Name: SMAD2/SMURF2를 모델로 삼은 포유류 세포 용해체에서의 유비퀴틴화 검출 비교 전략 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-17T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: 배우세요 포유류 세포 용해체에서 두 가지 유비퀴틴화 검출 방법을 비교하는 기법을. HEK293T 세포와 SMURF2/SMAD2 모델을 활용하여 단백질 수정 연구에 적합한 방법을 선택하는 데 도움을 줍니다.

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<ol><li>Popovic, D., Vucic, D., Dikic, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitination+in+disease+pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Ubiquitination in disease pathogenesis and treatment.</a> Nat Med. 20 (11), 1242-1253 (2014).</li>
<li>Han, D., Wang, L., Jiang, S., Yang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin-proteasome+system+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin-proteasome system in breast cancer.</a> Trends Mol Med. 29 (8), 599-621 (2023).</li>
<li>Fulcher, L. J., Batley, C., Sobajima, T., Barr, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+as+a+danger+signal+promoting+G1+arrest+after+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Time as a danger signal promoting G1 arrest after mitosis.</a> Trends Cell Biol. 36 (2), 142-153 (2025).</li>
<li>Gao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+linear+ubiquitination+in+regulating+cell+death+and+correlative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">The mechanism of linear ubiquitination in regulating cell death and correlative diseases.</a> Cell Death Dis. 14 (10), 659(2023).</li>
<li>Serratore, V., Lucibello, M., Malanga, D., Viglietto, G., De Marco, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Akt+and+DUBs%3A+A+bidirectional+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Biol+Lett%22%5BJournal%5D)">Akt and DUBs: A bidirectional relationship.</a> Cell Mol Biol Lett. 30 (1), 77(2025).</li>
<li>Kwon, Y. T., Ciechanover, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ubiquitin+code+in+the+ubiquitin-proteasome+system+and+autophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">The ubiquitin code in the ubiquitin-proteasome system and autophagy.</a> Trends Biochem Sci. 42 (11), 873-886 (2017).</li>
<li>Liu, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BDH2+triggers+ROS-induced+cell+death+and+autophagy+by+promoting+NRF2+ubiquitination+in+gastric+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">BDH2 triggers ROS-induced cell death and autophagy by promoting NRF2 ubiquitination in gastric cancer.</a> J Exp Clin Cancer Res. 39 (1), 123(2020).</li>
<li>Cappadocia, L., Lima, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitin-like+protein+conjugation%3A+Structures%2C+chemistry%2C+and+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Rev%22%5BJournal%5D)">Ubiquitin-like protein conjugation: Structures, chemistry, and mechanism.</a> Chem Rev. 118 (3), 889-918 (2018).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ATRA+upregulates+OTUD6B+to+recruit+CD8%2B+T+cells+to+suppress+colorectal+liver+metastasis+by+stabilizing+DDX5%2FSTAT3%2FCXCL11+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">ATRA upregulates OTUD6B to recruit CD8+ T cells to suppress colorectal liver metastasis by stabilizing DDX5/STAT3/CXCL11 axis.</a> Cell Death Dis. 16 (1), 521(2025).</li>
<li>Niu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((USP33+deubiquitinates+PRKN%2FParkin+and+antagonizes+its+role+in+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">USP33 deubiquitinates PRKN/Parkin and antagonizes its role in mitophagy.</a> Autophagy. 16 (4), 724-734 (2020).</li>
<li>Yan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+K63-linked+polyubiquitination+in+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">The role of K63-linked polyubiquitination in cardiac hypertrophy.</a> J Cell Mol Med. 22 (10), 4558-4567 (2018).</li>
<li>Guo, Y., Zhao, Y., Cong, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Met1-linked+ubiquitination+in+cell+signaling+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Met1-linked ubiquitination in cell signaling regulation.</a> Biophys Rep. 10 (4), 230-240 (2024).</li>
<li>Di, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+c-Myc-WDR43+signalling+axis+promotes+chemoresistance+and+tumour+growth+in+colorectal+cancer+by+inhibiting+p53+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resist+Updat%22%5BJournal%5D)">The c-Myc-WDR43 signalling axis promotes chemoresistance and tumour growth in colorectal cancer by inhibiting p53 activity.</a> Drug Resist Updat. 66, 100909(2023).</li>
