Name: 다점 티오프플라빈 T 형광을 이용한 돌연변이 P53 V157F 유방암 세포에서 집단 발생 촉진 행동 검출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T14:57:00.000+00:00
Duration: 4 min 56 s
Description: 학습하세요 다점 티오플라빈 T 형광 측정을 이용한 돌연변이 p53 V157F 유방암 세포에서 단백질 응집 검출 방법입니다. 이 기술은 정확한 집단 발생 측정과 암 연구에 활용됩니다.

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<ol><li>Binayke, A., Mishra, S., Suman, P., Das, S., Chander, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Awakening+the+%26%2334%3Bguardian+of+genome%26%2334%3B%3A+Reactivation+of+mutant+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Chemother+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Awakening the &#34;guardian of genome&#34;: Reactivation of mutant p53.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 83 (1), 1-15 (2019).</li>
<li>Chen, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+affordable+method+to+create+nonsense+mutation+clones+of+p53+for+studying+the+premature+termination+codon+readthrough+activity+of+ptc124%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">A simple and affordable method to create nonsense mutation clones of p53 for studying the premature termination codon readthrough activity of ptc124.</a> Biomedicines. 11 (5), 1310(2023).</li>
<li>Rangel, L. P., Costa, D. C., Vieira, T. C., Silva, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aggregation+of+mutant+p53+produces+prion-like+properties+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prion%22%5BJournal%5D)">The aggregation of mutant p53 produces prion-like properties in cancer.</a> Prion. 8 (1), 75-84 (2014).</li>
<li>Kim, S., An, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+p53+isoforms+and+aggregations+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine+%28Baltimore%29%22%5BJournal%5D)">Role of p53 isoforms and aggregations in cancer.</a> Medicine (Baltimore). 95 (26), e3993(2016).</li>
<li>Zhou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain-of-function+mutant+p53+promotes+cell+growth+and+cancer+cell+metabolism+via+inhibition+of+ampk+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Gain-of-function mutant p53 promotes cell growth and cancer cell metabolism via inhibition of ampk activation.</a> Mol Cell. 54 (6), 960-974 (2014).</li>
<li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain-of-function+mutant+p53+in+cancer+progression+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Gain-of-function mutant p53 in cancer progression and therapy.</a> J Mol Cell Biol. 12 (9), 674-687 (2020).</li>
<li>De Oliveira, G. aP., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+status+of+p53+oligomeric+and+aggregation+states+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">The status of p53 oligomeric and aggregation states in cancer.</a> Biomolecules. 10 (4), 548(2020).</li>
<li>Wang, H., Guo, M., Wei, H., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+p53+pathways%3A+Mechanisms%2C+structures%2C+and+advances+in+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting p53 pathways: Mechanisms, structures, and advances in therapy.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 92(2023).</li>
<li>Sulatskaya, A. I., Kuznetsova, I. M., Turoverov, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+thioflavin+t+with+amyloid+fibrils%3A+Stoichiometry+and+affinity+of+dye+binding%2C+absorption+spectra+of+bound+dye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Interaction of thioflavin t with amyloid fibrils: Stoichiometry and affinity of dye binding, absorption spectra of bound dye.</a> J Phys Chem B. 115 (39), 11519-11524 (2011).</li>
<li>Cai, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nampt+inhibitor+and+p73+activator+represses+p53+r175h+mutated+HNSCC+cell+proliferation+in+a+synergistic+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Nampt inhibitor and p73 activator represses p53 r175h mutated HNSCC cell proliferation in a synergistic manner.</a> Biomolecules. 12 (3), 438(2022).</li>
<li>Cai, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorophyllides+repress+gain-of-function+p53+mutated+hnscc+cell+proliferation+via+activation+of+p73+and+repression+of+p53+aggregation+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Basis+Dis%22%5BJournal%5D)">Chlorophyllides repress gain-of-function p53 mutated hnscc cell proliferation via activation of p73 and repression of p53 aggregation in vitro and in vivo.</a> Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 1871 (3), 167662(2025).</li>
<li>Wu, K. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+activity+of+hsp70+inhibitor+and+doxorubicin+in+gain-of-function+mutated+p53+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer activity of hsp70 inhibitor and doxorubicin in gain-of-function mutated p53 breast cancer cells.</a> Biomedicines. 13 (5), 1034(2025).</li>
<li>Nasir, I., Linse, S., Cabaleiro-Lago, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+filter-trap+assay+for+amyloid+fibril+formation+kinetics+in+complex+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fluorescent filter-trap assay for amyloid fibril formation kinetics in complex solutions.</a> ACS Chem Neurosci. 6 (8), 1436-1444 (2015).</li>
<li>Goldsbury, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amyloid+structure+and+assembly%3A+Insights+from+scanning+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Struct+Biol%22%5BJournal%5D)">Amyloid structure and assembly: Insights from scanning transmission electron microscopy.</a> J Struct Biol. 173 (1), 1-13 (2011).</li>
<li>Kayed, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibril+specific%2C+conformation+dependent+antibodies+recognize+a+generic+epitope+common+to+amyloid+fibrils+and+fibrillar+oligomers+that+is+absent+in+prefibrillar+oligomers%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Fibril specific, conformation dependent antibodies recognize a generic epitope common to amyloid fibrils and fibrillar oligomers that is absent in prefibrillar oligomers.</a> Mol Neurodegener. 2, 18(2007).</li>
