Name: 게이트키퍼 시각화: 성인 제브라피쉬의 혈액-뇌 장벽 투과성에 대한 Evan의 파란색 염료 기반 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: 학습하세요 성인 제브라피쉬 Danio rerio에서 에반스 블루 염료를 활용한 혈액-뇌 장벽 투과성 평가 방법을. 이 간단하고 비용 효율적인 프로토콜은 질적 및 정량적 분석을 통해 신경혈관 변화를 연구하는 연구자들에게 유용합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 프로토콜은 동물 윤리 승인(참조 번호: IIUM/504/14/2/IACUC)과 관련하여 말레이시아 국제 이슬람 대학(IIUM) 산하 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)에 의해 준수되고 허용되었습니다.
1. Evans Blue 염료 원액 준비
<ol>
	<li>EB 염료 0.1g을 1x 인산염 완충 식염수(PBS) 10mL에 녹여 1%(w/v) 원액을 준비합니다. 염료가 완전히 녹을 때까지 철저히 섞습니다. 주의: EB는 발암 물질 카테고리 1B로 분류됩니다. 피부와 눈에 직접 닿지 않도록 하십시오. 보호복, 장갑, 보안경, 방진 마스크를 사용하십시오. 먼지를 흡입하지 말고 제조업체의 취급 지침을 따르십시오. Evans Blue 염료(고체 또는 용액)를 싱크대에 버리지 마십시오. 폐기물은 라벨이 붙은 원래 용기에 보관하십시오. 국가 및 지역 유해 폐기물 규정에 따라 폐기하십시오.</li>
	<li>0.45μm 주사기 필터를 사용하여 용액을 여과합니다. 여과액을 멸균 15mL 원심분리기 튜브에 모으십시오. 튜브를 알루미늄 호일로 싸서 4°C에서 보관합니다. 참고: 더 작은 기공 크기 필터(예: 0.2μm)를 사용할 수도 있습니다. 원액은 4°C에서 최대 2주 동안 또는 -20°C에서 최대 1개월 동안 보관할 수 있으며, 냉동 보관 시 반복되는 동결-해동 주기를 최소화하기 위해 분취하는 것이 좋습니다.</li>
</ol>
2. 성체 제브라피쉬에게 Evans Blue 염료 투여
<ol>
	<li>물고기가 더 이상 촉각 자극에 반응하지 않을 때까지 수온을 12°C에서 7°C로 점차적으로 낮추어 저체온 쇼크 를 통해 제브라피쉬를 마취합니다. 알림: 소량의 으깬 얼음을 물에 몇 분에 걸쳐 천천히 첨가하여 온도를 점진적으로 낮추면 점진적인 온도 감소를 달성할 수 있습니다. 트리카인 침수는 또한 적합한 대체 마취 방법입니다.</li>
	<li>31G 인슐린 주사기를 사용하여 20μL의 1% EB 염료를 복강내(IP) 공동에 주입합니다. 역류를 방지하기 위해 주사 부위에 10초 동안 부드러운 압력을 가합니다. 참고: 제브라피쉬 복강은 골반 거들의 뒤쪽에 위치합니다. EB 투여의 성공률을 높이려면 주사 전 24시간 동안 물고기를 금식시키십시오. 이렇게 하면 복강이 비워져 복강 내 공간에 대한 더 나은 접근성과 정확성을 제공합니다.</li>
	<li>물고기를 회수 탱크로 옮기고 30분 동안 회수합니다. 부상, 사망률 또는 행동 변화를 모니터링합니다. 알림: 제브라피쉬의 회복을 돕기 위해 회수 탱크의 수온을 약간 낮추십시오(20-24 °C)를 사용하여 가벼운 마취 효과를 제공하고 잠재적인 주사 후 불편함을 마비시키는 데 도움이 됩니다. 주입된 물고기는 성공적인 염료 순환을 나타내는 파란색 색조를 나타냅니다(그림 1).</li>
	<li>30분 후, 1°C에서 3°C에서 저체온 쇼크 를 통해 물고기를 안락사시킵니다. 그런 다음 멸균 칼날이나 수술용 가위를 사용하여 물고기의 목을 베십시오. 참고: 나중에 뇌 해부를 돕기 위해 참수할 때 머리 뒤에 여분의 살을 남겨두십시오.</li>
	<li>1x PBS(1:20 피쉬 대 PBS 비율)로 머리를 두 번 헹구어 과도한 혈액과 EB 염료를 제거합니다. 알림: 세척이 불충분하면 위양성 결과가 발생하고 분석의 정확성이 저하될 수 있습니다. 이를 방지하려면 1x PBS로 뇌 조직을 최소 두 번 철저히 세척하여 눈에 보이는 모든 혈액과 자유롭게 흐르는 염료가 제거되도록 하십시오. 잔여 염료가 남아 있으면 세 번째 세탁을 강력히 권장합니다.</li>
	<li>4% 파라포름알데히드(PFA)에 머리를 4°C에서 밤새 고정합니다(1:20 물고기 대 고정제 비율). 제브라피쉬 머리의 작은 크기와 충분한 고정 부피로 인해 정적 조건에서 효과적인 침투가 가능하기 때문에 고정 중에 교반이 필요하지 않습니다. 주의: PFA는 삼키거나 흡입하거나 피부에 닿으면 유해합니다. 흄 후드 아래에서 PFA 용액을 준비합니다. 적절한 개인 보호 장비를 사용하고 먼지 흡입을 피하십시오. 제조업체에 따른 모든 안전 지침을 따르십시오. PFA를 유해 폐기물로 취급하십시오. 배수구에 버리지 마십시오. 폐기물을 밀봉된 용기에 수거하여 라벨을 붙이고 지역 및 국가 규정에 따라 폐기하십시오.</li>
	<li>제브라피쉬의 뇌를 해부하세요<ol>
		<li>고정된 머리를 깨끗한 페트리 접시에 놓고 앞서 설명한 대로 뇌를 해부한다(15), 뾰족한 끝 핀셋을 사용하여. 해부 중에 PBS 1개를 지속적으로 적가하여 조직의 수분을 유지하고 건조를 방지합니다.</li>
		<li>증류수 100mL에 아가로스 1g을 녹여 아가로스 플레이트를 준비합니다. 완전히 녹을 때까지 전자레인지에 돌린 후 페트리 접시에 붓고 굳히십시오.</li>
		<li>해부된 뇌를 두 개의 별도 1x PBS 수조에서 두 번 헹구십시오. 그런 다음 조직을 1% 아가로스 플레이트 위에 올려 수분을 유지하고 수축을 방지합니다. 알림: 세척이 불충분하면 위양성 결과가 발생하고 분석의 정확성이 저하될 수 있습니다. 이를 방지하려면 1× PBS로 뇌 조직을 최소 두 번 철저히 세척하여 눈에 보이는 모든 혈액과 자유롭게 흐르는 염료가 제거되도록 하십시오. 잔여 염료가 남아 있으면 세 번째 세탁을 강력히 권장합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69010/69010fig1.jpg"> 
그림 1: 정상 제브라피쉬와 EB 주입 제브라피쉬 사이의 피부색 비교. (A) 전형적인 갈색 피부 톤을 나타내는 정상 제브라피쉬. (B) EB 주입 제브라피쉬는 눈에 띄는 푸르스름한 색조를 나타내며, 이는 염료의 성공적인 전신 순환을 나타냅니다. 스케일 바 = 1cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69010/69010fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
