, 유리병(듀란) 250 mL, 500 mL, 1 L, 2 L</td><td>VWR</td><td>215-1593, 215-1594, 215-1595, 215-1596</td><td></td></tr><tr><td>브래드포드 분석, 퀵 스타트 1x 염료 시약</td><td>바이오-래드</td><td>5000205</td><td></td></tr><tr><td>원심 분리기</td><td>써모 사이언티픽</td><td>헤라우스 메가퓨지 16R</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기, 마이크로</td><td>에펜도르프</td><td>5424R&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>크로마토그래피 컬럼</td><td>바이오-래드</td><td>7321010</td><td></td></tr><tr><td>크레아틴 인산염</td><td>시그마</td><td>27920</td><td></td></tr><tr><td>큐벳, 세미마이크로 1.6 mL</td><td>피셔브랜드</td><td>FB55147</td><td></td></tr><tr><td>이나트륨 수소 정형인산 이수화물</td><td>피셔 케미컬</td><td>S/4450/60</td><td></td></tr><tr><td>투석 카세트, 슬라이드-A-라이저 G3, 2 kDa MWCO, 15 mL</td><td>써모 사이언티픽</td><td>A52962</td><td></td></tr><tr><td>이칼륨 수소 정인산 무수화물</td><td>피셔 케미컬</td><td>P/5240/60</td><td></td></tr><tr><td>DTT 무중량</td><td>써모 사이언티픽</td><td>A39255</td><td></td></tr><tr><td>필터 유닛, 원심 3kDa MWCO 아미콘 울트라 15</td><td>EMD 밀리포어</td><td>UFC900324</td><td></td></tr><tr><td>플라스크, 500 mL</td><td>VWR</td><td>214-1133</td><td></td></tr><tr><td>플라스크, 배플 2.5 L&nbsp;</td><td>튀네어</td><td>SS-5013</td><td></td></tr><tr><td>폴리닉산</td><td>시그마</td><td>F7878-100MG</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마</td><td>G5516-1L</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>피셔브랜드</td><td>H/1200/PB17</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 완충액, 1 M 용액 pH 7.3</td><td>써모 사이언티픽</td><td>BP299</td><td></td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>시그마</td><td>I2399-500G</td><td></td></tr><tr><td>부 화기</td><td>에펜도르프</td><td>뉴브런즈윅 이노바 & 42</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>써모 사이언티픽</td><td>R0392</td><td></td></tr><tr><td>KOH 펠릿</td><td>써모 사이언티픽</td><td>P1767-500G</td><td></td></tr><tr><td>L-글루탐산 헤미마그네슘 사수화물 염</td><td>시그마</td><td>49605-250G</td><td></td></tr><tr><td>L-글루탐산 단칼륨 염 일수화물</td><td>시그마</td><td>49601-500G</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 아세테이트 사수화물</td><td>시그마</td><td>M5661-50G</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘</td><td>플루카</td><td>63020-1L</td><td></td></tr><tr><td>자기 교반 장치</td><td>스튜어트</td><td>US152</td><td></td></tr><tr><td>나노드롭</td><td>써모 사이언티픽</td><td>나노드롭 2000</td><td></td></tr><tr><td>NEBExpress Ni-NTA 매그 비즈</td><td>NEB</td><td>S1423S</td><td></td></tr><tr><td>파라필름</td><td>시그마</td><td>P7543-1EA</td><td></td></tr><tr><td>피펫, 멀티채널 Eppendorf Research Plus 30-300 및 마이크로; L</td><td>에펜도르프</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>판 리더용 판 접착 씰</td><td>엑셀사이언티컬</td><td>STR-SEAL-PLT (무균)</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 통기성 실링</td><td>스타랩</td><td>E2796-3005</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 