<li>Xue, C., Lin, T. Y., Chang, D., Guo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioflavin+t+as+an+amyloid+dye%3A+Fibril+quantification%2C+optimal+concentration+and+effect+on+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22R+Soc+Open+Sci%22%5BJournal%5D)">Thioflavin t as an amyloid dye: Fibril quantification, optimal concentration and effect on aggregation.</a> R Soc Open Sci. 4 (1), 160696(2017).</li>
<li>Biancalana, M., Koide, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanism+of+thioflavin-t+binding+to+amyloid+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanism of thioflavin-t binding to amyloid fibrils.</a> Biochim Biophys Acta. 1804 (7), 1405-1412 (2010).</li>
<li>Yang-Hartwich, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+protein+aggregation+promotes+platinum+resistance+in+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">P53 protein aggregation promotes platinum resistance in ovarian cancer.</a> Oncogene. 34 (27), 3605-3616 (2015).</li>
<li>Lei, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+allosteric+mechanisms+of+the+lung-enriched+p53+mutants+v157f+and+r158l%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Insights into allosteric mechanisms of the lung-enriched p53 mutants v157f and r158l.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), 10100(2022).</li>
<li>Reichard, A., Asosingh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+practices+for+preparing+a+single+cell+suspension+from+solid+tissues+for+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Best practices for preparing a single cell suspension from solid tissues for flow cytometry.</a> Cytometry A. 95 (2), 219-226 (2019).</li>
<li>Mansoury, M., Hamed, M., Karmustaji, R., Al Hannan, F., Safrany, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+edge+effect%3A+A+global+problem.+The+trouble+with+culturing+cells+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">The edge effect: A global problem. The trouble with culturing cells in 96-well plates.</a> Biochem Biophys Rep. 26, 100987(2021).</li>
<li>Yoshimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinguishing+crystal-like+amyloid+fibrils+and+glass-like+amorphous+aggregates+from+their+kinetics+of+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinguishing crystal-like amyloid fibrils and glass-like amorphous aggregates from their kinetics of formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (36), 14446-14451 (2012).</li>
<li>Yang, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesoscopic+protein-rich+clusters+host+the+nucleation+of+mutant+p53+amyloid+fibrils%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Mesoscopic protein-rich clusters host the nucleation of mutant p53 amyloid fibrils.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (10), e2015618118(2021).</li>
<li>Hackl, E. V., Darkwah, J., Smith, G., Ermolina, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+acidic+and+basic+ph+on+thioflavin+t+absorbance+and+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Effect of acidic and basic ph on thioflavin t absorbance and fluorescence.</a> Eur Biophys J. 44 (4), 249-261 (2015).</li>
<li>Bom, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+p53+core+domain+is+a+molten+globule+at+low+ph%3A+Functional+implications+of+a+partially+unfolded+structure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The p53 core domain is a molten globule at low ph: Functional implications of a partially unfolded structure.</a> J Biol Chem. 285 (4), 2857-2866 (2010).</li>
<li>Ano Bom, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+aggregates+into+prion-like+amyloid+oligomers+and+fibrils%3A+Implications+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 aggregates into prion-like amyloid oligomers and fibrils: Implications for cancer.</a> J Biol Chem. 287 (33), 28152-28162 (2012).</li>
<li>Muller, P., Ceskova, P., Vojtesek, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hsp90+is+essential+for+restoring+cellular+functions+of+temperature-sensitive+p53+mutant+protein+but+not+for+stabilization+and+activation+of+wild-type+p53%3A+Implications+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Hsp90 is essential for restoring cellular functions of temperature-sensitive p53 mutant protein but not for stabilization and activation of wild-type p53: Implications for cancer therapy.</a> J Biol Chem. 280 (8), 6682-6691 (2005).</li>
<li>Arsic, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%94133p53%CE%B2+isoform+pro-invasive+activity+is+regulated+through+an+aggregation-dependent+mechanism+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Δ133p53β isoform pro-invasive activity is regulated through an aggregation-dependent mechanism in cancer cells.</a> Nat Commun. 12 (1), 5463(2021).</li>
<li>Zhao, L., Punga, T., Sanyal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delta133p53alpha+and+delta160p53alpha+isoforms+of+the+tumor+suppressor+protein+p53+exert+dominant-negative+effect+primarily+by+co-aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Delta133p53alpha and delta160p53alpha isoforms of the tumor suppressor protein p53 exert dominant-negative effect primarily by co-aggregation.</a> Elife. 14, RP106469(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96웰 배양판</td><td>간단히</td><td>PC396-0100</td><td></td></tr><tr><td>카운터 슬라이드</td><td>인비트로젠</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>카운티스 II FL 자동 셀 카운터</td><td>서모 피셔 사이언티픽 &nbsp;</td><td>AMQAF1000</td><td></td></tr><tr><td>dPBS</td><td>간단히</td><td>CC704-0500</td><td></td></tr><tr><td>에펜도르프 튜브</td><td>간단히</td><td>PC101-5000</td><td></td></tr><tr><td>호에슈트 33342</td><td>AAT 바이오퀘스트</td><td>17530</td><td></td></tr><tr><td>스펙트라맥스 iD3</td><td>분자 장치</td><td>735-0391 &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>티오프플라빈 T</td><td>시그마-올드리치</td><td>T3516</td><td></td></tr><tr><td>트리판 블루</td><td>인비트로젠</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