3. 자상(SWI)을 통한 양성 대조군 확립
참고: 찔린 상처 부상은 BBB를 파괴하고 손상 부위에서 EB 혈관외 유출을 가능하게 합니다.
<ol>
	<li>저체온 쇼크 방법을 사용하여 물고기를 마취합니다(2.1단계 참조). 마취가 완료되면 20μL의 1% EB 염료를 주입하고 2.2단계 및 2.3단계에서 설명한 대로 물고기가 30분 동안 회복되도록 합니다.</li>
	<li>30분의 회복 기간 후 인슐린 주사기에 부착된 멸균 31G 바늘을 준비하고 다음과 같이 자상처 시술을 수행합니다.<ol>
		<li>물고기를 다시 마취하십시오.</li>
		<li>평평하고 차가운 표면(예: 아이스 젤 팩)에 물고기를 똑바로 세웁니다. 바늘을 1.5mm를 초과하지 않는 깊이로 90° 각도로 종뇌의 한쪽에 삽입합니다(그림 2). 알림: 아이스 젤 팩에 피부가 직접 닿는 것을 방지하고 잠재적인 피부 손상을 방지하려면 생선과 차가운 표면 사이에 거즈나 종이 타월을 한 겹 놓으십시오(그림 2). 또는 물고기를 냉찜질 위에 놓은 얕은 페트리 접시에 넣어 직접적인 접촉 없이 냉각을 유지할 수 있습니다. 과도한 침투를 방지하기 위해 바늘에 1.5mm를 표시합니다.</li>
		<li>물고기를 회수 탱크로 옮기고 30분 동안 회수합니다.</li>
		<li>2.4 내지 2.7단계에 설명된 대로 뇌를 안락사시키고, 참수하고, 고정하고, 해부한다.</li>
		<li>음성 대조군의 경우 EB 염료 대신 20μL의 1x PBS를 사용하여 2.1 내지 2.7단계를 반복합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69010/69010fig2.jpg"> 
그림 2: 양성 대조군을 위한 찔린 상처 손상. (A) EB 염료가 뇌 조직에 침투하는 것을 용이하게 하기 위해 31G 바늘을 환뇌(빨간색 원)에 짧게 삽입합니다. 손상되지 않은 뇌와 찔린 뇌의 나란히 비교, (B) 찔린 부위의 등쪽 모습(빨간색 원), (C) 찔린 부위의 측면 모습. 스케일 바 = 1mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69010/69010fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
4. EB 유출의 정성적 분석
<ol>
	<li>해부된 뇌 조직을 입체 현미경으로 관찰합니다. 일관성을 보장하기 위해 이미지 설정(확대/축소, 화이트 밸런스, 노출, 대비 등)을 최적화합니다.</li>
	<li>현미경에 장착된 카메라를 사용하여 이미지를 캡처하고 에 저장합니다. TIFF 형식. 참고: 비교 타당성을 보장하기 위해 모든 샘플에 대해 동일한 이미징 설정을 사용하십시오.</li>
</ol>
5. EB 유출의 정량적 분석
<ol>
	<li>Fiji를 다운로드하여 설치합니다(소프트웨어 다운로드 링크는 재료 표에서 확인할 수 있음). 피지에서 이미지를 엽니다.</li>
	<li>이미지 &gt; 색상 &gt; 색상 디콘볼루션 &gt; RGB를 클릭하여 색상 디콘볼루션을 수행하면 빨간색, 녹색 및 파란색 색조를 나타내는 세 개의 개별 이미지가 생성됩니다. 알림: 이 단계는 파란색 색조를 다른 색상 구성 요소와 분리하여 파란색 염료의 강도만 측정되도록 합니다.</li>
	<li>이미지를 클릭하여 파란색 채널 이미지(일반적으로 "Color_3"로 표시됨)를 활성화합니다. 이미지 &gt; 8비트를 입력하여 8비트 그레이스케일로 변환&gt;. 참고: 그레이스케일 변환은 색상 아티팩트를 최소화하고 강도 기반 분석을 향상시킵니다.</li>
	<li>8비트 이미지의 회색 강도를 측정합니다.<ol>
		<li>분석을 &gt; 측정값 설정, 면적 및 평균 회색 값을 선택하여 측정값을 설정합니다.</li>
		<li>사각형 선택 도구를 사용하여 균일한 크기의 관심 영역(ROI)을 그리고 분석 &gt; 측정을 선택하거나 Ctrl + M을 눌러 회색 강도를 측정합니다. 참고: 모든 샘플에서 동일한 ROI 크기를 사용해야 합니다. ROI의 절대 치수는 획득한 이미지의 배율과 해상도에 따라 달라질 수 있으므로 연구자는 비교 가능성을 보장하기 위해 데이터 세트 내에서 ROI 크기를 표준화해야 합니다. 8비트 그레이스케일 이미지의 각 픽셀에는 0에서 255 사이의 강도 값이 있으며, 여기서 0은 순수한 검정색을 나타내고 255는 순수한 흰색을 나타내며 그 사이의 값은 다양한 회색 음영을 나타냅니다.</li>
		<li>편향을 줄이려면 모든 샘플에 걸쳐 해부학적으로 일관된 뇌 영역 내에서 3-5개의 ROI를 그립니다. 인공물이나 일관되지 않은 염색이 있는 영역은 피하십시오. 참고: 배치 일관성은 해부학적 랜드마크를 참조하고 ROI 위치가 실험 그룹 간에 대칭인지 확인함으로써 달성할 수 있습니다.</li>
		<li>각 이미지에 대한 ROI의 평균 회색 값을 평균화하여 뇌당 단일 강도 값을 얻습니다. 그룹 간의 통계적 비교에 이 평균을 사용합니다.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-brain+barrier+overview+on+structure%2C+function%2C+impairment%2C+and+biomarkers+of+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity.</a> Fluids Barriers CNS. 17, 1-24 (2020).</li>
<li>Knox, E. G., Aburto, M. R., Clarke, G., Cryan, J. F., O'Driscoll, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier+in+aging+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier in aging and neurodegeneration.</a> Mol Psychiatry. 27 (6), 2659-2673 (2022).</li>
