Name: 곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum 의 CRISPR-Cas9 기반 돌연변이 유발과 돌연변이 계통의 유지 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-30T12:55:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 학습하세요 CRISPR-Cas9 기반 게놈 편집 기술을 사용하여 곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum에서 돌연변이를 유발하고 유지하는 방법을. 이 기술은 유전자 기능 분석과 해충 생물학적 방제 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Stock, S., Blair, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entomopathogenic+nematodes+and+their+bacterial+symbionts%3A+The+inside+out+of+a+mutualistic+association%5BTitle%5D)+AND+%22Symbiosis%22%5BJournal%5D)">Entomopathogenic nematodes and their bacterial symbionts: The inside out of a mutualistic association.</a> Symbiosis. 46, 65-75 (2008).</li>
<li>Murfin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode-bacterium+symbioses--cooperation+and+conflict+revealed+in+the+%26%2334%3Bomics%26%2334%3B+age%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Bull%22%5BJournal%5D)">Nematode-bacterium symbioses--cooperation and conflict revealed in the &#34;omics&#34; age.</a> Biological Bull. 223 (1), 85-102 (2012).</li>
<li>Dillman, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+entomopathogenic+nematode+by+any+other+name%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">An entomopathogenic nematode by any other name.</a> PLoS Pathog. 8 (3), e1002527(2012).</li>
<li>Cao, M., Schwartz, H. T., Tan, C. -H., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+entomopathogenic+nematode+Steinernema+hermaphroditum+is+a+self-fertilizing+hermaphrodite+and+a+genetically+tractable+system+for+the+study+of+parasitic+and+mutualistic+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The entomopathogenic nematode Steinernema hermaphroditum is a self-fertilizing hermaphrodite and a genetically tractable system for the study of parasitic and mutualistic symbiosis.</a> Genetics. 220 (1), iyab170(2022).</li>
<li>Sergeant, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification%2C+typing%2C+and+insecticidal+activity+of+Xenorhabdus+isolates+from+entomopathogenic+nematodes+in+United+Kingdom+soil+and+characterization+of+the+xpt+toxin+loci%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Identification, typing, and insecticidal activity of Xenorhabdus isolates from entomopathogenic nematodes in United Kingdom soil and characterization of the xpt toxin loci.</a> Appl Environ Microbiol. 72 (9), 5895-5907 (2006).</li>
<li>Walsh, K. T., Webster, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+microbial+populations+in+Steinernema+%28Steinernematidae%2C+Nematoda%29+infected+Galleria+mellonella+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Interaction of microbial populations in Steinernema (Steinernematidae, Nematoda) infected Galleria mellonella larvae.</a> J Invertebr Pathol. 83 (2), 118-126 (2003).</li>
<li>Herbert, E. E., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Friend+and+foe%3A+The+two+faces+of+Xenorhabdus+nematophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Friend and foe: The two faces of Xenorhabdus nematophila.</a> Nat Rev Microbiol. 5 (8), 634-646 (2007).</li>
<li>Flores-Lara, Y., Renneckar, D., Forst, S., Goodrich-Blair, H., Stock, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+nematode+age+and+culture+conditions+on+morphological+and+physiological+parameters+in+the+bacterial+vesicle+of+Steinernema+carpocapsae+%28Nematoda%3A+Steinernematidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Influence of nematode age and culture conditions on morphological and physiological parameters in the bacterial vesicle of Steinernema carpocapsae (Nematoda: Steinernematidae).</a> J Invertebr Pathol. 95 (2), 110-118 (2007).</li>