다점 티오프플라빈 t 형광을 이용한 돌연변이 p53 v157f 유방암 세포에서 집단 발생 촉진 행동 검출

Detection of Aggregation-Prone Behavior in Mutant P53 V157F Breast Cancer Cells Using Multipoint Thioflavin T Fluorescence

다점 티오프플라빈 T 형광을 이용한 돌연변이 P53 V157F 유방암 세포에서 집단 발생 촉진 행동 검출

The tumor suppressor p53, encoded by the TP53 gene, plays a central role in maintaining genomic stability. TP53 mutations, particularly hotspot variants, ...

detection-aggregation-prone-behavior-mutant-p53-v157f-breast-cancer

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 비디오에서는 프로테아좀 억제제를 사용하여 프로테아좀 활성을 차단하여 형광 표지에 융합된 잘못 접힌 돌연변이 단백질이 유비퀴틴 의존성 프로테아솜 분해를 겪어 세포 세포질 내에 축적되는 것을 방지하는 세포 기반 단백질 응집 분석을 시연합니다. 그런 다음 단백질 응집체를 시각화하고 형광 현미경으로 정량화합니다.

Protein Aggregate Formation Assay: 프로테아솜 억제제에 의한 유도 시 배양된 세포에서 단백질 응집을 검출하고 정량화하는 방법

이 비디오는 유전자 변형 초파리 뇌에서 단백질 응집체의 이미징 및 정량화를 보여줍니다. 뇌는 장착하기 전에 고정, 세척 및 페이딩 방지제로 처리됩니다. 이미지는 컨포칼 현미경을 사용하여 캡처하고 정량화하여 돌연변이 단백질 응집체의 전달을 관찰합니다.

Imaging and Quantification of Protein Aggregates in Genetically Modified Drosophila Brains (유전자 변형 초파리 뇌에서 단백질 응집체의 이미징 및 정량화)

수정되지 hyperphosphorylated 타우 단백질 과인산 화 - 의존성 응집 빠른 반응 속도를 나타 내기 위해 두 응집 시험 관내 어 세이에 사용 하였다. 상기 분석 방법은 알츠하이머 질환의 진행의 기초를 형성하는 피 브릴 hyperphosphorylated 타우 성향을 변조 할 화합물에 대한 미래의 화면에 대해 방법을 포장.