<li>Sweeney, M. D., Sagare, A. P., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+Alzheimer+disease+and+other+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in Alzheimer disease and other neurodegenerative disorders.</a> Nat Rev Neurol. 14 (3), 133-150 (2018).</li>
<li>Kim, S., Jung, U. J., Kim, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crucial+role+of+the+blood-brain+barrier+in+neurodegenerative+diseases%3A+Mechanisms+of+disruption+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">The crucial role of the blood-brain barrier in neurodegenerative diseases: Mechanisms of disruption and therapeutic implications.</a> J Clin Med. 14 (2), 386(2025).</li>
<li>Guarino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+modelling+human+blood-brain+barrier+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Advancements in modelling human blood-brain barrier on a chip.</a> Biofabrication. 15 (2), 022003(2023).</li>
<li>Kalueff, A. V., Stewart, A. M., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+emerging+model+for+studying+complex+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an emerging model for studying complex brain disorders.</a> Trends Pharmacol Sci. 35 (2), 63-75 (2014).</li>
<li>Eliceiri, B. P., Gonzalez, A. M., Baird, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEliceiri%2C+BP+%22The+blood-brain+and+other+neural+barriers%3A+reviews+and+protocols%22">The blood-brain and other neural barriers: reviews and protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+promising+in+vivo+model+for+assessing+the+delivery+of+natural+products%2C+fluorescence+dyes+and+drugs+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A promising in vivo model for assessing the delivery of natural products, fluorescence dyes and drugs across the blood-brain barrier.</a> Pharmacol Res. 125, 246-257 (2017).</li>
<li>Fleming, A., Diekmann, H., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterisation+of+the+maturation+of+the+blood-brain+barrier+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional characterisation of the maturation of the blood-brain barrier in larval zebrafish.</a> PLoS One. 8 (10), e77548(2013).</li>
<li>Kislyuk, S., van den Bosch, W., Adams, E., De Witte, P., Cabooter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+sensitive+and+quantitative+capillary+LC-UV+method+to+study+the+uptake+of+pharmaceuticals+in+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Development of a sensitive and quantitative capillary LC-UV method to study the uptake of pharmaceuticals in zebrafish brain.</a> Anal Bioanal Chem. 410, 2751-2764 (2018).</li>
<li>Jaffer, H., Adjei, I. M., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+to+map+blood-brain+barrier+leakage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optical imaging to map blood-brain barrier leakage.</a> Sci Rep. 3 (1), 3117(2013).</li>
<li>Yao, L., Xue, X., Yu, P., Ni, Y., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+dye%3A+A+revisit+of+its+applications+in+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Evans blue dye: A revisit of its applications in biomedicine.</a> Contrast Media Mol Imaging. 2018 (1), 7628037(2018).</li>