<li>Cao, M., Goodrich-Blair, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ready+or+Not%3A+Microbial+adaptive+responses+in+dynamic+symbiosis+environments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Ready or Not: Microbial adaptive responses in dynamic symbiosis environments.</a> J Bacteriol. 199 (15), e00883-e00916 (2017).</li>
<li>Lacey, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+pathogens+as+biological+control+agents%3A+Back+to+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">Insect pathogens as biological control agents: Back to the future.</a> J Invertebr Pathol. 132 (C), 1-41 (2015).</li>
<li>Campos-Herrera, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecific+virulence+of+entomopathogenic+nematodes+against+the+pests+Frankliniella+occidentalis+%28Thysanoptera%3A+Thripidae%29+and+Tuta+absoluta+%28Lepidoptera%3A+Gelechiidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nematol%22%5BJournal%5D)">Intraspecific virulence of entomopathogenic nematodes against the pests Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae) and Tuta absoluta (Lepidoptera: Gelechiidae).</a> J Nematol. 53 (1), 1-14 (2021).</li>
<li>Rill, A., Zhao, L., Bode, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+toolbox+for+Photorhabdus+and+Xenorhabdus%3A+pSEVA+based+heterologous+expression+systems+and+CRISPR%2FCpf1+based+genome+editing+for+rapid+natural+product+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Cell+Fact%22%5BJournal%5D)">Genetic toolbox for Photorhabdus and Xenorhabdus: pSEVA based heterologous expression systems and CRISPR/Cpf1 based genome editing for rapid natural product profiling.</a> Microb Cell Fact. 23 (1), 98(2024).</li>
<li>Ratnappan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAi-mediated+gene+knockdown+by+microinjection+in+the+model+entomopathogenic+nematode+Heterorhabditis+bacteriophora%5BTitle%5D)+AND+%22Parasit+Vectors%22%5BJournal%5D)">RNAi-mediated gene knockdown by microinjection in the model entomopathogenic nematode Heterorhabditis bacteriophora.</a> Parasit Vectors. 9 (1), 160(2016).</li>
<li>Cao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR-Cas9+genome+editing+in+Steinernema+entomopathogenic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">CRISPR-Cas9 genome editing in Steinernema entomopathogenic nematodes.</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>Heryanto, C., Ratnappan, R., O'Halloran, D. M., Hawdon, J. M., Eleftherianos, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+and+genetically+manipulating+entomopathogenic+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Culturing and genetically manipulating entomopathogenic nematodes.</a> J Vis Exp. (181), e63885(2022).</li>
<li>Stock, S. P., Griffin, C. T., Chaerani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+molecular+characterisation+of+Steinernema+hermaphroditum+n.+sp.+%28Nematoda%3A+Steinernematidae%29%2C+an+entomopathogenic+nematode+from+Indonesia%2C+and+its+phylogenetic+relationships+with+other+members+of+the+genus%5BTitle%5D)+AND+%22Nematology%22%5BJournal%5D)">Morphological and molecular characterisation of Steinernema hermaphroditum n. sp. (Nematoda: Steinernematidae), an entomopathogenic nematode from Indonesia, and its phylogenetic relationships with other members of the genus.</a> Nematology. 6 (3), 401-412 (2004).</li>
<li>Bhat, A. H., Chaubey, A. K., Shokoohi, E., William Mashela, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+Steinernema+hermaphroditum+%28Nematoda%2C+Rhabditida%29%2C+from+West+Uttar+Pradesh%2C+India%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Study of Steinernema hermaphroditum (Nematoda, Rhabditida), from West Uttar Pradesh, India.</a> Acta Parasitol. 64 (4), 720-737 (2019).</li>