<li>Liebl, M. C., Hofmann, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+p53+signaling+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">The role of p53 signaling in colorectal cancer.</a> Cancers (Basel). 13 (9), 2125(2021).</li>
<li>Oikawa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD1+deubiquitinase+regulates+NF-%CE%BAB-+and+KEAP1-mediated+inflammatory+responses+and+reactive+oxygen+species-associated+cell+death+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">OTUD1 deubiquitinase regulates NF-κB- and KEAP1-mediated inflammatory responses and reactive oxygen species-associated cell death pathways.</a> Cell Death Dis. 13 (8), 694(2022).</li>
<li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deubiquitinase+OTUD1+stabilizes+NRF2+to+alleviate+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">The deubiquitinase OTUD1 stabilizes NRF2 to alleviate hepatic ischemia/reperfusion injury.</a> Redox Biol. 75, 103287(2024).</li>
<li>Moreau, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+ixazomib%2C+lenalidomide%2C+and+dexamethasone+for+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Oral ixazomib, lenalidomide, and dexamethasone for multiple myeloma.</a> N Engl J Med. 374 (17), 1621-1634 (2016).</li>
<li>Stewart, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carfilzomib%2C+lenalidomide%2C+and+dexamethasone+for+relapsed+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Carfilzomib, lenalidomide, and dexamethasone for relapsed multiple myeloma.</a> N Engl J Med. 372 (2), 142-152 (2015).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+gut+microbial+nitrogen+recycling+and+cellular+uptake+of+ammonium+to+improve+bortezomib+resistance+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Targeting gut microbial nitrogen recycling and cellular uptake of ammonium to improve bortezomib resistance in multiple myeloma.</a> Cell Metab. 36 (1), 159-175.e8 (2024).</li>
<li>De Silva, A. R. I., Page, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ubiquitination+detection+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Ubiquitination detection techniques.</a> Exp Biol Med (Maywood). 248 (15), 1333-1346 (2023).</li>
<li>Choo, Y. S., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+protein+ubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Detection of protein ubiquitination.</a> J Vis Exp. (30), e1293(2009).</li>
<li>Worboys, J. D., Palazón-Riquelme, P., López-Castejón, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+to+measure+ubiquitination+of+NLRs%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Method to measure ubiquitination of NLRs.</a> Methods Mol Biol. 2696, 105-114 (2023).</li>
<li>DeCaprio, J., Kohl, T. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denaturing+lysis+of+cells+for+immunoprecipitation%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Denaturing lysis of cells for immunoprecipitation.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2020 (2), 098616(2020).</li>
<li>Bass, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+technical+considerations+for+western+blotting+applications+to+physiological+research%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Med+Sci+Sports%22%5BJournal%5D)">An overview of technical considerations for western blotting applications to physiological research.</a> Scand J Med Sci Sports. 27 (1), 4-25 (2017).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+Technique%2C+theory%2C+and+troubleshooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: Technique, theory, and troubleshooting.</a> N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).</li>
<li>Crane, J. L., Cao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mesenchymal+stem+cells+and+TGF-%CE%B2+signaling+in+bone+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mesenchymal stem cells and TGF-β signaling in bone remodeling.</a> J Clin Invest. 124 (2), 466-472 (2014).</li>
<li>Gough, N. R., Xiang, X., Mishra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+signaling+in+liver%2C+pancreas%2C+and+gastrointestinal+diseases+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">TGF-β signaling in liver, pancreas, and gastrointestinal diseases and cancer.</a> Gastroenterology. 161 (2), 434-452.e15 (2021).</li>
<li>Tzavlaki, K., Moustakas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">TGF-β signaling.</a> Biomolecules. 10 (3), 487(2020).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+western+blot%5BTitle%5D)+AND+%22J+vis+exp%22%5BJournal%5D)">The western blot.</a> J vis exp. , e5065(2025).</li>
