생쥐의 난소 혈관 기능의 실시간 이미징 및 정량화를 위한 도플러 초음파 검사

본 연구는 비침습적 생체 내 방법을 사용하여 배란 전 소변 난소 혈류를 특성화하는 것을 목표로 합니다. 이 분야는 쥐의 정상적인 생리를 방해하지 않으면서 난소 혈관 재형성을 실시간으로 연구할 수 있는 비침습적 방법이 부족합니다. 먼저, 영상 시스템 뒤쪽에 있는 주 전원을 켜세요.

시스템이 부팅된 후, 카트리지 왼쪽에 있는 컴퓨터 대기 스위치를 켜서 모니터와 컴퓨터를 깨우세요. MS700 트랜스듀서를 가장 오른쪽 포트에 위치한 영상 유닛의 능동 트랜스듀서 포트에 연결하세요. 트랜스듀서 커넥터의 잠금 핀을 포트의 노치와 맞추세요.

커넥터를 완전히 밀어 넣고 잠금 레버를 수직으로 돌려 고정하세요. 소프트웨어 아이콘을 클릭하여 분석 소프트웨어를 실행하세요. 새 항목을 클릭하여 새 연구를 생성하고 드롭다운 메뉴에서 적절한 이름을 선택하세요.

연구 정보 창에서 연구 이름과 시리즈명을 입력하세요. 적용 패키지는 난소, 측정 패키지는 혈관입니다. 프로그램이 열리고 변환기가 자동으로 감지되면, 난소 애플리케이션 패키지를 선택하세요.

다음으로, 심박수 모니터링을 위해 각 전극에 소량의 전극 크림을 발라서 적절한 접촉을 보장합니다. 동물이 완전히 진정되면, 영상 플랫폼의 코 콘으로 스톱콕을 열고 스톱콕을 유도실로 닫아 가스 흐름을 재조정합니다. 마우스를 가열된 영상 플랫폼 위로 조심스럽게 옮기세요.

쥐를 등을 위로 향하게 한 상태에서 엎드린 자세로 눕히고, 마취를 유지하기 위해 코 콘을 코 위에 고정하세요. 생리학적 모니터링을 위해 각 발을 해당 전극 패드에 테이프로 붙이세요. 마취 중 각막 건조를 방지하기 위해 안과 연고를 눈에 바르세요.

발가락 꼬집기 반사법으로 적절한 마취 깊이를 확인하세요. 호흡 속도와 심장 박동, 불편함을 나타내는 움직임, 플랫폼 온도와 같은 동물의 생체 신호를 5분마다 모니터링하세요. 다음으로, 오른쪽 뒷다리에서 중앙선까지 전기 면도기를 사용해 등 오른쪽 아래 사분면을 면도하세요. 척추 옆으로 유지하세요.

체모 제거 크림을 얇게 발라주세요. 1분 후에는 젖은 거즈로 크림을 깨끗이 닦아내세요. 그 후 면도된 부위에 넉넉하고 고르게 초음파 젤을 발라줍니다.

트랜스듀서 프로브를 기계식 스탠드 위에 마우스에 대해 횡방향으로 위치시키고, 방향 노치는 조작자의 왼쪽을 향하게 합니다. 클램프로 프로브를 고정하세요. 제어판의 B-모드 키를 눌러 표준 그레이스케일 영상 창을 활성화하세요.

마우스와 플랫폼이 평평하고 트랜스듀서가 표면에 수직인지 확인하세요. 그 다음 피부를 왼쪽으로 당기고 트랜스듀서를 등 중앙선 쪽, 면도 윗부분 근처에 위치시킵니다. 트랜스듀서를 초음파 젤이 코팅된 면도된 부위에 부드럽게 내리세요.

프로브의 왼쪽 가장자리를 척추와 맞추고, 오른쪽 가장자리를 오른쪽 옆구리 위에 맞추세요. 난소를 식별하려면 먼저 신장을 식별해야 합니다. 신장은 연회색의 큰 타원형 구조로, 피질과 연수질이 있습니다. 영상 플랫폼을 마우스 머리 쪽으로 약간 밀어 난소와 세포막 지방 조직을 드러냅니다.

