Name: 저밀도 지단백질의 존재 하에서 호중구 세포외 트랩을 이용한 혈관 내피 세포의 자극 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 배우세요 저밀도 지단백질과 호중구 세포외 트랩을 이용하여 혈관 내피 세포의 염증 반응을 분석하는 방법을. 이 기법은 심혈관 질환에서 NETs와 지단백질의 상호작용 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.1% 폴리-L-라이신</td><td>시그마알드리치</td><td>P8920-100ML</td><td></td></tr><tr><td>접시 10cm</td><td>코 닝</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>12웰 조직 배양 플레이트</td><td>송골매</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>젤라틴 2%</td><td>시그마알드리치</td><td>지1393-20ML</td><td></td></tr><tr><td>4PC 튜브</td><td>히맥</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>올트랜스 레티노산</td><td>와코</td><td>188-01113</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>셀루로스 투석 튜브</td><td>미스미 그룹 주식회사</td><td>0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>도진도</td><td>345-01865</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>내피 세포 성장 배지 2 키트</td><td>프로모셀</td><td>C-22111</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 세럼</td><td>깁코</td><td>10270-106</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>헤파린 나트륨 (5,000 단위 / 5 mL)</td><td>모치다 제약 주식회사</td><td></td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>고속 냉장 원심분리기</td><td>토미</td><td>SRX-201 시리즈</td><td>가속: 9, 감속: 7</td></tr><tr><td>인간 대동맥 내피 세포</td><td>론자</td><td>CC-2535</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>와코</td><td>168-03475</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>KEYENCE 현미경 소프트웨어</td><td>키엔스</td><td>BZ-II 분석기</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 초원심분리기</td><td>히맥</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>현미경 검사 법</td><td>올림푸스</td><td>CK40</td><td></td></tr><tr><td>현미경 검사 법</td><td>키엔스</td><td>BZ-9000 시리즈</td><td>타임랩스 이미징용(옵션)</td></tr><tr><td>현미경 카메라</td><td>니콘</td><td>DS-파이3</td><td></td></tr><tr><td>현미경 카메라 소프트웨어</td><td>니콘</td><td>DS-L4 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>깁코</td><td>15140-122 100ML</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(&times; 10)</td><td></td><td></td><td>NaH2PO4middot 2.6 g을 용해; 2 H2O, Na2HPO4&middot 29 g; 증류수에 12H2O, NaCl 80g 및 KCl 2.0g을 1L의 부피로 조절합니다. (모든 공급업체로 대체 가능)</td></tr><tr><td>PMA(포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트)</td><td>와코</td><td>162-23591</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>시약팩</td><td>론자</td><td>CC-5034 시리즈</td><td>(CC-5022: HEPES 완충 식염수, CC-5012: 트립신/EDTA, CC-5002: 트립신 중화 용액)&nbsp;</td></tr><tr><td>회전자</td><td>히맥</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 (페놀 레드 포함)</td><td>와코</td><td>189-02025</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>RPMI-1640 (페놀 레드 없음)</td><td>와코</td><td>186-02155</td><td>모든 공급업체로 대체 가능</td></tr><tr><td>T-25 플라스크</td><td>코 닝</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

저밀도 지단백질의 존재 하에서 호중구 세포외 트랩을 이용한 혈관 내피 세포의 자극

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

킬로미크론을 제거한 후 순차적 초원심분리를 통해 인간 혈장에서 VLDL 분획을 제거한 후, 인간 혈장을 KBr 용액과 혼합하여 밀도를 d = 1.063으로 조정했습니다. 이 단계에서는 남은 침전제가 용액에 완전히 용해되지 않았고, 기포를 생성하는 심한 혼합을 피하여 LDL을 그대로 유지했습니다. 초원심분리 후, LDL은 황색-주황색9 (그림 1)으로 최상층에서 육안으로 평가되었으며, 이는 LDL을 바로 아래에 있는 무색 용액과 구별했습니다. 일반적으로, PBS/EDTA에 대해 수집된 LDL 분획의 투석 후, 45-50mL의 인간 혈액에서 약 23-25mL의 혈장을 수집하여 약 4mg/mL의 단백질과 함께 4.3mL의 LDL 분획을 산출할 수 있습니다.
2μM AtRA로 HL-60 세포를 처리하면 세포 크기가 감소한 호중구 유사 세포(dHL-60)로 세포가 분화되었습니다...

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

stimulation-vascular-endothelial-cells-using-neutrophil-extracellular

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

이 비디오는 호중구 세포 외 트랩(NET)을 생성하고 분리하는 시험관 기술을 보여줍니다. 호중구는 말초 혈액에서 분리되고 phorbol myristate acetate (PMA)로 자극되어 NET을 생성합니다. 배양 과정에서 호중구는 세포 사멸 과정(NETosis)을 거쳐 과립 세포질 단백질과 혼합된 응축된 염색질로 구성된 NET을 방출합니다.