<li>Schwarz, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomes+of+the+entomopathogenic+nematode+Steinernema+hermaphroditum+and+its+associated+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Genomes of the entomopathogenic nematode Steinernema hermaphroditum and its associated bacteria.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Haglund, K., Nezis, I. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+functions+of+stable+intercellular+bridges+formed+by+incomplete+cytokinesis+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Structure and functions of stable intercellular bridges formed by incomplete cytokinesis during development.</a> Commun Integr Biol. 4 (1), 1-9 (2011).</li>
<li>Ghanta, K. S., Ishidate, T., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microinjection+for+precision+genome+editing+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Microinjection for precision genome editing in Caenorhabditis elegans.</a> STAR Protoc. 2 (3), 100748(2021).</li>
<li>Gang, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+mutagenesis+in+a+human-parasitic+nematode%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Targeted mutagenesis in a human-parasitic nematode.</a> PLoS Pathog. 13 (10), e1006675(2017).</li>
<li>Adams, S., Pathak, P., Shao, H., Lok, J. B., Pires-daSilva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome-based+transfection+enhances+RNAi+and+CRISPR-mediated+mutagenesis+in+non-model+nematode+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Liposome-based transfection enhances RNAi and CRISPR-mediated mutagenesis in non-model nematode systems.</a> Sci Rep. 9 (1), 483(2019).</li>
<li>Culp, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+editing+in+the+nematode+Caenorhabditis+briggsae+using+the+CRISPR%2FCas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Genome editing in the nematode Caenorhabditis briggsae using the CRISPR/Cas9 system.</a> Biol Methods Protoc. 5 (1), bpaa003(2020).</li>
<li>Hellekes, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9+mediated+gene+editing+in+non-model+nematode+Panagrolaimus+sp.+PS1159%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genome+Ed%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9 mediated gene editing in non-model nematode Panagrolaimus sp. PS1159.</a> Front Genome Ed. 5, 1078359(2023).</li>
<li>Patel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+generation+of+stable+transgenic+lines+in+the+human-infective+nematode+Strongyloides+stercoralis%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">The generation of stable transgenic lines in the human-infective nematode Strongyloides stercoralis.</a> G3 (Bethesda). 14 (8), jkae122(2024).</li>
<li>Moreno-Mateos, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPRscan%3A+Designing+highly+efficient+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9+targeting+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">CRISPRscan: Designing highly efficient sgRNAs for CRISPR-Cas9 targeting in vivo.</a> Nat Methods. 12 (10), 982-988 (2015).</li>
<li>Berkowitz, L. A., Knight, A. L., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+stable+transgenic+C.+elegans+using+microinjection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of stable transgenic C. elegans using microinjection.</a> J Vis Exp. (18), e833(2008).</li>
<li>Wang, H., Park, H., Liu, J., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+genome+editing+strategy+to+generate+putative+null+mutants+in+Caenorhabditis+elegans+using+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">An efficient genome editing strategy to generate putative null mutants in Caenorhabditis elegans using CRISPR/Cas9.</a> G3 (Bethesda). 8 (11), 3607-3616 (2018).</li>
<li>Conant, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inference+of+CRISPR+Edits+from+Sanger+Trace+Data%5BTitle%5D)+AND+%22CRISPR+J%22%5BJournal%5D)">Inference of CRISPR Edits from Sanger Trace Data.</a> CRISPR J. 5 (1), 123-130 (2022).</li>