포일 씰</td><td>엑셀사이언티컬</td><td>FCS-25</td><td></td></tr><tr><td>번호판 인식기</td><td>바이오텍</td><td>시너지 H1</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 셰이커</td><td>올셩</td><td>MBI100-4A</td><td></td></tr><tr><td>플레이트, 384 우물</td><td>써모 사이언티픽</td><td>242764</td><td></td></tr><tr><td>플레이트, 96 깊이 우물 1 mL</td><td>써모 사이언티픽</td><td>736-0601</td><td></td></tr><tr><td>플레이트, 96 깊이 웰 2 mL</td><td>사르스테트</td><td>82.1972.002</td><td></td></tr><tr><td>플레이트, 96웰 PCR</td><td>사르스테트</td><td>721,978</td><td></td></tr><tr><td>플레이트, 광학 96 웰</td><td>써모 사이언티픽</td><td>10057581</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨</td><td>시그마</td><td>P5405-500G</td><td></td></tr><tr><td>이수소 정인산 칼륨</td><td>피셔 케미컬</td><td>P/4800/53</td><td></td></tr><tr><td>단백질 추출(버그버스터) 시약</td><td>EMD 밀리포어</td><td>70584-3</td><td></td></tr><tr><td>단백질 정제 수지(cOmplete)</td><td>로슈</td><td>5893682001</td><td></td></tr><tr><td>로티세리 셰이커</td><td>스타랩</td><td>RM-멀티 1</td><td></td></tr><tr><td>소금</td><td>피셔 케미컬</td><td>S/3105/70</td><td></td></tr><tr><td>초음파 프로브, 피셔브랜드 15-50 mL</td><td>써모 사이언티픽</td><td>12931181</td><td></td></tr><tr><td>소닉에이터</td><td>피셔 사이언티브</td><td>FB120</td><td></td></tr><tr><td>분광광도계</td><td>젠웨이</td><td>제노바 플러스</td><td></td></tr><tr><td>스페르미딘</td><td>시그마</td><td>S2626-1G</td><td></td></tr><tr><td>TCEP 0.5 M</td><td>수펠코</td><td>646547</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Fisher NTP, Tris 완충</td><td>써모 사이언티픽</td><td>R1481</td><td></td></tr><tr><td>대장균 MRE600에서 추출한 tRNA</td><td>로슈</td><td>10109541001</td><td></td></tr><tr><td>트립톤</td><td>포미디어</td><td>TRP02</td><td></td></tr><tr><td>튜브, 0.2 mL PCR 등급</td><td>사르스테트</td><td>72,737,002</td><td></td></tr><tr><td>튜브, 비주 스테릴린 7 mL 폴리스티렌</td><td>써모 사이언티픽</td><td>129A</td><td></td></tr><tr><td>관, 원뿔형 (팔콘) 15 mL</td><td>사르스테트</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>관, 원뿔형 (팔콘) 50 mL</td><td>사르스테트</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>튜브, 마이크로 원심분리기 (에펜도르프) 1.5 mL</td><td>사르스테트</td><td>72.690.001</td><td></td></tr><tr><td>튜브, 마이크로 원심분리기(Eppendorf) 2 mL</td><td>사르스테트</td><td>72.695.700</td><td></td></tr><tr><td>튜브, S100 원심분리 및 nbsp;</td><td>벡맨-쿨터</td><td>355619</td><td></td></tr><tr><td>튜브, S30 원심분리 &nbsp;</td><td>써모 사이언티픽</td><td>3118-0050</td><td></td></tr><tr><td>초원심분리기</td><td>벡맨-쿨터</td><td>옵티마 XPN-100</td><td></td></tr><tr><td>초원심분리기 로터</td><td>벡맨-쿨터</td><td>70Ti 고정각 로터</td><td></td></tr><tr><td>울트라퓨어 DNase/RNase 프리 증류수</td><td>써모 사이언티픽</td><td>10977049</td><td></td></tr><tr><td>소용돌이</td><td>VWR</td><td>444-2791</td><td></td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>옥소이드</td><td>LP0021T</td><td></td></tr></tbody></table>