Cine Store 버튼을 눌러 B-모드 영상을 캡처하세요. 이제 제어판의 파워 도플러 모드를 누르면 저속 혈류에 민감한 혈관을 시각화할 수 있습니다. 도플러 이득을 32에서 55데시벨로, 감도를 5로, 다이내믹 레인지는 15 DR, 속도를 1킬로헤르츠로 조정하세요.

플랫폼을 부드럽게 앞뒤로 움직여 난소 혈관을 가장 잘 관찰하고, 난소 폐문으로 들어가는 난소 동맥, 중앙 연수의 수질관, 그리고 발달 중인 난포 주변의 피질 혈관을 식별하세요. Cine Store를 눌러 파워 도플러 모드에서 난소와 혈관의 영상을 저장하세요. 동맥류와 정맥류를 구분하려면 컬러 도플러 모드를 누르세요.

빨간색은 트랜스듀서 쪽으로 흐르는 흐름을, 파란색은 트랜스듀서 쪽으로 흘러가는 흐름을 나타냅니다. 평균 속도가 더 높은 혈관은 난소 동맥입니다. 펄스파 PW 도플러 버튼을 눌러 샘플 날짜 라인을 띄우세요.

다시 누르면 도플러 스펙트럴 파형이 활성화됩니다. 샘플 게이트를 혈관 루멘 중앙에 위치시킨 후, 각도 노브를 사용해 인소네이션 각도를 60도 이하로 조정하고 흐름과 평행하게 조정합니다. 난소동맥의 경우, 난소에 들어가기 직전에 문을 설치하세요.

수질혈관은 중앙 분기점에 위치시키세요. 피질 혈관의 경우, 성장하는 난포의 기저부에 두세요. Cine Store를 눌러 초음파 이미지와 스펙트럼 파형 모두 저장하세요.

영상 촬영이 끝나면 초음파 젤을 뒤쪽에서 닦아내고 마우스를 조심스럽게 영상 플랫폼에서 제거합니다. 그리고 쥐를 완전히 깨울 때까지 온열 패드 위에 올려놓으세요. 파워 도플러 영상은 인간 융모성 생식선자극 생식선자극 주사 후 1시간 후 수질 혈관 내 융합이 눈에 띄게 증가한 후 8시간 후 기준선으로 돌아갔다가 12시간 후 추가 감소를 확인했습니다.

컬러 도플러 영상은 난소 동맥과 난소 정맥 간의 명확한 구분을 가능하게 했고, 난소 혈관 내 혈관 내 흐름 방향을 개선했습니다. 대표적인 PW 도플러 파형은 호르몬 반응이 있는 쥐의 난소 동맥에서 측정 가능한 최고 수축기 및 끝기 이완기 속도가 뚜렷한 주기를 보였으나, 반응하지 않는 마우스는 신호 흔적이 낮고 파형이 감지되지 않았습니다. 인간 융모성 생식선자극 주사 후 1시간 후, 자극에 반응한 쥐의 난소 동맥, 수막 혈관, 피질 혈관에서 혈류 속도가 증가했으나, 반응하지 않는 마우스에서는 이러한 증가가 관찰되지 않았습니다.

반응하지 않는 쥐에서는 할당된 자리 값으로 표시된 특정 시점에서 피질 혈관 내 속도가 검출 임계값 이하로 떨어졌습니다. 도플러 초음파를 사용해 쥐에서 DLH 급증 후 난소 혈류 속도가 급격히 증가한다는 것을 확인했습니다. 도플러 초음파는 배란 전 기간 동안 난소 혈역학을 반복적이고 비침습적으로 평가할 수 있게 해주며, 이는 다른 방법으로는 달성할 수 없는 것입니다.

정상적인 배란 전 혈역학을 특성화한 후, 향후 연구에서는 이 프로토콜을 활용해 PCOS와 같은 난소 질환 모델에서 혈류 장애를 조사할 수 있습니다.