<li>McMullen, J. G. 2nd, Stock, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+and+in+vitro+rearing+of+entomopathogenic+nematodes+%28Steinernematidae+and+Heterorhabditidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo and in vitro rearing of entomopathogenic nematodes (Steinernematidae and Heterorhabditidae).</a> J Vis Exp. (91), e52096(2014).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+co-CRISPR+strategy+for+efficient+genome+editing+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A co-CRISPR strategy for efficient genome editing in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 197 (4), 1069-1080 (2014).</li>
<li>Ciche, T. A., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postembryonic+RNAi+in+Heterorhabditis+bacteriophora%3A+A+nematode+insect+parasite+and+host+for+insect+pathogenic+symbionts%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Postembryonic RNAi in Heterorhabditis bacteriophora: A nematode insect parasite and host for insect pathogenic symbionts.</a> BMC Dev Biol. 7 (1), 101(2007).</li>
<li>Du, X., McManus, D. P., French, J. D., Jones, M. K., You, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9%3A+A+new+tool+for+the+study+and+control+of+helminth+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9: A new tool for the study and control of helminth parasites.</a> Bioessays. 43 (1), e2000185(2021).</li>
<li>Quinzo, M. J., Perteguer, M. J., Brindley, P. J., Loukas, A., Sotillo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+in+parasitic+helminths%3A+A+brief+history+and+prospects+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Parasit+Vectors%22%5BJournal%5D)">Transgenesis in parasitic helminths: A brief history and prospects for the future.</a> Parasit Vectors. 15 (1), 110(2022).</li>
<li>Schwartz, H. T., Tan, C. -H., Peraza, J., Raymundo, K. L. T., Sternberg, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identification+of+a+peroxidase+gene+controlling+body+size+in+the+entomopathogenic+nematode+Steinernema+hermaphroditum%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Molecular identification of a peroxidase gene controlling body size in the entomopathogenic nematode Steinernema hermaphroditum.</a> Genetics. 226 (2), (2024).</li>
<li>Dokshin, G. A., Ghanta, K. S., Piscopo, K. M., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+genome+editing+with+short+single-stranded+and+long%2C+partially+single-stranded+DNA+donors+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Robust genome editing with short single-stranded and long, partially single-stranded DNA donors in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 210 (3), 781-787 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아가르 (80-100 메쉬)</td><td>피셔 사이언티브</td><td>BP26411</td><td>LB 피루베이트 플레이트에도 사용됨</td></tr><tr><td>아가로스</td><td>피셔 사이언티브</td><td>16500500</td><td>유전자형 분석에도 사용됩니다</td></tr><tr><td>Alt-R CRISPR-Cas9 tracrRNA</td><td>IDT</td><td>1072532</td><td></td></tr><tr><td>Alt-R S.p. Cas9 뉴클레이즈 V3</td><td>IDT</td><td>1081058</td><td></td></tr><tr><td>붕규산 바늘</td><td>월드 프리시전 인스트루먼트</td><td>1B120F-4</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘(CaCl2)</td><td>시그마 올드리치</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤 &nbsp;</td><td>VWR</td><td>433</td><td>에탄올에 5 mg/mL</td></tr><tr><td>Comamonas aquatica (DA1877)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>아가로스 패드용 커버 유리</td><td>뇌 연구소</td><td>#4860-1D</td><td>48 x 60 mm No1 두께</td></tr><tr><td>CRISPRScan</td><td></td><td></td><td>https://www.crisprscan.org/</td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드 (DMSO)</td><td>시그마-올드리치</td><td>472301</td><td>0.5 M</td></tr><tr><td>DNA 클린 및 농합기-5&nbsp;</td><td>자이모 리서치</td><td>D4014</td><td></td></tr><tr><td>펨토젯 4x 마이크로인젝터, 그립 헤드셋 4사이즈 0 