<li>Goldim, M. P. S., Della Giustina, A., Petronilho, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Evans+blue+dye+to+determine+blood-brain+barrier+integrity+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Using Evans blue dye to determine blood-brain barrier integrity in rodents.</a> Curr Protoc Immunol. 126 (1), e83(2019).</li>
<li>Razali, K., Kumar, J., Mohamed, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+the+adult+zebrafish+model+of+Parkinson%27s+disease%3A+a+systematic+review+of+dynamic+changes+in+behavior+and+physiology+post-MPTP+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterizing the adult zebrafish model of Parkinson's disease: a systematic review of dynamic changes in behavior and physiology post-MPTP administration.</a> Front Neurosci. 18, 1432102(2024).</li>
<li>Lopez-Ramirez, M. A., Calvo, C. F., Ristori, E., Thomas, J. L., Nicoli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+zebrafish+brain-derived+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult zebrafish brain-derived neurospheres.</a> J Vis Exp. (108), e53617(2016).</li>
<li>Al-Bachari, S., Naish, J. H., Parker, G. J., Emsley, H. C., Parkes, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+leakage+is+increased+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier leakage is increased in Parkinson's disease.</a> Front Physiol. 11, 593026(2020).</li>
<li>Gray, M. T., Woulfe, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+blood-brain+barrier+permeability+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Striatal blood-brain barrier permeability in Parkinson's disease.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (5), 747-750 (2015).</li>
<li>Hourfar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+%CE%B1-synuclein+aggregates+on+blood-brain+barrier+integrity+in+the+presence+of+neurovascular+unit+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">The impact of α-synuclein aggregates on blood-brain barrier integrity in the presence of neurovascular unit cells.</a> Int J Biol Macromol. 229, 305-320 (2023).</li>
<li>Olmedo-Díaz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+altered+blood-brain+barrier+contributes+to+brain+iron+accumulation+and+neuroinflammation+in+the+6-OHDA+rat+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An altered blood-brain barrier contributes to brain iron accumulation and neuroinflammation in the 6-OHDA rat model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 362, 141-151 (2017).</li>
<li>Ravenstijn, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+blood-brain+barrier+transport+and+CNS+drug+metabolism+in+diseased+and+control+brain+after+intravenous+L-dopa+in+a+unilateral+rat+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Evaluation of blood-brain barrier transport and CNS drug metabolism in diseased and control brain after intravenous L-dopa in a unilateral rat model of Parkinson's disease.</a> Fluids Barriers CNS. 9, 1-14 (2012).</li>