생체 외 분석에서 집계 Hyperphosphorylated 타우 단백질을 사용하여

단백질 응집체 또는 단백질 요법 씨앗의 세포 간 이동은 신경 퇴행성 질환에서 병리학의 진행의 기초가 될 수 있습니다. 여기에서는 재조합 또는 생물학적 샘플에서 시딩 활성을 특이적이고 민감하게 검출할 수 있는 새로운 FRET 유세포 분석 분석에 대해 설명합니다.

FRET 유동 세포 계측법과 Proteopathic의 시드 활동의 민감한 검출

여기에서는 유전 독성 스트레스에 노출 된 현탁 세포 배양 물에서 ATM과 p53 사이의 직접적인 단백질 - 단백질 상호 작용을 검출하고 시각화하기 위해 현장에서의 근접 연결 분석 (PLA)이 어떻게 사용될 수 있는지 보여줍니다.

Proximity Ligation Assay를 이용한 현탁 세포 배양에서의 DNA 손상 유발 단백질 복합체의 검출 및 가시화

모 세관 기반 immunoassay 상용 플랫폼을 사용 하 여 총 단백질 준비에서 대상 단백질을 측정 하는 보여 줍니다. 또한, 노출 시간, 단백질 농도, 및 항 체 희석의 분석 결과 매개 변수 셀 문화 모델 시스템 최적화 되어 있다.

절차 및 자동화 된 모 세관 전기 이동 기반 Immunoassay 방법에 대 한 중요 한 최적화 전략

병원 성 단백질 집계 프리온 같은 속성에 포함 된 셀 사이 확산 하는 신경 퇴행 성 질환과 관련 된 아이디어를 지원 증거를 축적 합니다. 여기, 프리온 같은 집계 모델 유기 체 초파리 melanogaster의 셀 확산의 시각화를 가능 하 게 하는 방법을 설명 합니다.

초파리 Melanogaster 에서 프리온과 같은 단백질의 셀 전송 모니터링

여기 우리는 큰 규모에 높은 감도 가진 평형에서 및 솔루션에서 바인딩 선호도 결정 하기 위한 새로운 방법을 제시. 이 녹음 방송 요인 DNA 바인딩의 정량 분석을 향상 시킵니다. 메서드를 사용 하면 제어 전달 시스템에 자동화 된 형광 이방성 측정을 기반으로 합니다.

경쟁 적정 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 녹음 방송 요인 DNA 바인딩 선호도의 높은 감도 측정

여기에 제시된 효모 Saccharomyces 세레비시아에 종족을 건설하고 악용하는 네 가지 프로토콜은 인간 P53 의 일시 활성화 잠재력, 다양한 암 관련 돌연변이의 영향, 공동 발현 된 상호 작용 단백질, 및 특정 작은 분자의 효과.

인간 P53을 연구하기 위한 기능성 어세이 개발을 위한 섀시로 효모

우리는 형광 현미경 이미지의 특정 세포 구획에서 세포 체의 신속한 탐사와 정확한 분석을 위해 구축 된 자유롭게 사용할 수있는 워크플로우를 제시합니다. 이 사용자 친화적인 워크플로우는 오픈 소스 소프트웨어 Icy에서 설계되었으며 ImageJ 기능을 사용합니다. 파이프라인은 이미지 분석에 대한 지식없이 저렴합니다.

하위 구조 분석기: 형광 현미경 이미지에서 세포 체의 신속한 탐색 및 정확한 분석을 위한 사용자 친화적인 워크플로우

여기에서, 우리는 다발성 골수종 환자로부터의 골수 도말에 대한 계내 혼성화 검출에서 위상간 형광의 성공을 개선하기 위한 프로토콜을 제시한다.

다발성 골수종의 골수 얼룩의 계내 형광 혼성화

학습하세요 다점 티오플라빈 T 형광 측정을 이용한 돌연변이 p53 V157F 유방암 세포에서 단백질 응집 검출 방법입니다. 이 기술은 정확한 집단 발생 측정과 암 연구에 활용됩니다.

다점 티오프플라빈 T 형광을 이용한 돌연변이 P53 V157F 유방암 세포에서 집단 발생 촉진 행동 검출

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