바늘홀더</td><td>에펜도르프/칼리브르</td><td>5253000017</td><td></td></tr><tr><td>Galleria melonella 5령 유충</td><td>그럽코</td><td></td><td>https://www.grubco.com/index.cfm</td></tr><tr><td>젤 이미징 시스템</td><td>Azure400</td><td>AZI400-01</td><td></td></tr><tr><td>젤 로딩 염료</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>B72</td><td></td></tr><tr><td>젤라틴 (2%)</td><td>시그마 올드리치</td><td>G1393</td><td></td></tr><tr><td>젤레드</td><td>바이오티움</td><td>#41003</td><td></td></tr><tr><td>유전형 분석 프라이머: DNA 올리고, 25 nmol</td><td>IDT</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>깁코 박토 펩톤</td><td>피셔 사이언티브</td><td>DF0118-17-0</td><td></td></tr><tr><td>깁코 박토 트립톤</td><td>피셔 사이언티브</td><td>DF0123-17-3</td><td>또한 다크 LB, LB 피루베이트 플레이트 등에도 사용됩니다;</td></tr><tr><td>깁코 박토 효모 추출물</td><td>피셔 사이언티브</td><td>DF0127-17-9</td><td>또한 다크 LB, LB 피루베이트 플레이트 등에도 사용됩니다;</td></tr><tr><td>그립 헤드 세트 4 사이즈 1 바늘홀더</td><td>구경</td><td>EPE-5196083008</td><td>(붕규산염 바늘 1B120F-4와 함께 사용)</td></tr><tr><td>할로카본 오일 700</td><td>시그마 올드리치</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>일상 관리용 하드 플래티넘 와이어웜 픽</td><td>트라이테크 리서치</td><td>PT-9901</td><td></td></tr><tr><td>CRISPR 편집 추론 (ICE)</td><td>신테고</td><td>해당 없음</td><td>인델을 식별하기 위해 생거 서열을 분석하는 데 사용되는 소프트웨어</td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마 올드리치</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>레이저 니들 풀러 P-2000</td><td>서터</td><td>P-2000G</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 (MgCl2)</td><td>시그마 올드리치</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>황산마그네슘 (MgSO4)</td><td>시그마 올드리치</td><td>M7506</td><td>M9 버퍼용으로, NGM에서도 사용됩니다</td></tr><tr><td>마이크로로더 팁 2x96ST</td><td>구경</td><td>930001007</td><td></td></tr><tr><td>자이스 액시오 옵저버와 액시오버트 200용 마이크로매니퓰레이터 장착 어댑터</td><td>트라이테크 리서치</td><td>뉴질랜드-19-2</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>트라이텍</td><td>SMT1</td><td></td></tr><tr><td>니코틴</td><td>시그마 올드리치</td><td>N3876</td><td></td></tr><tr><td>NP-40</td><td>써모피셔 사이언티브</td><td>85124</td><td></td></tr><tr><td>뉴클레아제 자유 듀플렉스 버퍼</td><td>IDT</td><td>11-01-03-01</td><td></td></tr><tr><td>원택 마스터믹스</td><td>NEB</td><td>M0486</td><td></td></tr><tr><td>피펫 보관함</td><td>서터 악기</td><td>BX10</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨(KCl)</td><td>시그마 올드리치</td><td>793590</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨, 이염성 (K2HPO4)</td><td>시그마 올드리치</td><td>P3786</td><td>KOH는 NGM을 의미합니다</td></tr><tr><td>인산칼륨, 단염성 (KH2PO4)</td><td>시그마 올드리치</td><td>P5655</td><td>M9 버퍼용으로, NGM에서도 사용됩니다</td></tr><tr><td>프로테인나제 K</td><td>시그마 올드리치</td><td>P6556</td><td></td></tr><tr><td>석영 바늘</td><td>서터 악기</td><td>QF100-70-10</td><td></td></tr><tr><td><>S. hermaphroditium 게놈</td><td>NCBI</td><td></td><td>https://www.ncbi.nlm.nih.gov/datasets/genome/GCA_030435675.1/</td></tr><tr><td>sh-unc-22 Alt-R CRISPR-Cas9 crRNA</td><td>IDT</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨(NaCl)</td><td>VWR</td><td>SS0430</td><td>M9, 다크 LB, LB 피루베이트 플레이트에도 사용됩니다</td></tr><tr><td>인산나트륨, 이염성 (Na2HPO4.7H20)</td><td>시그마 올드리치</td><td>S9390</td><td>M9 버퍼에 대해</td></tr><tr><td>피루베이트나트륨</td><td>시그마 올드리치</td><td>P2256</td><td>또한 LB 피루베이트 플레이트에도 사용되며;</td></tr><tr><td>마이크로 주입용 부드러운 백금 와이어웜 픽</td><td>슈어퓨어 케메탈</td><td>6824</td><td>백금 90%, 이리듐 10% 합금 와이어, 직경 0.002인치 x 길이 5피트</td></tr><tr><td>표준 바늘 홀더</td><td>트라이테크 리서치</td><td>HI-7</td><td></td></tr><tr><td><엠>스테인네마 헤르마프로디툼</엠></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>입체 현미경</td><td>라이카</td><td>인베타 3</td><td></td></tr><tr><td>트레할로스</td><td>콜-파머</td><td>EW-88195-99</td><td>0.08 M</td></tr><tr><td>트리스&nbsp;</td><td>피셔 사이언티브</td><td>AM9855G</td><td>pH 8.0</td></tr><tr><td>트윈 20세</td><td>시그마 올드리치</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>수직 마이크로매니퓰레이터 장착 어댑터</td><td>트라이테크 리서치</td><td>NR2</td><td></td></tr><tr><td>Xenorhabdus griffiniae (HGB2511)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