<li>Wu, Y. C., Sonninen, T. M., Peltonen, S., Koistinaho, J., Lehtonen, Š <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+and+neurodegenerative+diseases-modeling+with+iPSC-derived+brain+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier and neurodegenerative diseases-modeling with iPSC-derived brain cells.</a> Int J Mol Sci. 22 (14), 7710(2021).</li>
<li>Hosseini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+phenotypic+sex+classification+of+zebrafish+using+machine+learning+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Efficient phenotypic sex classification of zebrafish using machine learning methods.</a> Ecol Evol. 9 (23), 13332-13343 (2019).</li>
<li>Dithmer, S., Blasig, I. E., Fraser, P. A., Qin, Z., Haseloff, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+requirement+of+tight+junction+proteins+in+blood-brain+barrier+function+and+their+role+in+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The basic requirement of tight junction proteins in blood-brain barrier function and their role in pathologies.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5601(2024).</li>
<li>Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+into+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection into adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (42), e2126(2010).</li>
<li>Nishimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+indoline+derivative+for+in+vivo+fluorescent+imaging+of+blood-brain+barrier+disruption+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel indoline derivative for in vivo fluorescent imaging of blood-brain barrier disruption in animal models.</a> ACS Chem Neurosci. 4 (8), 1183-1193 (2013).</li>
<li>Schoknecht, K., Eilers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-to-blood+transport+of+fluorescein+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Brain-to-blood transport of fluorescein in vitro.</a> Sci Rep. 14 (1), 25572(2024).</li>
<li>Harris, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+methods+for+imaging+blood-brain+barrier+function+and+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo methods for imaging blood-brain barrier function and dysfunction.</a> Eur J Nucl Med Mol Imaging. 50 (4), 1051-1083 (2023).</li>
<li>Hamilton, N., Allen, C., Reynolds, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+MRI+brain+studies+in+live+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Longitudinal MRI brain studies in live adult zebrafish.</a> NMR Biomed. 36 (7), e4891(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>아가로스 분말</td><td>비반티스</td><td>PC0701</td><td></td></tr><tr><td>에반의 블루 염료</td><td>시그마-알드리치</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>피지 ImageJ</td><td>미국 국립보건원(National Institutes of Health)</td><td></td><td>다운로드 링크: https://imagej.net/software/fiji/downloads</td></tr><tr><td>현미경 카메라</td><td>심천 Hayear 전자 Co., Ltd.</td><td>하이-500M</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA) 분말</td><td>시그마-알드리치</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨(NaCl)</td><td>HmbG 화학</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>올림푸스 주식회사</td><td>에이즈40</td><td></td></tr><tr><td>주사기 필터 장치, 0.45&micro; m</td><td>머크 밀리포어&nbsp;</td><td>SLHV004SL</td><td></td></tr></tbody></table>