재현 가능한 무세포 단백질 합성을 위한 onepot pure 및 조류 리보솜 생산 개선

Refinement of OnePot PURE and Crude Ribosome Production for Reproducible Cell-free Protein Synthesis

재현 가능한 무세포 단백질 합성을 위한 OnePot PURE 및 조류 리보솜 생산 개선

Recent advances have enabled the Protein synthesis Using Recombinant Elements (PURE) cell-free system to be produced in individual laboratories ...

우리는 OnePOT PURE 시스템과 원리보솜 준비제를 개선하여 재현성과 접근성을 향상시켰고, 이를 통해 더 많은 연구실이 합성생물학 연구를 위한 견고한 세포 없는 시스템을 구축하고 문제 해결할 수 있도록 했습니다. 실험적 과제로는 배치별 변동성, 발현 벡터 불안정성, 느린 성장 균주 등이 있으며, 이들은 모두 자체 PURE 시스템 준비에서 재현성과 일관된 성능을 저해합니다. 우리는 균주 성장, 접종, 글리세롤 농도를 세밀하게 조절하면 OnePOT PURE 및 리보솜 제제의 재현성과 수율이 사용자 및 생물학적 복제체 간에 크게 향상된다는 것을 확인했습니다.우리는 PURE 및 리보솜을 사내에서 재현 가능하고 접근 가능한 프로토콜이 부족한 문제를 해결하여, 합성생물학 연구를 위한 자기 저항성 도입을 위한 기술적 장벽을 극복할 수 있도록 지원합니다. 저희 프로토콜은 성장 조건과 글리세롤 사용을 표준화하여 재현성과 유연성을 높이고, 초원심분리만으로 리보솜 준비를 간소화하여 더 복잡하거나 비용이 많이 드는 정제 방법을 피합니다. 우선, 얼음 위에 얼린 BL21 세포 펠릿을 해동한 후 깨끗한 원뿔형 튜브에 리보솜 버퍼 A 50밀리리터를 넣으세요.피펫을 사용해 원뿔 튜브에서 리보솜 버퍼 A 100마이크로리터를 추출해 무중량 DTT 바이알에 첨가합니다. DTT 펠릿이 완전히 녹을 때까지 부드럽게 흡입하여 0.5몰 DTT 스톡 용액을 만듭니다. 그 후 0.5몰 DTT 스톡 용액 100마이크로리터를 50밀리리터 원뿔 튜브에 피펫 넣고 튜브를 얼음 위에 올려놓습니다.소용돌이 믹서를 사용해 녹은 세포 펠릿을 리보솜 완충 A에 DTT와 함께 재현탁하여 세포 펠릿 1그램당 2밀리리터의 비율로 재현탁합니다. 재현탁된 샘플을 원뿔형 튜브에 합치고 총 슬러리 부피가 10밀리리터인지 확인합니다. 이제 10밀리리터 슬러리를 라벨이 붙은 원뿔 튜브 안에서 각각 5밀리리터 샘플 두 개로 균등하게 나누어 주세요.원뿔형 튜브를 스탠드에 고정한 후, 얼음물에 냉각된 초음파 프로브를 사용해 세포를 용해합니다. 초음파 검사를 30% 진폭으로 설정하고, 20초 켜고 20초 꺼서 총 10 사이클을 사용하세요. 초음파 처리 후에는 리보솜 버퍼 A와 DTT를 사용해 각 용해된 샘플을 25밀리리터로 보충하고 잠시 소용돌이를 섞어 혼합합니다.25밀리리터 용해된 샘플을 두 개의 미리 냉각된 S30 원심분리관에 옮깁니다. 튜브를 원심분리기에 넣고 30,000G로 4도 섭

refinement-onepot-pure-crude-ribosome-production-for-reproducible

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

공동 정화 nucleases와 프로 테아제에 의해 전통적인 방법으로 정화 진핵세포 리보솜의 준비 오염 부정 스트림 생화학 및 구조 분석에 영향을 미칩니다. 신속하고 간단한 색층 정화 방법은 모델 시스템으로 효모 변이를 사용하여이 문제를 해결하는 데 사용됩니다.

높은 활성 효모 변이의 색층 정화

이 프로토콜 세부 단계, 비용, 그리고 대장균을 생성 하는 데 필요한 장비-셀 추출 물 및 단백질 합성 반응을 시험관에서 4 일 안에 구현. 광범위 한 응용 프로그램에 대 한이 플랫폼의 유연한 특성을 활용 하 여 우리는 적응 되 고 최적화 될 수 있는 반응 조건 논의.

대장균-셀 무료 단백질 합성 기반: 강력 하 고 유연 하며 액세스할 수 있는 플랫폼 기술에 대 한 프로토콜

이 프로토콜은 RNA 및 단백질 생산 합성 세포의 상향식 준비를 위한 방법, 물질, 장비 및 단계를 설명합니다. 합성 세포의 내부 수성 구획은 지질 이중층(즉, 안정한 리포솜) 내에 캡슐화된 S30 세균 용해물을 함유하고, 수중 오일 에멀젼 전달 방법을 사용하였다.