곤충병원성 선충 steinernema hermaphroditum 의 crispr-cas9 기반 돌연변이 유발과 돌연변이 계통의 유지

CRISPR-Cas9-based Mutagenesis in the Entomopathogenic Nematode Steinernema hermaphroditum and the Maintenance of Mutant Lines

곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum 의 CRISPR-Cas9 기반 돌연변이 유발과 돌연변이 계통의 유지

Entomopathogenic nematodes (EPNs) in the genus Steinernema and Heterorhabditis maintain mutualistic interactions with Xenorhabdus and Photorhabdus ...

우리는 농업에 적용되는 선충 박테리아 공생의 유전학을 연구하고 있습니다. 제노르합두스 박테리아의 유전적 도구는 매우 잘 발달되어 있으나, EPN 유전학은 여전히 제한적이며 주로 RNAi와 EMS 스크리닝에 의존하고 있습니다. 우선, Xenorhabdus griffiniae와 Comamonas aquaticus를 씨앗으로 한 선충 한천 플레이트를 구하세요.Steinernema hermaphroditum 선충을 Xenorhabdus griffiniae가 포함된 준비된 NGM 판에 채취하세요. 최적의 성장을 위해 25도에서 28도에서 부화하세요. 미세 주입 전날 밤, J3 단계 양성기를 Xenorhabdus griffiniae가 씨앗된 신선한 NGM 한천 플레이트에 채취합니다.마이크로 주사 당일에는 젊은 성인 양성체 자웅동체를 선택해 주사를 맞으세요. BlastP를 사용하여 Steinernema hermaphroditum 참조 게놈에서 표적 유전자 서열을 추출합니다. 초기 코딩 엑손, 가능하면 첫 번째 엑손을 선택하고, 기본 설정으로 CRISPRscan에 서열을 입력하여 후보 CRISPR RNA를 생성합니다.상위 후보 CRISPR RNA를 Steinernema 자웅동체 유전체와 비교하여 비표적 일치가 없도록 합니다. 선택된 CRISPR RNA와 범용 트랜스활성화 CRISPR RNA는 각각 100미세몰 크기의 영하 80도 듀플렉스 버퍼에 저장합니다. 전자레인지를 이용해 2%아가로스를 물에 녹여 녹여보세요.녹인 아가로스 50마이크로리터를 커버 유리에 옮깁니다. 즉시 두 번째 뚜껑 유리잔으로 덮으세요. 20분 건조 후 상단 덮개 유리를 제거한 후 아가로스 패드 앞면에 라벨을 붙입니다.아가로스 패드는 몇 달에서 몇 년간 장기간 실온에 보관하세요. 주입 준비를 위해 석영 모세관을 레이저 필라멘트 풀러에 올려 피펫 보관함에 보관하세요. 선택된 crRNA와 범용 트랜스활성화 CRISPR RNA를 1:1 비율로 혼합하여 신선한 가이드 RNA 이중분해를 준비합니다.튜브를 94도 섭씨에서 2분간 배양한 후 실온으로 식혀 더플렉스 어닐링을 합니다. Cas9, 염화칼륨, gRNA 이중체를 결합하여 주사 혼합물을 조립하고 배양하세요. PCR 튜브를 세 번 튕겨 섞은 후, 미니 원심분리기에서 10초에서 15초 정도 잠시 돌립니다.최종 믹싱 후에는 최대 1분간 돌려 내용물을 수집하세요. 다음으로, 마이크로로더 팁을 사용해 1에서 2마이크로리터의 주사 혼합물을 바늘에 주입하세요. 바늘을 홀더에 장착하고, 헤일로카본 오일 아래 양면 테이프를 끌고 가서 팁을 부수세요.그리고 마이크로인젝터의 클린 기능을 이용해 구멍 크기를 테스트하세요. 2% 아가로스 패드 위에 작은 할로카본 오일 방울을 떨어뜨립니다. 해부 현미경과 부드러운 백금 와이어를 사용해 젊은 성체 양성체를 집어 들어보세요.박테리아를 제거하려면 M9 버퍼로 세척하세요. 선충을 아가로스 패드 위에 옮기고, 할로카본유 방울에 넣으세요. 부드러운 백금 와이어로 선충을 부드럽게 빗질해 고정시키세요.패드를 마이크로인젝션 스테이지에 장착하세요. 한 쪽 생식샘 팔을 찾아 바늘로 관통하세요. 주입기의 클린 기능을 사용해 생식선 흐름이 보이도록 99 px 인치의 주사 혼합물을 전달하여 시약이 융합체에 접근하는지 확인하세요.가능하다면 단계를 재배치하고 두 번째 생식선암도 비슷하게 주입하세요. 주사 직후에는 주입된 동물을 아가로스 패드 위에 1에서 2마이크로리터 M9 완충제에 재현탁합니다. 얇은 백금 와이어로 주입된 벌레를 패드에서 떼어내고, M9 버퍼로 오일을 씻어낸 뒤, Comamonas aquatica가 뿌려진 회수 NGM 플레이트에 복원하세요.회수판을 하룻밤 25도 섭씨에서 배양하세요. 다음 날, 주입된 P0 선충을 Xenorhabdus griffiniae가 씨앗 시딩된 개별 NGM 플레이트에 분리합니다. 두 개의 CRISPR RNA가 이전에 발표된 PAM 부위에서 unc-22의 Steinernema 자웅동체 상동체를 표적으로 설계하였습니다.니코틴에 노출된 선충에 대한 저크 분석에서는 unc-22 돌연변이체와 야생형 선충 사이에 뚜렷한 운동 차이가 나타났다. PCR을 이용한 경련 자손의 유전형 분석 결과, Pam 3와 Pam 5 모두 표적 부위에 여러 개의 희미한 띠가 나타났습니다. 시퀀싱 결과 목표 unc-22 부위에서 삽입 및 결실 사건이 확인되었습니다.저희 연구실은 EPN 유전학 분야의 박사후 연구를 확장했습니다. CRISPR는 현재 세 종의 Steinernema에서 이용 가능합니다. 이 프로토콜에서는 CRISPR-Cas9 유전자 편집을 이용해 안정적이고 유전 가능한 돌연변이를 효율적으로 생성하는 기법을 확립했습니다.안정적인 CRISPR-Cas9 유전자 편집을 통해 Steinernema-Xenorhabdus 공생의 분자 메커니즘을 해부할 수 있습니다.