게이트키퍼 시각화: 성인 제브라피쉬의 혈액-뇌 장벽 투과성에 대한 evan의 파란색 염료 기반 평가

Visualizing the Gatekeeper: Evan's Blue Dye-Based Assessment of Blood-Brain Barrier Permeability in Adult Zebrafish

이 프로토콜은 파킨슨병 제브라피쉬 모델에서 테스트되었습니다. BBB의 손상은 PD 환자 16,17,18 및 다양한 파킨슨병 동물 모델 19,20,21에서 잘 문서화된 현상입니다. 성체 제브라피쉬 파킨슨병 모델에서 BBB 무결성을 조사하기 위해 뇌 조직으로의 EB 염료 유출을 식염수 주입(대조군)과 파킨슨병 제브라피쉬 사이에서 비교했습니다. 성체 제브라피쉬 PD 모델은 이전에 발표된 바와 같이 BBB 평가 24시간 전에 투여된 MPTP(200μg/g)의 단일 복강내 주사를 통해 확립되었습니다14. 한편, 식염수를 주사한 사람은 생리식염수(NS...

게이트키퍼 시각화: 성인 제브라피쉬의 혈액-뇌 장벽 투과성에 대한 Evan의 파란색 염료 기반 평가

The Blood-Brain Barrier (BBB) is a semi-permeable interface that maintains central nervous system (CNS) homeostasis by regulating the movement of ...

visualizing-gatekeeper-evan-s-blue-dye-based-assessment-blood-brain

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 배아 zebrafish의 뇌의 투자율의 라이브 전체 동물 양적 측정을 설명합니다. 기술은 신경 튜브 내강 내에서 서로 다른 분자 무게의 중추 신경계와 분자를 보유 할 수있는 능력을 분석하고 심실의 움직임을 단정 지을. 이 방법은 개발과 질병 중 상피 투자율과 성숙의 차이를 결정하는 데 유용합니다.

Zebrafish 배아 Neuroepithelium의 투과율에 대한 분석

본 연구에서는 표준 배아 미세주입 및 실체현미경 장비를 활용한 제브라피쉬 치어의 새로운 미세강제투여(microgavage) 방법을 제시합니다. 우리는 미세강제투여가 다양한 물질을 제브라피쉬 치어의 장관 내로 정밀하게 정량 투여하는 데 유용한 안전하고 효율적인 기술임을 입증합니다.

Zebrafish 애벌레의 Microgavage

이 비디오는 EAE 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴를 평가하는 절차를 보여줍니다. 다양한 크기의 형광 염료를 역궤도로 주입하여 뇌의 혈관을 순환합니다. 작은 염료는 틈을 통해 뇌 조직으로 누출되는 반면, 큰 염료는 장벽 손상 정도와 상관관계가 있는 파괴가 심한 경우에만 들어갑니다.

EAE 마우스 모델에서 형광 염료를 사용한 혈액-뇌 장벽 파괴 결정

혈액 - 뇌 장벽 장애는 뇌에 특정 약물의 전달을 에이즈. 마니 톨은 물리적 장벽을 방해하기 위해 간 arterially 혈관을 수축 주변 세포를 전달했습니다.