<li>Wu, M., Chen, G., Li, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2+and+BMP+signaling+in+osteoblast%2C+skeletal+development%2C+and+bone+formation%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Res%22%5BJournal%5D)">TGF-β and BMP signaling in osteoblast, skeletal development, and bone formation, homeostasis and disease.</a> Bone Res. 4, 16009(2016).</li>
<li>Jeon, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+miR-15b-SMURF2-HSP27+axis+promotes+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">The miR-15b-SMURF2-HSP27 axis promotes pulmonary fibrosis.</a> J Biomed Sci. 30 (1), 2(2023).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SMURF2+predisposes+cancer+cell+toward+ferroptosis+in+GPX4-independent+manners+by+promoting+GSTP1+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">SMURF2 predisposes cancer cell toward ferroptosis in GPX4-independent manners by promoting GSTP1 degradation.</a> Mol Cell. 83 (23), 4352-4369.e8 (2023).</li>
<li>Pi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+SMURF2+expression+enhances+RACK1+stability+and+promotes+ovarian+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Loss of SMURF2 expression enhances RACK1 stability and promotes ovarian cancer progression.</a> Cell Death Differ. 30 (11), 2382-2392 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 마이크로튜브</td><td>서비스바이오</td><td>EP-150-M</td><td></td></tr><tr><td>100mm TC 처리 배양 접시</td><td>서비스바이오</td><td>CCD-100</td><td></td></tr><tr><td>6웰 디스크</td><td>서비스바이오</td><td>CCP-6H</td><td></td></tr><tr><td>항-FLAG 항체</td><td>단백질 기술</td><td>20543-1-AP</td><td>희석은 IP에 1:200, WB에 1:10000 사용됨</td></tr><tr><td>항-GAPDH 항체</td><td>단백질 기술</td><td>MA5-15738</td><td>희석 사용: 1:10000</td></tr><tr><td>항-HA 항체</td><td>단백질 기술</td><td>51064-2-AP</td><td>희석 사용: 1:10000</td></tr><tr><td>항-IgG 항체</td><td>CST</td><td>#3900</td><td>희석 비율은 IP에 1:200 사용</td></tr><tr><td>항-MYC 항체</td><td>단백질 기술</td><td>60003-2-Ig</td><td>희석 사용: 1:10000</td></tr><tr><td>항-SMAD2 항체</td><td>CST</td><td>#5339</td><td>희석은 IP에 1:200, WB에 1:2000</td></tr><tr><td>브로모페놀 블루</td><td>서비스바이오</td><td>GC307006-5g</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (pH=8.0)</td><td>서비스바이오</td><td>G1207-1L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>ABW</td><td></td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시노팜</td><td>10010618</td><td></td></tr><tr><td>가열/냉각 건조 욕조</td><td>궈청</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T 세포</td><td>ATCC</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>고혈당 DMEM</td><td>서비스바이오</td><td>G4515-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HRP 결합 염소 항쥐 IgG 경쇄 및 nbsp;</td><td>아클론</td><td>AS062</td><td>희석 사용 1:5000</td></tr><tr><td>HRP 결합 마우스 항토끼 IgG 경쇄 &nbsp;</td><td>아클론</td><td>AS061</td><td>희석 사용: 1:10000</td></tr><tr><td>리포8000</td><td>비요타임</td><td>C0533</td><td></td></tr><tr><td>MG132</td><td>알라딘</td><td>M421264</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기</td><td>랩지크</td><td>CF1524R</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 분말</td><td>서비스바이오</td><td>GC102004</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>서비스바이오</td><td>G4202-500ML</td><td></td></tr><tr><td>pCMV-플래그-SMAD2</td><td></td><td></td><td>포유류 발현에 대해</td></tr><tr><td>pCMV-하-우브</td><td></td><td></td><td>포유류 발현에 대해</td></tr><tr><td>pCMV-MYC</td><td></td><td></td><td>포유류 발현에 대해</td></tr><tr><td>pCMV-MYC-SMURF2</td><td></td><td></td><td>포유류 발현에 대해</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>서비스바이오</td><td>G4003-100ML</td><td></td></tr><tr><td>EDTA 없는 프로테아제 억제제 조합</td><td>타겟몰</td><td>C0001</td><td></td></tr><tr><td>단백질 A/G 아가로스 구슬</td><td>비요타임</td><td>P2017</td><td></td></tr><tr><td>PVDF 멤브레인</td><td>바이즈메</td><td>E801</td><td></td></tr><tr><td>SDS 분말</td><td>솔라비오</td><td>S8010-500g</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE 시스템</td><td>Aervicebio</td><td>BVE4-BVT4</td><td></td></tr><tr><td>소닉스</td><td>위브라 셀</td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리스-HCl 화약</td><td>바이오탑</td><td>HST-0372</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>서비스바이오</td><td>GC204003-100ml</td><td></td></tr><tr><td>트립신</td><td>서비스바이오</td><td>G4021-100ML</td><td></td></tr><tr><td>보텍스 믹서</td><td>바이즈메가 친절히 기증하셨습니다</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-머캡토에탄올</td><td>알라딘</td><td>M301573</td><td></td></tr></tbody></table>