crispr-cas9-based-mutagenesis-entomopathogenic-nematode-steinernema

Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

phenotypic 결함과 돌연변이에 대한 심사는 특정 생물 학적 과정에서 기능 유전자를 확인하는 간단한 방법입니다. 이 문서에서 우리는 어떻게 문화 무료 생활 웜 (예에 대한...

웜 실험실 소개 : Culturing 웜에서 돌연변이 유발하는

여기, 우리는 CRISPR-Cas9 ribonucleoproteins 및 homology 종속 복구 서식 파일을 사용 하 여 C. 선 충 의 게놈을 엔지니어링 하는 방법 제시.

빠른 고 손쉬운 파이프라인 C. 선 충 을 사용 하 여 CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins에서 게놈 포인트 돌연변이 생성에 대 한

여기에서, 우리는 CRISPR/Cas9 시스템을 사용하여, Trypanosoma cruzi의 세포외 amastigote로 유전자 녹아웃을 소개하는 프로토콜을 기술합니다. 성장 표현형은 축세포 배양의 세포 계수 또는 숙주 세포 침입 후 세포 내 아마스티고테의 증식에 의해 추적될 수 있다.

CRISPR/Cas9 시스템을 사용하여 트리파노소마 크루지의 아마스티고테 스테이지에 유전자 녹아웃 직접 도입

이 프로토콜은 CRISPR/Cas9 유전자 편집 도구와 함께 작동하도록 최적화된 Culex quinquefasciatus 태아를 위한 미세 주입 절차를 기술합니다. 이 기술은 이 저학질병 벡터에 있는 유전 기술을 구축하는 데 사용될 수 있는 사이트 특정, 유전성, 생식선 돌연변이를 효율적으로 생성할 수 있습니다.