혈액 - 뇌 장벽 장애의 쥐 모델 Neurovascular 치료학 타겟이 분명한 허용하려면

본 연구의 목적은 쥐의 동계 내피 세포와 성상 세포의 공동 문화를 포함하는 생체 BBB 모델의 재현성을 확인하는 것이 었습니다. 내피 세포 단일 층은 높은 봉사자 낮은 LY 투과성을 발표했다. 특정 TJ 단백질의 발현은 염증과 운송 및 수용체의 기능에 기능적인 응답은 평가했다.

설정 - 업<em&gt; 체외</em쥐 뇌 혈관 벽의&gt; 모델 (BBB)​​ : BBB 불 침투성 및 수용체 매개 운송에 초점

여기 우리는 마우스 뇌 혈관 침투성 분석 결과 형광 추적기 관류 뇌혈관 장애의 동물 모델에 적용 되는 다음의 복 주사를 사용 하 여 현재. 한 반의 두뇌 양적 침투성을 평가 하 고 추적 프로그램 시각화/immunostaining에 대 한 다른 사용 됩니다. 절차 10 쥐에 대 한 5-6 시간 걸립니다.

Vivo에서 혈액-뇌 장벽 침투성 분석 결과 사용 하 여 마우스에 붙일 추적기 표시

혈액-뇌 장벽 무결성은 신경계 기능에 매우 중요합니다. Drosophila melanogaster에서는,혈액 두뇌 방벽은 늦은 배아 발생 도중 신경교 세포에 의해 형성됩니다. 이 프로토콜은 D. melanogaster 태아 및 제 3 instar 애벌레에 있는 혈액 두뇌 방벽 대형 및 유지보수를 위한 분석하는 방법을 기술합니다.

초파리 멜라노가스터의 혈액-뇌 장벽 무결성에 대한 분석

여기서 우리는 생체 내 최대 애벌레와 청소년 단계에서 제브라피시 배아 뇌를 이미지화하는 방법을 제시합니다. 전기 생리학적 접근법에서 채택된 이 미세침습 절차는 성숙한 뉴런의 세포 및 세포 세포 이하 세부 사항에 대한 액세스를 제공하며 뇌 기능 및 약물 개입을 특성화하기 위한 광유전학 및 신경 약리학과 결합될 수 있습니다.

두개골과 피부 제거에 의해 깨어 얼룩말 물고기 애벌레와 청소년에서 완전히 활성 뇌 조직의 생체 내 이미징

이 프로토콜은 결과적인 신경 염증 반응과 신경 독성을 연구하기 위해 제브라 피쉬 애벌레 모델에서 뇌실 영역에 지질 다당류를 미세 주입하는 것을 보여줍니다.

신경 염증 및 신경 독성을 평가하기 위해 유충 제브라피쉬에 지질 다당류의 뇌실 미세 주입

저산소 조건(자간전증의 한 측면 모델링)에서 배양된 태반 외식에서 분리된 소형 EV(sEV)가 임신하지 않은 성인 암컷 마우스의 혈액-뇌 장벽을 파괴하는지 여부를 평가하기 위한 프로토콜이 제시됩니다.

저산소성 인간 태반의 작은 세포외 소포에 의한 생쥐 혈액-뇌 장벽의 파괴

서로 다른 시점의 마우스에 두 개의 형광 염료를 투여하여 혈액뇌장벽(BBB) 파괴로 인한 염료 유출을 시각화하는 방법이 개발되었습니다. 동결 보호제로서 글리세롤을 사용함으로써 동일한 샘플에 대한 면역조직화학이 촉진되었습니다.

경미한 외상성 뇌 손상의 마우스 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴 평가

학습하세요 성인 제브라피쉬 Danio rerio에서 에반스 블루 염료를 활용한 혈액-뇌 장벽 투과성 평가 방법을. 이 간단하고 비용 효율적인 프로토콜은 질적 및 정량적 분석을 통해 신경혈관 변화를 연구하는 연구자들에게 유용합니다.

게이트키퍼 시각화: 성인 제브라피쉬의 혈액-뇌 장벽 투과성에 대한 Evan의 파란색 염료 기반 평가

더 많은 동영상 탐색