smad2/smurf2를 모델로 삼은 포유류 세포 용해체에서의 유비퀴틴화 검출 비교 전략

Comparative Strategies for Ubiquitination Detection in Mammalian Cell Lysates Using SMAD2/SMURF2 as a Model

SMAD2/SMURF2를 모델로 삼은 포유류 세포 용해체에서의 유비퀴틴화 검출 비교 전략

Ubiquitination, a post-translational modification, is a critical regulator of intracellular protein function. Ubiquitination modulates protein functions ...

comparative-strategies-for-ubiquitination-detection-mammalian-cell

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Ubiquitination 세 효소의 집합으로 실시하는 핵심 posttranslational 수정합니다. 이 수정에 관여 유전자의 돌연변이가 여러 가지 인간의 질병와 관련된 있습니다. 여기, 우리는 교양 세포에 단백질 ubiquitination을 감지 프로토콜...

단백질 Ubiquitination의 감지

이 동영상은 순차 효소 캐스케이드를 사용하여 기질 단백질의 SUMOylation을 위한 in vitro 방법을 보여줍니다. 또한, 단백질의 SUMOylated 상태는 전기영동 및 면역블로팅 기술을 사용하여 식별됩니다.

SUMOylation Assay: 면역블로팅을 통해 기질 단백질의 SUMOylation 상태를 검출하는 In vitro 기술

현재 프로토콜은 기능적 상동 deubiquitinating 효소의 활성을 측정하는 방법을 자세히 설명. 전문화 된 프로브에 공유 효소를 검출하고 수정할 수 있도록. 이 방법은 새로운 치료 표적을 식별하는 잠재력을 보유하고있다.

세포주 및 조직 샘플에서 Deubiquitinating 효소의 활성을 측정 방법

우리는 복잡한 생물학적 샘플에서 유비퀴틴화 된 단백질에서 유래 한 diGly 펩티드의 정제, 검출 및 식별방법을 제시합니다. 제시된 방법은 유비퀴티노메 분석의 깊이 수준에 대하여 공표된 방법을 재현가능하고 견고하며 능가합니다.

펩타이드 농축 및 질량 분광법에 의한 단백질 유비퀴틴화 부위 검출

유비퀴틴화는 세포 과정에서 중요한 역할을 하는 번역 후 수정이며, 듀비퀴틴화에 의해 긴밀하게 조정됩니다. 두 반응의 결함은 인간의 병리를 뒷받침합니다. 우리는 정제 된 구성 요소를 사용하여 시험관 내에서 유비퀴틴화 및 듀비퀴틴화 반응을 수행하기위한 프로토콜을 제공합니다.

체외 유비퀴틴화 및 뉴클레오소말 히스톤의 이중화 율법의 비퀴틴화 어설션

이 프로토콜은 설치류 뇌의 다른 세포 구획에서 유비퀴틴-프로테아좀 시스템(UPS) 활성을 효율적으로 정량화하도록 설계되었습니다. 사용자는 동일한 동물의 핵, 세포질 및 시냅스 분획에서 작동하는 UPS를 검사하여 이러한 복잡한 분석을 수행하는 데 필요한 동물의 수와 시간을 줄일 수 있습니다.

설치류 뇌의 세포외 유비퀴틴-프로테아솜 활동 정량화

이 프로토콜은 치료 또는 표현형과 같은 특정 조건과 관련된 이러한 종류의 번역 후 수정 (PTM)의 변경을 식별하기 위해 유비퀴틴 (Ub) 및 유비퀴틴 -좋아요 (Ubls) 특정 프로테오옴을 확립하는 것을 목표로합니다.

유비퀴틴 및 유비퀴틴과 같은 종속 적 번역 후 수정 및 중대한 변경 식별 프로파일링

이 방법은 유비퀴틴 체인 토폴로지의 글로벌 변화에 대한 평가를 설명합니다. 평가는 질량 분광계 기지를 둔 표적 proteomics 접근의 응용에 의해 수행됩니다.

병렬 반응 모니터링에 의한 유비퀴틴 연쇄 분석

본 연구는 E3 유비퀴틴 리구아제 촉매 활성의 분석을 위한 체외 유비쿼터스 분석 프로토콜에 대한 상세한 제공. 재조합 단백질은 대장균 배양과 같은 원핵계를 사용하여 발현되었다.

시험관 내 E3 유비퀴틴 리가제 기능 분석

우리는 포유동물 세포에서 특정 기질 및 E3 유비퀴틴 리가아제의 유비퀴틸화 검정을 위한 상세한 프로토콜을 제공한다. HEK293T 세포주는 단백질 과발현을 위해 사용되었고, 폴리유비퀴틸화된 기질은 면역침전에 의해 세포 용해물로부터 정제되고, SDS-PAGE에서 분해되었다. 면역블롯팅은 이러한 번역 후 변형을 시각화하기 위해 사용되었다.

포유동물 세포 용해물에서 E3 유비퀴틴-리가아제에 의한 기질 유비퀴틸화의 평가

프로토콜은 p53 종양 억제 단백질을 예로 사용하여 포유류 세포로부터 유비퀴틴화된 단백질을 정제하는 단계별 방법을 설명합니다. 유비퀴틴화된 p53 단백질은 엄격한 비변성 및 변성 조건 하에서 세포로부터 정제하였다.

포유류 세포에서 유비퀴틴화된 p53 단백질의 정제

배우세요 포유류 세포 용해체에서 두 가지 유비퀴틴화 검출 방법을 비교하는 기법을. HEK293T 세포와 SMURF2/SMAD2 모델을 활용하여 단백질 수정 연구에 적합한 방법을 선택하는 데 도움을 줍니다.

SMAD2/SMURF2를 모델로 삼은 포유류 세포 용해체에서의 유비퀴틴화 검출 비교 전략

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