컬렉스 퀸케파시아투스의 효율적인 부위 별 돌연변이 발생을 위한 배아 미세 주입 기술

CRISPR/Cas9는 비모델 유기체에서 유전자 기능을 특성화하는 데 점점 더 사용됩니다. 이 프로토콜은 주입 믹스 준비에서 모기 배아를 획득하고 주입하는 것뿐만 아니라 주입 된 모기와 원하는 돌연변이에 대한 자손을 후면, 교차 및 선별하는 방법에 이르기까지 Culex pipiens의녹아웃 라인을 생성하는 방법을 설명합니다.

CRISPR/Cas9를 사용하여 Null 돌연변이를 생성하기 위해 컬렉스 모기의 배아를 준비하고 주입합니다.

이 프로토콜은 태아 수집, 주사, 곤충 사육 및 식별뿐만 아니라 관심있는 돌연변이의 선택 : 모래 파리에 CRISPR / Cas9 표적 돌연변이 발생의 단계를 자세히 설명합니다.

샌드 플라이 (플레보토무스 파파타시) CRISPR/Cas9 돌연변이 발생을 위한 배아 미세 주입

곤충 우사회성의 많은 특성은 식민지 내 의사 소통과 노동 분업에 의존합니다. 미세 주입 및 CRISPR 매개 돌연변이 유발을 통한 개미 배아의 주요 조절 유전자의 유전자 조작은 진사회적 곤충의 이타적 행동의 본질에 대한 통찰력을 제공합니다.

개미 하르페냐토스 염기 에서 CRISPR 매개 돌연변이 유발을 위한 배아 주사

이 프로토콜의 목표는 조립된 리보뉴클레오단백질 복합체와 스크리닝을 위한 dpy-10 공동 CRISPR 마커를 사용하여 C. elegans 게놈의 원활한 CRISPR/Cas9 편집을 가능하게 하는 것입니다. 이 프로토콜은 삽입, 삭제, 유전자 대체 및 코돈 대체를 포함하여 C. elegans에 있는 유전 수정의 각종을 만들기 위하여 이용될 수 있습니다.

CRISPR/Cas9 Dpy-10 공동 CRISPR 스크리닝 마커 및 조립된 리보뉴클레오단백질 복합체를 사용하여 C. elegans rbm-3.2 유전자의 편집.

여기에 제시 헬 리코파 armigera 의 프로토콜입니다 (Hübner) 태아 미세 주입 및 CRISPR / Cas9 게놈 편집에 의해 생성 된 녹아웃 돌연변이 식별. 돌연변이 곤충은 생체 내의 다른 유전자 들 사이에서 유전자 기능 및 상호 작용의 추가 연구를 가능하게 합니다.

CRISPR/Cas9 게놈 편집 헬리코파 아르미게라 의 배아 미세 주입 및 녹아웃 돌연변이 식별 (휘브너)

이 연구는 동형접합 메뚜기 돌연변이의 CRISPR/Cas9 리보뉴클레아제 기반 구성의 체계적으로 최적화된 절차와 메뚜기 알의 냉동 보존 및 소생을 위한 상세한 방법을 제공합니다.

CRISPR/Cas9 기술을 이용한 철새 메뚜기의 동형접합 돌연변이 구축

Entomopathogenic 선충류는 박테리아와 공생하며 함께 선천적 인 면역 체계를 손상시켜 곤충을 성공적으로 감염시킵니다. 선충류 감염의 유전 적 기초에 대한 연구를 촉진하기 위해 엔토모 병원성 선충류를 유지하고 유 전적으로 조작하는 방법이 설명됩니다.

Entomopathogenic Nematodes 배양 및 유전자 조작

학습하세요 CRISPR-Cas9 기반 게놈 편집 기술을 사용하여 곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum에서 돌연변이를 유발하고 유지하는 방법을. 이 기술은 유전자 기능 분석과 해충 생물학적 방제 연구에 활용됩니다.

곤충병원성 선충 Steinernema hermaphroditum 의 CRISPR-Cas9 기반 돌연변이 유발과 돌연변이 계통의 유지

더 많은 동영상 탐색