인간 호중구 세포 외 트랩을 생성하는 In vitro 기술

이 비디오는 항호중구 세포질 항체가 포함된 환자 혈청을 사용하여 사전 라벨링된 호중구에서 호중구 세포외 트랩 또는 NET의 유도 및 시각화를 보여줍니다. 또한 불침투성 DNA 염료와 형광 현미경을 사용하면 NET을 시각화할 수 있습니다.

Induction and Visualization of Neutrophil Extracellular Traps in Pre-Labeled Neutrophils

이 동영상은 TNF-알파, PMA 및 HOCL과 같은 다양한 염증 자극을 사용하여 인간 단핵구에서 파생된 대식세포의 대식세포 외 트랩(MET)의 체외 자극을 보여줍니다. 이 비디오는 또한 시각화를 위한 MET의 SYTOX 염료 염색 방법을 보여줍니다.

In Vitro Stimulation and Visualization of Macrophage Extracellular Traps

감염의 사이트에서 활성화 된 내피 세포에 백혈구 준수는 호스트의 염증 반응의 중요한 구성 요소입니다. 수 있습니다 호중구 결합 분석은이 보고서에...

정량<em&gt; 체외</em정적 조건에서 활성화 된 기본 인간의 미세 혈관 내피 세포에 호중구 부착을 측정하는&gt; 분석

다음 프로토콜에서 우리는 쉽게 사용할 시약을 사용하여 인간의 전체 혈액에서 호중구 세포 외 트랩 (그물을) 분리하는 아주 간단한 방법을 설명합니다. 우리는 그 다음 절연 그물 암세포 밀착성 시험 관내 분석에서 사용하는 방법을 보여준다.

단순화 된 인간 호중구 세포 외 트랩 (그물)의 분리 및 처리

지질은 세포 기능에 중요한 역할을하는 것으로 알려져있다. 여기, 우리는 호중구 세포 트랩 형성의 기본 메커니즘의 더 나은 이해를 얻기 위해 HPTLC 및 HPLC를 모두 사용하여, 콜레스테롤 수준에 중점을두고, 호중구의 지질 구성을 결정하는 방법을 설명합니다.

방법은 지질 호중구의 변경 및 호중구 세포 외 트랩의 후속 형성을 연구하기 위해

여기, 우리는 인간의 저밀도 호 중구 (LDN), 수술 후 복 막 게 액체에서 회복 대규모 호 중구 extracellular 함정 (그물)를 생산 하 고 이후에 성장 하는 무료 종양 세포를 효율적으로 트랩 방법을 제시.

호 중구 Extracellular 함정 밀도가 낮은 호 중구에 의해 생성 된 종양 세포 성장 및 첨부 파일 중재 하십시오 복 막 게 액체에서 얻은

여기에 제시된 프로토콜은 현미경 및 형광 염색을 사용하여 살아있는 세포 배양에서 대식세포 외 트랩(MET) 생산을 검출하는 프로토콜이다. 이 프로토콜은 면역형광 염색에 의해 특정 MET 단백질 마커를 검사하기 위해 더 확장될 수 있다.

분화 한 인간 단핵구 유래 대식세포에서 세포 외 트랩 방출의 시험관 내 자극 및 시각화

여기에 제시된 것은 시험관 내 호중구 세포 외 트랩 (NET)의 유도 및 분석을위한 프로토콜입니다. DNA, 카텔리시딘(LL37) 및 효소 활성의 정량화는 유사한 통제 조건에서 미생물 및 화학적 자극에 의해 유도된 NET의 구성 및 형태의 가변성을 보여주는 데이터를 산출했습니다.

미생물 및 화학적 자극에 의해 유도 된 호중구 세포 외 트랩의 형태 학적 및 조성 분석

이 정의된 프로토콜은 in vitro에서 인간 호중구 세포외 트랩(NET) 방출을 시각화하고 정량화하기 위한 실시간 고처리량 현미경 접근 방식을 설명합니다. 재현 가능한 방법을 통해 뚜렷한 NETosis 유도 인자를 자극 시 NET 방출의 특성과 동역학을 조사할 수 있으며 NETosis 길항제의 약리학을 평가할 수 있습니다.

Human Neutrophil Extracellular Trap release의 실시간 고처리량 현미경 정량화 및 길항제의 약리학 평가

저밀도 호중구(LDN)는 여러 질병에서 크게 증가합니다. LDN은 일반적으로 세포 분류를 통해 분리됩니다. 순수하고 실행 가능한 LDN을 얻는 실용적인 방법을 제시합니다. 말초 혈액의 밀도 구배 원심분리 후 세포를 자성 마이크로비드와 함께 배양한 다음 LDN을 자기 컬럼을 통해 분리합니다.

저밀도 호중구의 효율적인 정제를 위한 신속한 자기-마이크로비드 방법

배우세요 저밀도 지단백질과 호중구 세포외 트랩을 이용하여 혈관 내피 세포의 염증 반응을 분석하는 방법을. 이 기법은 심혈관 질환에서 NETs와 지단백질의 상호작용 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

저밀도 지단백질의 존재 하에서 호중구 세포외 트랩을 이용한 혈관 내피 세포의 자극

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