세포가 없는 세균 추출물, 리포좀 및 에멀젼 전달을 사용하여 합성 세포를 생산하는 단백질 을 준비합니다.

표준 실험실 장비를 사용하여 재조합 PURE 세포 없는 TX-TL 시스템을 생산하는 빠르고 비용 효율적인 방법을 제시합니다.

원팟 퓨어 셀 프리 시스템

연구 결과는 복제하거나 살아있는 세포를 사용하지 않고 합성 유전자 단편에서 단백질 검열 캠페인을 위한 DNA의 큰 (μg-mg) 양을 만들기 위한 프로토콜을 기술합니다. 최소 템플릿은 효소적으로 소화되고 원형화된 다음, 이더스말 롤링 서클 증폭을 사용하여 증폭됩니다. 세포 없는 발현 반응은 불정제 된 제품으로 수행 될 수있다.

세포 없는 시스템을 사용하여 단백질 프로토타이핑을 위한 최소선형 템플릿의 증폭을 위한 신속하고 효소적인 방법

이 연구는 에스케리치아 콜라이 (E. coli )에서 세포 추출물을 제조한 후 24 시간 이내에 무세포 단백질 합성 (CFPS) 반응을 설명합니다. 무세포 자동 유도 (CFAI) 프로토콜에 대한 설명은 연구자의 감독을 줄이고 얻은 세포 추출물의 양을 늘리기 위해 개선 된 내용을 자세히 설명합니다.

무세포 자동 유도 워크플로우를 사용하여 24시간 이내에 세포에서 무세포 단백질 합성까지

이 프로토콜은 합성 세포를 구성하는 데 사용되는 CFPS(Cell-Free Protein Synthesis) 시스템을 설명합니다. 다양한 마이크로 컴파트먼트에서 대표적인 결과를 제공하는 주요 단계를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜은 합성 세포 커뮤니티의 다양한 실험실에 대한 모범 사례를 수립하여 합성 세포 개발의 진전을 촉진하는 것을 목표로 합니다.

합성 세포 구축을 위한 Cell-Free 단백질 합성 시스템

monolayer 보호 클러스터 (MPCs)로 알려진 Alkanethiolate 안정화 황금 colloids은 합성 특징과 같은 간단한 산화 환원 단백질의 단백질 monolayer의 전기에 대한 흡착 인터페이스로 박막에...

Monolayer의 합성, 조립, 그리고 특성화는 단백질 Monolayer의 전기에 대한 골드 Nanoparticle 필름을 보호

우리는 분할 테인 - 매개 단백질 겔의 합성을 제시한다. 이러한 하이드로 겔의 빌딩 블록은 각각 분할 테인의 가교제 및 ​​반 역할 삼량 단백질의 서브 유닛을 포함하는 단백질이 공중 합체이다. 두 단백질 공중 합체의 혼합은 하이드로 겔로 자기 조립 폴리펩티드 단위를 산출 테인 트랜스 - 스 플라이 싱 반응을 트리거합니다. 하이드로 겔은 높은 산도와 온도 안정, 유기 솔벤트와 함께, 쉽게 기능을 구형 단백질을 포함하고 있습니다.

테인 매개 인공 단백질 히드로 겔의 합성

밀봉 가능한 펨토리터 부피 반응 챔버가 있는 미세 가공 장치에 대해 설명합니다. 이 보고서에는 유전자 발현에서 군집 및 감금의 역할을 이해하기 위해 이러한 챔버 내에서 cell-free protein synthesis 반응물을 밀봉하는 프로토콜이 포함되어 있습니다.

무 세포 생물학 밀봉 Femtoliter 상공 회의소 배열

배우세요 OnePOT PURE 시스템과 조류 리보솜 준비 프로토콜을 개선하여 무세포 단백질 합성의 재현성과 접근성을 높이는 방법을. 균주 성장과 글리세롤 농도를 조절하여 배치 간 변동성을 최소화하고 다양한 연구실에서 합성생물학 연구를 수행할 수 있도록 지원합니다.

재현 가능한 무세포 단백질 합성을 위한 OnePot PURE 및 조류 리보솜 생산 개선

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